第五章种子生活力和活力测定Word格式.docx

1、（1）测定深度休眠种子；收获后需马上播种的种子；发芽缓慢的种子； 要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于：测定发芽末期未发芽种子的生活力，特别是怀疑有休眠时。（3） 测定种子收获或加工过程中的种子损伤的原因 （如热害、机械损伤、虫蛀等）。（4） 解决发芽试验中存在的问题，如查明不正常幼苗产生的原因； 怀疑杀菌剂、种子包衣的处理效果等。（二）、四唑测定法的原理有生活力的种子活细胞内有脱氢酶，可与氧化还原反应指示剂: 四唑（无色）反应而显色，被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊（triphenyl formazam）。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。Nf C.H

2、 C）除了完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外， 还可能出现一些部分染色的种子。说明在不同部位存在面积大小不同 的坏死组织。判断种子有无生活力，主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及 面积大小， 而不完全取决于染色的深浅。 染色的深浅可以区别健壮程 度。即染色愈深，种子生活力愈旺盛。四唑染色是一酶促反应， 反应不仅受酶活性的影响， 还受底物浓 度、反应温度、pH等因素的影响。（ 三）、 四唑测定法 应用的化学试剂1 、四唑 四唑盐类有多种，常用的是 2，3，5氯化三苯基四氮唑，英文 2, 3, 5triphenyl tetrazolium chloride ,缩写为 TTG（1）特

3、性白色或淡黄色粉剂, 易溶于水,有微毒,使用时不要接触 （少接触）。见光易被还原成粉红色，需用棕色瓶包装，再裹一层黑纸。同样， 配好的四唑溶液也应装入棕色瓶里, 暗处保存, 种子染色也需在暗处 和弱光处进行。（2） 四唑液浓度常用的四唑染色浓度为0.1 %1.0 % （m/v）. 般来说：切开种胚的种子可用0.1 %0.5 %的四唑溶液； 整个胚、整粒种子需用 1.0%的四唑溶液。（3） pH：四唑溶液的pH要求在6.57.5，若溶液的pH不在此范围，反应 不能正常进行。因此,对于游离酸含量高的四唑应当用缓冲液配制。 即一般国产的四唑游离酸含量高, 要用缓冲液配制 （进口的可直接用 蒸馏水配制

4、）。配制方法：称取lg （或0.1g）四唑粉剂溶解于100mL磷酸缓冲液中， 即配成 1.0%（或 0.1%）的四唑溶液；当用酸度计测定时，若四唑液的 pH 值达不到要求，则可用稀 NaOH 或 NaHCO3 溶液加以调节。配好的四唑溶液应保存在棕色瓶里，一般有效期可保持数个月。 若存放在冰箱里，有效期更长。2、磷酸缓冲液：其配方如下：（1）ISTA 及 GB 规程法：首先配两种溶液，然后按比例混合即成。溶液I :称取9.078g KH2PO4 （磷酸二氢钾）溶解于1000ml蒸馏水中； 溶液称取9.472g Na2HPO4 （磷酸氢二钠）或11.876g Na2HPO4.2H2O溶解于100

5、0mL蒸馏水之中。然后取溶液1: 2份和溶液3份混合即成。 以上比较麻烦，也可用北美官方种子检验规程:（2）AOSA规程法：在1000mL蒸馏水中加入5.450g NafPOq和3.790g Na2HPO4充分溶解即成。3、乳酸苯酚透明液: 用于染色后的小粒豆类和牧草种子， 经四唑染色后使种皮、 稃壳 或胚乳变得透明，以便透过这些部分清楚地观察其胚的染色情况。配法: 20mL 乳酸 20mL 苯酚（若苯酚是结晶形式， 则需溶化为液体 ） 40mL 甘油 20mL 蒸馏水混合而成。该药液有毒性， 在使用时防止触及皮肤或衣服等。 配制时最好戴 塑胶薄膜手套，并在通风橱里操作。（四）、四唑测定法的程

