trizolLS试剂使用中文说明书Word下载.docx

1、分离的蛋白质可以用于Western Blots, recovery of some enzymatic activity, and some immunoprecipitation.注意：TRIzol LS试剂适用于液体样品（如，血液和病毒制品）。TRIzol LS试剂与TRIzol试剂仅在它们成分的含量上不同，TRIzol LS试剂的浓度更高，因此相对于同个样品时，TRIzol LS试剂需要量更少。不要将未稀释的TRIzol LS试剂用于固体样品。处理固体样品时，TRIzol LS试剂没有TRIzol试剂效果好，收率要低些。警告TRIzol LS试剂含有的成分具有毒、腐蚀性和刺激性，如果处理

2、不慎会有危害健康。请在通风橱里操作，并穿好实验服、戴好手套和安全眼镜。避免直接接触TRIzol LS试剂，会导致皮肤、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化学灼伤。如果万一接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗15min，必要时去医院护理。如果吸入了气体，立刻到通风地方呼吸新鲜空气，必要时去医院护理。内容和贮存TRIzol LS试剂有100ml和200ml两种规格的，室温运输和贮存。妥善保管，1年内性质都很稳定。使用目的仅用于研究，不能用于人或动物的诊断或治疗。需要材料分离RNA、DNA和蛋白质还需要下列材料，但是我们未提供分离RNA时，需要：氯仿；异丙醇；75%乙醇（DEPC水处理过）；无RNase水

3、或者0.5%SDS；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管；水浴槽（55-60）。分离DNA时，需要：100%乙醇；75%乙醇；0.1M柠檬酸钠（10%乙醇）；8mM NaOH；聚丙烯微量离心管。分离蛋白质时，需要：0.3M盐酸胍（95%乙醇）；1%SDS；样品准备样品均质化1.确定样品类型，在室温下如下表操作。TRIzol LS试剂与样品的体积比为3:1，一定要按指定的量加入TRIzol LS试剂，否则提取RNA会有DNA污染。当样品少量（106细胞或者10mg组织）或者样品体积0.25mL，为方便提取RNA，需用无RNase水调整样品体积到0.25ml。样品类型为生物液体时，

4、操作步骤：1.每0.25ml样品加入0.75mlTRIzol LS试剂；2.移液器上下吹匀几次，使样品均匀。污染物质含量高的生物液体（如，全血）应该先用无RNase水按1:1稀释。样品类型为组织时，操作步骤：1.每50-100mg组织样品或者0.25ml组织悬液加入0.75mlTRIzol LS试剂；2.高速搅拌器混匀样品。采集样品后要立即处理和冷冻组织样品，不能处理未稀释的固体样品。样品类型为单层贴壁细胞时，操作步骤：1.吸出培养皿中的培养液；2.每10cm2表面积的培养皿加入0.3-0.4mlTRIzol LS试剂,直接加到培养皿里细胞上；3. 移液器上下吹匀几次，在培养皿里直接裂解细胞。

5、不要在培养皿中加水混匀，粘附在皿上的残留培养液足够了。样品类型为悬浮细胞时，操作步骤：1.离心去除培养液获得细胞；2.每0.25ml样品（来自动植物或者酵母细胞5-10*106，或者细菌细胞1*107）加入0.75mlTRIzol LS试剂；加入TRIzol LS试剂之前切忌洗涤细胞，避免增加mRNA降解机率；3. 移液器上下吹匀几次，裂解细胞，对于酵母或者细菌细胞，可能还需要高速搅拌器来充分裂解。2.（可选）当样品里脂肪、蛋白、多糖或者胞外物质（如，肌肉、脂肪组织或者块茎植物等材料），需要再加个分离步骤，移除样品里难溶物质。如果你还需要回收样品里DNA，就不能做此步。具体步骤：1.混匀样品（

6、如前面步骤1所述）后，4下，12,000*g离心样品10min；离心后沉淀物质包含ECM、多糖和高分子量的DNA，RNA在上清液里，若样品富含脂肪，在上清液上面还有脂肪层；2.移除覆盖的脂肪层；3.将澄清的上清液移到新的离心管中。3.进行相分离，或者储存已混匀的样品。此样品能在室温放置几个小时，或者在-60到-70至少一个月。相分离1.室温静置已混匀样品（见混匀样品步骤）5min。2.每0.75mlTRIzol LS试剂加入0.2ml氯仿。盖紧离心管的盖子。3.使劲地手摇离心管15s。4.室温静置2-15min。5.4下，12,000*g离心样品15min。混合物被分为3层，上层是澄清的水相，

