原药材质量标准分析方法验证Word文件下载.docx

1、分别取60干燥至恒重的当归及黄芪药材细粉5份，每份约0.50g，精密称定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取2小时，残渣挥干溶剂后，再继续以水分别回流提取1.0h、2.0h、3.0h、4.0h、5.0h，反复洗至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml具塞干燥试管中，采用改良后的苯酚-硫酸法测定吸光度，计算含量，结果见表1-1。表1-1 水提不同提取时间对当归含量测定的影响结果样品提取时间（h）当归多糖含量（%）黄芪多糖含量（%）11.07.5685.50122.08.5996.51133.08.5836.60044.08.5946.58955.08.5806.590从

2、表1-1可知，水提提取时间为2.0h时，药材含量达到最大值且保持恒定，延长提取时间药材含量变化不大，故选择提取时间为2.0h。2.1.4 供试品溶液的制备 分别取60干燥至恒重的当归及黄芪药材细粉约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1小时，残渣挥干溶剂后，再继续以水回流提取2小时，反复洗涤残渣及烧瓶至250ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，备用。2.1.5 最大吸收波长选择 取2.1.1项下对照品溶液，在200nm-700nm波长间进行紫外吸收光谱扫描，最大吸收波长为490nm，确定选择490nm作为检测波长。2.1.6 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0ml，2.0m

3、l，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分别置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液1ml，置具塞试管中，分别加5苯酚溶液0.6ml，混匀，迅速加入硫酸3.0ml，摇匀，于90水浴中15分钟，取出，置冰水浴中15分钟，取出，以相应试剂为空白，照紫外可见分光光度法（附录A），在490nm的波长处测定吸光度，结果见表1-2。以吸光度为纵坐标，葡萄糖取样量为横坐标，绘制标准曲线，可得回归方程：y=0.0045x-0.0011，r=0.9995（n=6）。葡萄糖在24.24145.44 g范围内，与吸光度呈良好的线性关系，结果见图1-1。表1-2 葡萄糖线性范围考察取样量（g

4、）吸光度24.240.11548.480.20972.720.33096.960.433121.200.554145.440.655图1-1 葡萄糖标准曲线Fig 1-1 Standard Curve of glucose2.1.6 精密度试验 精密量取同一供试品溶液，按标准曲线项下方法操作测吸光度，重复测定6次，求得吸光度值的RSD值为0.33%。结果见表1-3，说明仪器的精密度符合要求。表1-3 精密度试验结果测定次数吸光度A0.3870.3860.3890.3886RSD（%）0.332.1.7 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液，按标准曲线项下方法操作，每10分钟测定一次吸光度，到1小

5、时后改为30分钟测一次，求得多糖含量的RSD值为1.02，结果见表1-4，测定值在120分钟内保持稳定。以下吸光度的测定均在120分钟内完成。表1-4 稳定性试验结果测定时间（min）多糖含量（）8.491108.380208.602308.447408.647508.624608.536901208.5131.022.1.8 重现性试验 取60干燥至恒重的当归药材细粉6份，精密称定，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按标准曲线项下方法操作分别测定吸光度，计算多糖含量，求得多糖含量值RSD值为1.68，结果见表1-5，表明方法重现性良好。表1-5 重现性试验结果多糖含量（%）8.7108.8

6、958.5058.6098.519平均含量8.6401.682.1.9 加样回收率试验 取上述已知多糖含量的当归药材细粉6份，每份约0.125g，精密称定，精密加入浓度为2.111 mg/ml标准葡萄糖对照品溶液5 ml按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按标准曲线项下方法操作分别测定吸光度，计算多糖含量，计算回收率，结果见表1-6。平均回收率为99.12%，RSD值1.96%。结果表明：本法回收率较好，方法可行。表1-6 加样回收率试验结果取样量（g）样品含量（mg）对照品加入量（mg）实测量（mg）回收率（）平均回收率（）0.124210.7010.5620.9797.250.125610

7、.8221.61102.180.125710.8321.3399.4399.121.960.125410.8021.2298.670.125510.8121.39100.190.125010.7721.0196.972.1.10 当归药材中多糖含量测定 取60干燥至恒重的当归药材细粉三份，每份约0.25g，精密称定，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按标准曲线项下方法操作测定吸光度，计算多糖含量，求得当归药材中平均多糖含量为8.58，结果见表1-7。表1-7 当归药材中多糖含量测定结果平均多糖含量（）0.25018.440.24988.548.580.25008.762.2 黄芪药材中多糖含

8、量测定方法本试验采用比色法对药材中的含量进行测定，建立了含量测定方法。2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经105干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.03260g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水葡萄糖0.3260mg）。2.2.2 0.2%蒽酮-硫酸溶液的配制 称取蒽酮粉末0.2g，置100ml棕色量瓶中，加硫酸至刻度，摇匀，即得。2.2.3 供试品溶液的制备67 取黄芪药材粗粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，加热回流1.5h，用脱脂棉滤过，再重复提取2次，三次滤液合并，浓缩，移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取2 ml，加乙

9、醇10 ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置25 ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2 ml，置10ml具塞干燥试管中，备用。2.2.4 供试品溶液制备方法的考察与确定 2.2.4.1 加水量的考察 取黄芪药材粗粉4份，每份约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加水50ml、100ml、150ml、200ml，加热回流1h，用脱脂棉滤过，滤液浓缩，移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取2 ml，加乙醇10 ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置25ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2 ml，测定吸光度，计算含量，结果见表1-8和图1-2。表1-8 不同溶剂用量对含量测定的影响结果加水量

10、（ml）4.8121007.8741507.7022007.774图1-2不同溶剂用量对含量测定的影响结果从表1-8和图1-2可知，加水量为100ml时，药材含量达到最大值且保持恒定，故选择加水量为100ml。2.2.4.2 提取时间的考察 取黄芪药材粗粉5份，每份约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，分别加热回流0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h，用脱脂棉滤过，滤液浓缩，移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取2 ml，加乙醇10 ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置25ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2 ml，测定吸光度，计算含量，结果见表1-9和图1-3。表

11、1-9 不同提取时间对含量测定的影响结果0.57.5988.1251.58.5972.58.585图1-3 不同提取时间对含量测定的影响结果从表1-9和图1-3可知，提取时间为1.5h时，药材含量达到最大值且保持恒定，延长提取时间药材含量变化不大，故选择提取时间为1.5h。2.2.4.3 提取次数的选择 取黄芪药材粗粉5份，每份约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100mll，加热回流1.5h，分别再重复提取0、1、2、3、4次，用脱脂棉滤过，滤液浓缩，移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取2 ml，加乙醇10 ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置25ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2 ml，测定吸光度，计算含量，结果见表1-10和图1-4。表1-10 不同提取次数对含量测定的影响结果提取次数（次）7.8698.75010.1309.9739.702图1-4 不同提取次数对含量测定的影响结果从表1-10和图1-4可知，次数对多糖提取有影响，随着次数增加多糖含量上升，提取次数为三次时，药材含量达到最大值且保持恒定，增加提取次