6、序 参照 96 版国际种子检验规程 及 95GB:1、试验样品 :随机数取净种子100粒，24次重复（GB 24次重复，ISTA 4 次重复）2、种子预处理 （预措预湿） （1）目的：大部分种子在测定前都需经过预处理。 目的：使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备，促进酶的 活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。因为种子吸湿后，切开、针挑种皮或切开营养组织变得容易， 而干种子则工作困难，并且活细胞内的酶尚未活化，染色效果不良。 因此，预措预湿对正确测定是很重要的。 （2）预措：指在种子预湿前除去种子外部的附属物。包括剥去果壳和 在种子非要害部位弄破种皮。如水稻种子需脱去稃壳；

7、花生剥去果壳；豆科硬实种子需刺破种皮等。 注意：预措不能损伤种子内部胚的主要构造。而大多数种子则不需 预措处理。（3）预湿：是四唑染色测定的必要步骤。 因为吸账种子一般比干种子不易破碎，比较容易切开或刺破种皮。 目前常用预湿方法有二种：1缓慢吸湿：将种子放在纸上或纸间吸湿。适用于：直接浸在水中容易破裂的种子； 已经劣变的种子（陈种子） ； 过分干燥的种子。缓慢吸湿，能较好地解决吸湿和供氧的矛盾。GB 规定：像大豆、菜豆、葱、花生等种子要求缓慢纸床预湿。 禾谷类种子既可水浸预湿，也可缓慢纸床预湿。 缓慢预湿可采用下面两种方法：a 纸床上预湿：小粒豆类种子，如苜蓿、三叶草等种子。b 纸卷或纸间预湿

8、：像大豆、菜豆、豌豆等种子。2快速水浸预湿：将种子完全浸入水中，充分吸胀。因为种子直接浸入水中，吸水快、吸水均匀，可缩短预湿时间。 适用于种子直接浸入水中，不会造成组织破裂的种子。包括水稻、 麦类、玉米等。浸种温度一般采用 20C30C水温。具体种类和浸种时间见农作物种子四唑染色技术规定 。3、 染色前的种子处理种子在染色前需将胚的主要构造和活的营养组织暴露出来， 利于四唑溶液渗透，便于正确鉴定。（p63 图 5 1）表明种子不同切法的部位，常见的有以下几种： （1）不须样品准备：a种皮渗水性良好的小粒豆类种子（如紫花苜蓿和小扁豆等），染色 时就能随着四唑溶液的渗入而吸胀， 并在染色后剥去种皮

9、就可正确鉴 定。这类种子不须样品准备。b、大粒豆类：可采用缓慢吸湿后不须样品准备。 （如菜豆和大豆等）但在染色后观察鉴定前也需剥去种皮，以便鉴定更为可靠。 （2）沿胚纵切取半粒：适用于具有直立胚的大粒禾本科种子。如玉米、麦类和水稻等种子。方法：沿胚纵切， 使胚的主要构造暴露出来， 取其一半用于染色观察。（ 3）剥去种皮：棉花、十字花科种子需剥去种皮或内膜； 瓜类也剥去种皮。方法是：将预湿后的整个种皮剥去。4、 四唑染色将处理好的种子放在小烧杯内， 然后加入适宜浓度的四唑溶液， 以 淹没种子为度，移至一定温度的黑暗恒温箱内进行染色反应。染色时间 ：因种子种类、样品准备方法、生活力的强弱、四唑溶液

10、浓度、 pH 值和温度等因素的不同而有差异，其中 温度影响最大。在2045C范围内，温度每增加5C,其染色时间可减少一半。例如：30C适宜染色时间为6h,35C则只需染色反应3h,40C下仅需1.5h。 一般选择35 C35 C染色：玉米、麦类等禾谷类种子 0.51h豆类种子 34h剥去种皮染色的种子 2 3h具体见农作物种子四唑染色技术 。达到规定时间或染色已很明显时，倒去四唑液，用水冲洗。如果到达 规定时间种子染色仍不够完全，可适当延长染色时间。5、鉴定前处理 书上复杂不进行处理的种子，观察前要适当处理使胚部暴露出来，具体 处理方法规程中都有： （读本 p201-204） 如一些小粒豆类、

