1、免疫组化步骤取组织、固定、制片（脱水、透明、浸蜡、包埋）、切片、烤片、抗原修复、滴加抗体一、 取组织二、 固定三、 制片1、脱水透明的酒精梯度和时间70%酒精 20min 80%酒精 1h90%酒精 1h 95%酒精 2h95%酒精 2h无水乙醇 15min无水乙醇 15min 无水乙醇 15min二甲苯酒精1:1 15min 二甲苯 25min二甲苯 25min 二甲苯 15min2、 浸蜡：石蜡融化后，在石蜡、中各浸蜡1h3、 包埋四、 切片烤片用切片机切片，取完整组织切片放于37温水中展片，取完整组织于载玻片上，并放入到60的烤箱中烤6个小时五、 脱蜡至水六、 抗原修复配置柠檬酸抗原修复
2、液于微波中煮沸，在高压锅内放入自来水煮沸（不盖锅盖），将装有煮沸的抗原修复液的烧杯置于高压锅内，将水化后的玻片放入煮沸的抗原修复液中，盖上锅盖，待其压力达到最大时维持三分钟七、 取出玻片，水浴逐渐降温直至完全冷却八、 将玻片放置于塑料板上，滴加3%的过氧化氢室温孵育10min，以阻断内源性过氧化氢酶，10min过后PBS冲洗2次3分钟九、 除去PBS（甩干或者吸水纸吸干），每张切片滴加第一抗体（稀释相应倍数），4过夜十、 PBS冲洗3次2分钟，除去PBS液，每张切片滴加聚合物增强剂，室温孵育10min十一、 PBS冲洗2分钟3次，除去PBS，每张切片滴加酶标抗兔聚合物，室温孵育10min十二、 PBS冲洗2分钟3次，除去PBS，每张切片滴加新配制的DAB（二氨基联苯胺），室温孵育210分钟，显微镜观察十三、 苏木精复染：苏木精复染5min，水洗3min，0.1%HCl浸提两次，水洗3min，反蓝液数秒，水洗十四、 脱水透明：70%酒精3min、80%酒精3min、90%酒精3min、无水乙醇3min、二甲苯3min、二甲苯3min十五、封片
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