基因工程考试题库(便携版)..docx

1、基因工程考试题库（便携版）名词解释同裂酶（同切点酶）：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们来源各异，识别的靶序列也各不相同,但切割后都能产生相同的黏性末端,特称为同尾酶。测序酶：是经修饰过的 T7 噬菌体 DNA 聚合酶，是采用缺失的方法， 从外切核酸酶结构域中除去 28 个氨基酸，这样使得 T7DNA 聚合酶完全失去了 3-5外切酶活性，只有 5-3聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。与 klenow 相比优点是：是双脱氧链终止法对长片段进行测序的理想用酶。限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链 DNA

2、分子中特定碱基系列的核酸水解酶。限制-修饰系统中的限制和修饰作用：限制-修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体 DNA 等)，使得外源 DNA 对生物细胞的入侵受到限制； 而生物细胞(如宿主)自身的 DNA 分子合成后，通过修饰酶的作用， 在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制-修饰系统中的修饰作用。5. 限制性片段长度多态性（RFLP）：当 DNA 序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当 DNA 片段的插入、缺失或重复导致基因组 DNA 经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶

3、电泳区分，出现的这种 DNA 多态性称为限制性片段长度多态性。6. 星号活性：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的”反转移性。T-DNA：能导入宿主细胞并插入其 DNA 中发挥作用的 Ti 质粒部分DNA 片段。T-DNA 区：即转移 DNA，能转移并整合在植物细胞核基因组上的、决定植物形成冠瘿瘤的一段 DNA。LTS 和 RTS 对于 T-DNA 的转移和整合是不可缺少的。-互补 ：指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 -半乳糖苷

4、酶（-galactosidase，由1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。11.cos 序列（cohesiveendsite）：DNA 分子两端各有 12 碱基(5-GGGCGGCGACCT-3)的单链互补粘性末端，当 噬菌体进入细菌细胞后，其 DNA 可迅速按碱基互补配对结合形成双链环状DNA 分子。COS 位点：当 DNA 进入细菌细胞后，便迅速粘性末端配对形成双链环状 DNA 分子，这种粘性末端结合形成的双链区域叫做 COS 位点.13. 端粒重复序列（telomeric repeat，TEL）：定位于染色体末端一段序列，用于保护线状的 DNA 不被胞内的核酸酶降解，以形成稳

5、定的结构。14. 自主复制序列：一段特殊的序列，含有酵母菌中 DNA 进行双向复制所必须的信号。22.多克隆位点：含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一段 DNA 片段。23、分子杂交：是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法， 用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在及其分子量大小。24、菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。26、真核细胞原位杂交：是一项组织化学与分子杂交相结合的技术，应条件例如高浓度的核酸内切限

6、制酶、高浓度的甘油、低离子强度、 使探针与固定在载玻片上的细胞组织切片内的变性染色体杂交。用 Mn2+取代 Mg2+以及高 pH 值等。)克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或 DNA 样品的重新处理等。7. 载体(vector): 在基因操作中携带外源基因进入受体细胞的工具。克隆载体：主要用于扩增或保存 DNA 片段，是最简单的载体。主要有：质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、人工染色体（YAC 和BAC）。 YAC（酵母人工染色体）：是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建 的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。 BAC（细菌人工染色体）：是基于大肠

7、杆菌（E.coli）的 F 质粒构建的高通量低拷贝的质粒载体。表达载体是可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体。病毒表达载体：是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所构建成的真核基因转移工具。T-载体：Taq 酶的末端转移酶活性可在 PCR 产物的 3端加上一个不依赖于模板的 A，根据这一特性，为方便进行 PCR 产物的直接克隆而开发出 T-载体。Ti 质粒（tumor inducing plasmid）：是在根癌农杆菌中发现的可决定冠瘿病（即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤）的质粒。大小在200kb 左右。12.粘粒载体：由人工构建的、大小一般在57kb 左右、含有DNA 的

8、 cos 序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。17. 一元载体：含目的 DNA 的中间表达载体与改造后的受体（Ti 质粒）通过同源重组所产生的一种复合型载体。18. 双元载体：是指由两个分别含有 T-DNA 和 vir 区的相容性突变 Ti质粒构成的系统。16.卸甲载体：将 Ti 质粒上的 T-DNA 的致瘤基因全部去掉，仅保留其两边界及与 T-DNA 转移所必需的 25bp 序列而构建成的载体。8. 质粒的相容性：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能够共存则叫相容又叫亲和。质粒的不相容性：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象，出现这种现象的原因主要是它们常常共用同一复制系统。9. 转