11、棉籽沿胚中轴纵切；瓜类除去种皮和内膜； 大粒豆类（大豆、菜豆、花生） ：除去种皮，掰开子叶，露出胚芽 大粒种子可直接用肉眼或放大镜观察；小粒种子最好用 10 100 倍体视镜观察。6 、观察鉴定 测定结果的可靠性取决于检验人员对染色组织和部位的正确识 别、工作经验等综合运用能力。观察鉴定的主要目的是区别有生活力和无生活力种子。 （1）一般鉴定原则：a、 凡是胚的主要构造染成鲜红色，为有生活力种子。b、 凡是胚的主要构造局部不染色，不染色部分超过允许范围， 为不正常种子。c、 凡是完全不染色的为死种子。 不正常种子和死种子均作为无生活力种子。（2）观察的部位：1禾谷类：主要观察胚芽、胚轴、胚根、

12、盾片。鉴别标准：除完全染色的为有生活力种子外，下列有残缺的种子也有生活力: a盾片上部或下部任一端不染色的部分v 1/3b、胚根的顶端：玉米1/3不染色；水稻、高粱2/3不染色； 麦类大部分不染色，但不定根的原始体须染色。胚孚J 果多与种皮X 胚芽鞘1 胚芽！胚轴舌Pr 胚根（黑）艮鞘理解：胚芽必须染色，胚根不染色可以长出次生根。2豆类：有生活力的种子允许不染色的最大面积：a、 胚根顶端不染色：花生为1/3;蚕豆为2/3;其他为1/2.b、 子叶顶端不染色：花生为1/4;蚕豆为1/3;c、 胚芽顶端不染色1/4，蚕豆除外。3瓜类：胚根顶端不染色允许1/2;子叶顶端不染色允许1/2。（胚芽必须染

13、色）4其他种属：（棉属、芸苔属等）胚根顶端1/3不染色；子叶顶端1/3不染色。P70图5- 2小麦种子四唑测定结果的鉴定标准（单子叶）：图中黑色部分表示染成红色，有生活力组织，白色部分表示不染色的死组织1-6有发芽力：1 整个胚染成鲜红色；25.盾片末端不染色；6 .胚根尖端不染色；7-16无发芽力:胚芽不染色；（一点也不行）胚轴不染色；胚的上半部不染色；盾片、胚根和胚根鞘不染色;.整个胚不染色。7 胚根3/4以上不染色 89盾片中部和盾片节不染色； 1011 盾片末端和胚芽尖端不染色；1213盾片不染色； 1415染成模糊的淡红色； 16 de4 5 6图5-E小査种子四哇测定结果的啓走标准

14、I dl a V.图手製色部分袤示染咸红芭.有吃SS力粗织.白色酩介茨示不聲色的堆畑帜L音览护力牛胚聲成解虹色2-5.有览芽力，15片末城未J&色氐冇览芽力，4相尖端恳肛罹幣米聲也 几尤甜芬力，胚根5/4 lit kMi券色g.无翁芽力师芽未誕色轧无溟寿力*於片中部和黛片节去卑耳1仏；C发丼力胚轴:ktl!色11.无发芽力，喈片*用和杯爭尘城未駆色忆.无訪芽力胖的上邛部未染色1乱无產芽力，尚片未染也14-无廉井力用片，師根和杯根角未唏西尢翼芽力.艇駐蛊糊的饭上也IS. X发芽扎赠牛駆*奂色IS 5-i丈豆种子匹腔测定结果的整毘标准引自 Ssnrncl H. G. ,1974）L有爰并力”环全部

