21微生物的染色及观察.docx

1、21微生物的染色及观察2.1微生物的染色及观察、染色的基本原理借助细胞对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等物理因素 和细胞与染料发生化学反应而进行的细菌等电点较低，pH值人约在25之间，故在中性、碱件 或弱酸性溶液中，菌体蛋门质电离肩带阴电荷：而碱性染 料电离时染料离子带阳电。因此,带阴电的细菌常和带阳 电的碱性染料进行结合。所以，在细菌学上常用碱性染料 进行染色。二、染料的种类和选择染料分为天然染料和人工染料两种。人然染料冇胭脂虫红、地衣素、石 戏和苏木索等。目刑主婆采用人工染料，幺从煤焦油中捉取获得，是苯的衍 生物.多数染料为难溶于水.而易溶于冇机溶剂中。为使它们易溶于水.通 常制成盐类。染

2、料可按其电离后染料离了所帶电荷的件质.分为酸性染料、碱性染料、 中性（复合）染料和单纯染料四大类.1、 酸性染料这类染料电离頤染料离f带负电，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味 和酸性复红等，町与碱性物质纳合成盐。X培养基肉椭炎分解产酸便dHTi 下降时，细苗所带的正电荷增加，这时选抒酸性染料，易被染色。2、 碱性染料这类染料电离厉染料离子带正电，可与酸件物质结合成盐.微牛物实验牢 一般常用的緘件染村仃美兰、甲基紫、结晶紫、祓性复红、中性红、孔雀绿 和蕃红等，在一般的常况F.细苗易被碱性染料染色。3、 中性（复合）染料酸性染料与碱性染料的结合物叫做屮性（复合）染料, 如瑞脱氏（Wright）染

3、料和基姆萨氏（Gimsa）染料等, 后者常用于细胞核的染色。4、 单纯染料这类染料的化学亲和力低，不能和被染的物质牛成盐, 其染色能力视其是否溶丁被染物而定，因为它们人多数都 属于偶氮化合物，不溶于水，但溶丁脂肪溶剂屮，如紫丹 类（Sudanb）的染料。三、染色微生物染色分为单染法和复染法两种。前咅用种染料使微牛物 染色，但不能鑒别微生物。以染法是用两种或两种以匕染料，有吟别 微生物作用。常用复染浓何革兰氏染色沐和抗酸性染色法以及特殊染 色法（如芽胞、鞭毛、细胞核等）。仅品微生物检验中常用的兄单染 色法和革兰氏染色法。1、单染色法用一种染色剂对涂片进行染色，简使易行，适于进行微生物的形 态观察

4、。在-般怙况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱 性染料结合而彼染色。因此，常用碱件染料进行单染色，如美兰、孔 雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。注：若便用酸性染料，多用刚果虹、伊红、藻红和酸性品红等使用酸性染料时，必 须降低染液的PH值.便其呈现強酸件（低于细瀚*1体等电点八 让繭体带匸电荷.才 易r彼酸性染料染色.单染色法过程：（1）制片在干净的载玻片上滴上一小滴蒸啊水，用接种环进行无菌操作， 挑収培养物少许，置水滴小，9水混介做成总液并涂成直径约1丿里米 的洒层，为避免因菌数过多聚成集团，不利观察个体形态，町在载玻 片侧再加 滴水.从已涂布的闔液中再取-环于此水滴中进行稀释. 涂布

5、成薄层，若材料为液体培养物或固体培养物中洗卜制备的菌液， 则直接涂布丁谶玻片上即可。 ,（2）自然十燥 水或窗液涂片最好在宰温卜使其然卡燥，为了干得快些，町将标本面向 上，乎持坡玻片诩小心在酒粘灯高处微微加热，便水分蒸发，但切 勿紧雒火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。（3）固定固迟的目的：1）杀死微牛物，固泄细胞结构。2 ）保证菌体fil 勺粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗織3）改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的易r染色。方法:利用温.手执伐玻片的端.标本向出 在酒稍灯火焰外圧尽 快的來冋通过34次，共约23秒钟，并不时以载:吸片笛而加热触及皮 肤.不觉过烫为宜（不超过60C）

6、，放直待冷后进行染色。注：在研究微牛物细胞结构时应采用化学固定法。化学固定法常用的 固定剂：酒粘（95%）、酒帖和醴备半的混合物、丙刖、1-2%饿酸 等。饿酸能很快固定细胞但不改变其结构，故较常用。饿酸固运细胞的技术：在菇养皿中放一玻頊.在玻璃上放置玻璃毛细 管，在毛细管中注入少量的1-2%饿酸溶液，同时A皮璃上再放*湿 标本涂片的载玻片.然后把培养血盖匕 经过12分仲后把标本从培 养皿中取出干燥。eg(4)染色：标本固定后，滴加染色液，约13分钟。;i ：整个涂片(或有标本的部分) 2浸在染稻脚单染色过稈：涂片 固定 染 水洗 干燥染色液染色结果特点石碳酸复红繭体呈红色着色快，时间短美兰菌体

7、呈兰色着色慢，时间长，效果清晰草酸彼菌体呈紫色染色迅速，着色深2、复染色法(革兰氏染色法)(1)革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上自很多 差别，染色反应不一样.现在-般i人为革兰氏阳性苗休内含有特殊的 核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢， 不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这足染 色反应的主要依据。(2)阳件菌菌体等电点较阴性菌为低.在相同PH条件下进行染色， 阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色 时的条件要严格控制。例如：在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都町 呈正反应：PH很低时，则町都呈负反应。(3)两类胡的细胞權等对结品紫-碘复合物的通透件也不一致，阳牲 菌透性小,故不易被脱色,阴性歯透性人,易脱色。所以脱色时间, 脱色方法也应严格控制。过程:V燥一定染（见前）舰翔歸敝嘛诰帮綸脱羁瞬貓y册眈（3）复染脱色后再用种染色剂进行染色.勺不披 说色部位形成鲜明的对照，便观察隹氏染 色在洒精脱色后用番红垠后进彳染色，就足复 染。（5） 丁燥若色标本洗净后.将标本晾 干.或用吸水纸把多余的水吸去, 然后晾干或微热烘干.用吸水纸 时.切勿将閑体擦掉。革兰氏染色法