9、移性：质粒具转移性是指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。不含 tra 基因的质粒则不具备27、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）：对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或 DNA 上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该 DNA序列在染色体上的位置。28、凝胶阻滞试验：（gel retardation assay）：又叫 DNA 迁移率变动试验（electrophoretic mobility shift assay，EM

10、SA），是用于体外研究 DNA 与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。26. 盒式诱变：就是用一段人工合成具有突变序列的 DNA 片段，取代野生型基因中的相应序列。这就好象用各种不同的盒式磁带插入收录机中一样，故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。27. 定点诱变（寡核苷酸介导；重叠延伸 PCR、大引物 PCR）：（site-directed mutagenesis）是使已克隆基因或 DNA 片段中任何一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。27、体外随机诱变：指随机的在克隆化 DNA 中引入碱基置换突变。28、探针：指用于检测特定基因或转录产物存在或表达的 DNA、RNA

11、或寡核苷酸序列，这些序列在使用之前需标记。29、DNase I 足迹试验：DNase I 足迹试验是一种鉴别 RNA 聚合酶等蛋白质在 DNA 上结合位点的方法，它不仅能找到与特异性 DNA结合的目标蛋白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。30. 衔接物：是指人工合成的由 1012nt 组成的、具有一个或数个限制性内切核酸酸识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。 此方法适用于没有衔接物限制性内切核酸酶酶切位点的外源 DNA 片段。DNA 接头（人工接头）:是指人工合成的含有限制酶识别顺序的核苷酸片段。人工合成的一类具有某种限制性内切酶粘性末端，另一头为平末端的双链寡核苷酸片段。31. 接头

12、分子连接法（DNA 接头连接法）：将具有平末端的外源DNA 片段与人工接头分子在 T4 DNA 连接酶的作用下连接起来；然后与具有同样粘性末端的载体 DNA 分子在 T4DNA 连接酶作用下连接成重组体。32. 转化（transformation）：把重组质粒 DNA 导入受体细胞（大肠杆菌、酵母、动植物细胞等）,使其遗传性状改变的过程。转染（transfection）:把重组的噬菌体或病毒导入受体细胞的过程。相互关系：转化一词严格地说是指，感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体 DNA 分子的生命过程；而转染一词，则是专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体 DNA 分子的生命过程。但从本质

13、上讲，两者并没有什么根本的差别。无论转化还是转染，其关键的因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高膜的通透性，从而使外源 DNA 分子能够容易地进入细胞内部。33. 转化子（transformant）：经转化获得外源遗传物质/DNA 的细胞，是向有功能缺陷的细胞补充相应功能。34、感受态（competence）：作为受体细胞的细菌经一定处理(如冰冷的 CaCl2 溶液）后处于易于接受外源 DNA 的状态。35. “选择（selection）” ，是指通过某种外来附加压力（或因素）的辨别作用，呈现具有重组 DNA 分子的特定克隆类型的一种方法。“筛选（screening）”则是指通过某种特定的方

14、法，从被分析的细胞群体或基因文库中，鉴定出真正具有所需要重组 DNA 分子的特定克隆的过程。36. 启动子：是 RNA 聚合酶识别和结合的一段 DNA 序列，位于基因的上游。是基因表达调控的重要顺式元件，具有以下特征：序列特异性；方向性；位置特异性；种属特异性37. 增强子：是能够增强启动子转录活性的一段 DNA 序列，由多个元件组成，每一个元件可以与一种或多种转录调控因子结合。38. 沉默子(silencer)：是参与基因表达负调控的一种元件（降低转录效率的一段 DNA）平台效应：在 PCR 反应后期，产物的积累按减弱的指数速率增长。原因： 底物浓度因消耗而降低，dNTPorprimers，

15、掺入速度减慢；dNTP 或酶的稳定性下降末端产物抑制（焦磷酸、dsDNA）非特异性竞争（非特异性引物或引物二聚体）特异性产物自身复性（10-8M）高浓度产物下，变性不彻底。RAPD技术：是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组DNA为模板,以单个人工合成的随机多态核苷酸序列(通常为10nt)为引物,在Taq酶作用下,进行PCR扩增。AFLP：以PCR为基础，结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进 行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3端有3个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力聚丙烯酰胺凝胶电泳进行PCR产物分离分开这些扩增产物，从而产生