15、樂庶懺红国 2一有黨芽力+仅子叶 星离蘇芽澤井少岳来卑芭 証有发芽力.但于叶T超看 21竦少昨未渠邑4.无左奇力.子叶上辭亜聲弗分耒卑 鱼 衣无发芽力*胚辐主辱部位未爆色 氐无S：蘇力, 子叶一平収上耒筮色“或破刼成胚堪和Iff芽巳死亡零图5-3大豆种子四唑测定结果的鉴定结果标准1-3有发芽力：1 .胚染成鲜红色；2.仅子叶远离胚芽部分少量未染色；3.仅子叶下部和边缘少许不染色；4 6无发芽力：4.子叶上部重要部位未染色；（面积少也不行）5.胚根主要部位不染色；6.子叶一半以上未染色。表1农作物种子四唑染色技术规定种名预湿方式及时间h染色前的准备浓度%35 C染色 时间，h鉴定前的处理有生活力

16、种子允许不染色、较弱或坏死的最大面积备注小麦 大麦 黑麦纸间或水中30 恒温水浸种3-4h，或纸 间12ha.纵切胚和四分 之三胚乳。b.分离带盾片的 胚0.10.51a.观察切 面b.观察胚 和盾片a.盾片上下任一端三分之一不 染色。b.胚根大部分不染色，但不定根 原始体必须染色盾片中央 有不染色 组织，表 明受到热 损伤玉米同上纵切胚和大部分 胚乳。观察切面胚根；盾片上下壬一端三分之一 不染色高粱纵切胚和大部分 胚乳a.胚根顶端三分之二不染色。b.盾片上下任一端三分之一不 染色水稻纵切胚和四分之 三胚乳胚根顶端三分之二不染色必要时可 除去内 外稃棉花纸间a.纵切二分之一 种子。b.切去部分

17、种皮。C.去掉胚乳遣迹2-3纵切a.胚根顶端三分之一不染色。b.子叶表面有小范围的坏死或 子叶顶端三分之一不染色有硬实应 划破种皮菜豆 豌豆 绿豆 花生 大豆 豇豆 扁豆 蚕豆纸间6-8无须准备1.03-4切开或除 去种皮，掰 开子叶，露 岀胚芽a.胚根顶端不染色，花生为三分 之一，蚕豆为三分之二，其他种 为二分之一。b.子叶顶端不染色，花生为四分 之一，蚕豆为三分之一，其他为 二分之一C.除蚕豆外，胚芽顶部不染色四 分之一南瓜 丝瓜 黄瓜 西瓜 冬瓜 苦瓜 甜瓜纸间或水中 在 20-30 C水中浸6-8h或纸间24hb.剥去种皮。C.西瓜用干燥布 或纸揩擦，除去表 面粘液2-3h，但 甜瓜1

18、-2h除去种皮 和内膜a.胚根顶端不染色二分之一。b.子叶顶端不染色二分之一。白菜型 油菜 不结球 白菜 结球白 菜 甘蓝型 油菜 甘蓝 花椰菜 萝卜 芥菜30C温水 中浸种3-4h 或纸间5-6ha.剥去种皮。2-4a.纵切种 子使胚中 轴露岀。b.切去部 分种皮使 胚中轴露 岀b.子叶顶端有部分坏死。葱 属（ 洋 葱、韭 菜、葱、 韭葱、 细 香 葱）纸间12a.沿扁平面纵切， 但不完全切开，基 部相连。b.切去子叶两端， 但不损伤胚根及 子叶。0.21.5a.扯开切 口，露岀 胚。b.切去一 薄层胚乳， 使胚露岀a.种胚和胚乳完全染色。b.不与胚相连的胚乳有少量不 染色辣椒 甜椒 茄子