7、中间层，下层是红色的酚-氯仿相，只有RNA被排除在水相里。上层水相体积约占TRIzol LS试剂最初体积的70%。6.倾斜离心管为45，小心地用移液器吸走水相，避免吸到中间层或者有机层。7.将水相移到新的离心管，然后进行RNA分离步骤。8.如果需要分离DNA和蛋白质，则保持中间层和酚-氯仿相有机层。详见DNA分离步骤和蛋白质分离步骤。有机相可在4保存过夜。RNA分离步骤当制备和处理RNA时，需要采取适当措施避免RNase污染。RNA沉淀1.（可选）当沉淀从少量样品（10mg组织）提取的RNA，需要添加5-10g不含RNase的糖原作为水相的载体。糖原是RNA的辅助沉淀剂，浓度4mg/ml时不会

8、抑制第一链合成，也不会抑制PCR。2.每0.75mlTRIzol LS试剂加入0.5ml100%异丙醇到水相。3.室温静置10min。4.4下，12,000*g离心10min。离心前，RNA通常看不见，离心后，在离心管底部和侧面可见丝状沉淀物。5.进行RNA洗涤和重悬RNA洗涤和重悬1.移走离心管里上清液，只留RNA沉淀。2.每0.75mlTRIzol LS试剂加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀。涡旋，混匀样品。3.4下，7500*g离心5min，弃上清液。4.真空或者空气干燥RNA沉淀5-10min，不要用真空离心干燥机干燥RNA沉淀。不要让RNA沉淀干燥太彻底，否则RNA沉淀溶解度降低，

9、会使A260/280200g）时，重复洗涤两次。5.每0.75mlTRIzol LS试剂加入1.5-2ml75%乙醇。DNA样品在75%乙醇4能保存数月。6.室温静置10-20min，不定时轻轻地上下倒置混匀。7.4，2000*g离心5min，弃上清液。8.真空或者空气干燥DNA沉淀5-10min，不要用真空离心干燥机干燥RNA沉淀。9.以0.20.3 g/L 浓度用8mM NaOH重悬DNA，每50-70mg组织或者1*107细胞加入8mM NaOH 0.3-0.6mL。我们高度建议用温和碱溶液重悬DNA，因为分离的DNA在水或者Tris缓冲液中重悬效果不好。10.4，12,000*g离心1

10、0min，移走不溶物质。11.将含DNA的上清液转移到新的离心管中，若需要，用HEPES调节PH，进行下游操作。DNA能在4保存过夜，要想长期保存，则需用HEPES调节PH7-8，添加1mM EDTA，保存在4或者-20。DNA和RNA产量测定用RNA和DNA在260nm和280nm处的吸收值测定浓度。预期产量下表列出了各种来源材料提取RNA（A260/2801.8）和DNA（A260/280为1.6-1.8）的标准产量蛋白分离步骤从DNA沉淀步骤后留下来的酚-氯仿层分离蛋白质，蛋白质沉淀或者蛋白透析。蛋白质沉淀1.每1mlTRIzol LS试剂加入1.5ml异丙醇到酚-氯仿层。2.室温静置1

11、0min。3.4，12,000*g离心10min，保留沉淀的蛋白，弃上清液。4.对蛋白沉淀进行蛋白洗涤。蛋白洗涤1.准备洗涤液，即：0.3M盐酸胍溶于95%乙醇。2.每1mlTRIzol LS试剂加入2ml洗涤液，洗涤蛋白沉淀。3.室温静置20min。 蛋白样品可在0.3M盐酸胍-95%乙醇，4下保存一个月或者-20至少保存一年。4.4，7500*g离心5min，弃洗涤液。5.重复步骤2-4，两次。6.洗涤3次后，加入2ml100%乙醇，涡旋。7.室温静置20min。8.4，7500*g离心5min，弃乙醇洗涤液。9.空气干燥蛋白沉淀5-10min，不要干燥太彻底。10.进行蛋白重悬步骤。蛋白重悬1.加1%SDS200L,用移液管上下吹打直到蛋白重悬。为了彻底溶液蛋白沉淀，可能需要将蛋白沉淀在水浴槽50孵育。2.4，10,000*g离心10min，让不溶物质沉淀。3.将含有蛋白