PBS缓冲液配制方法Word格式.docx

1、一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4?12H2O （磷酸氢二钠）NaH2PO4?2H2O （磷酸二氢钠）Nacl用于细胞培养的 PBS 需含有氯化钾称取 8g NaCI、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4，最后加蒸馏水定容至 1L 即可 0.01MPBS缓冲液称取 NaCI 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保 存备用。PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其

2、配方各异。以下是我的总结：母液的配制：0.2M Na2HPO 4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO 4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：先 配 0.2M PB （pH=7.4 ， 100ml） ： 取 19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。然后只需将0.2M PB （pH=7.4）按相应比例适当稀释 即可，如：0.1M PB （PH=7.4）:取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即

3、可0.01M PB （PH=7.4）:取 50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可0.02M PB （PH=7.4）:取 100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可 若需要NaCL的话，加入NaCL至0.9% （g/100ml）即可。另：其它各种另 PH值的0.2M PB （100ml）配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.568.531.56.662.537.56.756.5

4、43.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB ,磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液（ Phosphate Buffer, PB）试剂： NaH2PO4 2H2O Na2HPO4 12H2O配制方法：配制时，常先配制 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 0.2mol/L 的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB）, 根据需要

5、可配制不同浓度的 PB 和 PBS。（1）0.2mol/L 的 Na2HPO4 ；称取 Na2HPO4.12H2O 31.2g（或 NaH2PO4 H2O 27.6g）加重蒸水至 1000ml 溶解。（2）0.2mol/L 的 Na2HPO4:称取 NaHPO4.12H2O 71.632g （或Na2HPO4 7H2O 53.6g 或 Na2HPO4 2H2O 35.6g）加重蒸水至 1000ml 溶解 （ 3）0.2mol/L pH7.4 的 PB 的配制：取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4和 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4 12H2O,充分混合即为 0.2m

6、ol/L 的 PB（pH约为7.47.5） o若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来 加以调整，室温保存即可。0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（ pH5.78.0）pH 0.2mol/L NaH2PO4（ml） 0.2mol/L Na2HPO4（ml）92.090.010.085.015.051.049.045.055.039.061.033.067.028.072.023.019.081.016.084.013.087.089.593.0关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我 会把最终的正确解答整理出来，提供给

7、大家。PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution ）、2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明，生物学上常用的 PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosp hate buffered soluti on）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCI 8.0gKCI 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为 Na2HPO4 1

8、2H2O，则为 2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115C高压 灭菌10min15min,存在4C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细 胞分散剂以及洗涤细胞培养物。我们用的都是第二种问题1:磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium）,为什么用第三种或第一种呢：这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同 的汉语翻译倒是第一次听说。我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和 PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO

9、4+ KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同 PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是 NaCI和KCl调节离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。：问题2:既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的N ACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入 K离子的是不是因 为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一 说啊？我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢 了，血清里面又没有细胞，何来 NA-K泵一说啊？ 我没说血清 撒。 我们用的又没加K，我是说加了 K的的问题3:不加NACL会怎么样啊？多省钱啊在中和磷酸盐缓冲液中，NaCI的主要作用应当是保持一定的离 子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白 质都会变性，抗体当然不例外。ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少 量蒸馏水中，稀释到100毫升。鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸 馏水稀释到100毫升。两栖类需用的生理盐水浓度是 0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用 蒸馏水稀释到100毫升。/size/font