19、番茄纸间水中在20-30 C 水 中3-4h，或 纸间12ha.在种子中心刺 破种皮和胚乳。b.切去种子末端， 包括一小部分子 叶a.撕开胚 乳，使胚露 岀。b.纵切种 子使胚露 岀胚和胚乳全部染色芫荽 芹菜 胡萝卜 茴香水中在 20-30 水中3ha.纵切种子一半， 并撕开胚乳，使胚 露岀。b.切去种子末端 四分之一或三分 之一0.1 -0.56-24a.进一步 撕开切口， 使胚露岀。b.纵切种 子露出胚 和胚乳苜蓿属 草木樨 属 紫云英水中220.5 -1.除去种皮使胚露岀b.子叶顶端三分之一，如在表面 可二分之一不染色。萬苣茼蒿水中在C水中 浸 2-4ha.纵切种子上半 部（非胚根端）。

20、b.切去种子末端 包括一部分子叶a.切去种 皮子叶使 胚露出。b.切开种 子末端轻 轻挤压，使 胚露出。b.子叶顶端二分之一表面不染 色，或三分之一弥漫性不染色向日葵水中3-4纵切种子上半部 或除去果壳除去果壳b.子叶顶端表面二分之一不染 色。甜菜水中18a.除去盖着种胚 的帽状物。b.沿胚与胚乳之 界线切开2448扯开切口 使胚露 岀b.子叶顶端三分之一不染色。菠菜a.在胚与胚乳之 边界刺破种皮。b.在胚根与子叶 之间横切。a.纵切种 子，使胚露 岀。b.掰开切 口，使胚露 岀。7、结果计算与处理根据样品胚部的显色情况，分别计算各重复有生活力种子的百分率。GB/T3543.7-1995对试验

21、样品的规定至少 200粒：即24次重复。 查重复间的最大允许差距：X i X 2 X3 X 4求平均数X（GB :但生活力有二、三次重复值；而发芽试验无二、三次重复值）X最大-X最小与容许差距比较：容许差距重作；容许差距结果正确用x表示。【例】测某种子生活力，三次重复 95%、96%、98%。X = 96.3%; 98- 95 = 3V容许差距 7。若测二次重复：95%、99%。X = 97% 99- 95= 4容许差距6。表2 生活力测定重复间的最大容许差距 GB/T3543.7-1995平均生活力百分率%重复间容许的最大差距24次重复3次重复2次重复99-9836974796895993-

22、947-81091-929-101190898813871484-8615-1781-8318-201578-8021-231676-7724-251773-7526-2871-7229-301869-7031-3267-6833-3464-6635-371956-6338-4555462051-5447-50（五）注意事项：纵切禾谷类种胚时，一定要沿胚中部纵切，使切面显示胚的各部分构造，否则会出现鉴定误差1、若切面不正若保留大的：胚芽是完整的，染色时间短，胚芽可能不染色。 其他地方染色均匀，也属正常有生活力的种子。若保留小的：胚芽与盾片有缝，只要其他部分染色深、均匀， 也有生活力。2、切面粗

23、糙： 切时剥开，部分细胞被撕开，细胞被破坏，表层细胞不染色。所以切面要光滑。这时染成乳白色与不染色是有区别的。（p71 离体胚培养法 : 主要测定发芽缓慢或休眠期长的种子生活力， 主要用于林木种子，农作物种子用的少。 ）四、染料染色法 （GB中无，了解） 同p73（一）测定原理 （TTC法：活细胞染成红色；本法相反：活细胞不染色）有生活力的种子， 其活细胞原生质膜具有选择透性， 当种子浸入 染料后，染料大分子不能进入活细胞内， 其胚部活组织不能被染料染 色；而死的种胚原生质膜丧失选择吸收能力，故可被染料染色。（ 二） 测定方法1 、靛蓝染色法适用于豆类、 谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。 试剂为靛蓝：蓝色粉剂，能缓慢溶于水。 测定方法如下：（1）种子预处理：（100粒X 2次）先将种子去壳，浸入30C水中，充分吸账。浸种时间：小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为 3h， 燕麦、芝麻等 4h； 油菜、花生、棉籽等 6h，蓖麻、红麻、大麻等7h;黍8h;水稻12h;玉米20 h。然后，禾