附录8检测方法Word文档格式.docx

1、4.7 甲酸：4.8 无水硫酸钠。4.9 1%乙酸乙腈溶液：取冰乙酸10 mL，用乙腈稀释至1000 mL。4.10 50%乙腈水溶液：取50 mL乙腈，用水稀释至100 mL。4.11 0.1%甲酸水溶液：取1 mL甲酸，用水稀释至1000 mL。4.12 金刚烷胺、D15-金刚烷胺标准贮备液：分别精密称取10 mg金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准品分别于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准贮备液，-20以下保存，有效期3个月。4.13 金刚烷胺、D15-金刚烷胺标准工作液：分别精密量取1 mg/mL的金刚烷胺和D15-金刚烷胺

2、标准贮备液0.1 mL，分别于100 mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度，配制成金刚烷胺浓度为1 g/mL，D15-金刚烷胺浓度为1 g/mL的标准工作液，28保存，有效期2周。4.14 净化吸附剂：PSA（乙二胺-丙基硅烷），粒度40 m。5 仪器和设备5.1 液相色谱串联质谱仪且配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 天平：感量0.01 g。5.3 分析天平：感量0.00001 g。5.4 均质机。5.5 涡旋混合器。5.6 旋转蒸发仪。5.7 离心机：转速3 000 r/min。5.8 高速离心机：转速10 000 r/min。5.9氮吹仪。5.10滤膜：0.22 5.11针式过滤器：内填有50m

3、g的PSA净化吸附剂，滤膜孔径0.22 6 试料的制备与保存6.1 试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。取适量新鲜或冷藏的空白或供试禽蛋，去壳后混合均匀。取匀浆后的供试样品，作为供试试料。取匀浆后的空白样品，作为空白试料。取匀浆后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2 试料的保存-20以下保存。7 测定步骤7.1 提取称取试料2.0 0.05 g（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入D15-金刚烷胺标准工作液20 l。然后加入1%乙酸乙腈溶液10 mL，漩涡2 min，3000 r/min离心5 min，上清液转入另一50 mL离心管中，

4、重复提取一次，合并两次上清液，备用。7.2 净化备用液中加入无水硫酸钠3 g，正己烷10 mL，涡旋1 min，3000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100 mL鸡心瓶中，40水浴下旋转蒸干，用1.0 mL甲醇溶解残渣。（1）加入PSA 50mg，涡旋30s，取上清液过滤膜至1.5 mL试管中；或者（2）直接匀速通过针式过滤器，呈滴状流入1.5 mL试管中。量取滤液0.5 mL于离心管中，40氮气吹干，加入50%乙腈水溶液0.5 mL，涡旋30s，10000 r/min离心5 min，取上清液供上机测定。7.3 标准曲线的制备溶剂标准溶液：准确量取金刚烷胺和D15-金刚

5、烷胺标准工作液适量，用50%乙腈水溶液稀释配制成金刚烷胺浓度为2、4、10、20、100、200 g/L，D15-金刚烷胺浓度均为20 g/L的金刚烷胺系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定。基质匹配标准溶液：取空白猪肝和猪肾试料，除不加D15-金刚烷胺标准工作液外，均按上述方法处理分别制得其空白基质溶液，准确量取金刚烷胺和D15-金刚烷胺标准工作液适量，分别用猪肝和猪肾的空白基质溶液稀释，配制成金刚烷胺浓度为2、4、10、20、100、200 g/L的系列猪肝和猪肾基质匹配标准溶液，临用现配，供液相色谱-串联质谱测定。7.4 测定 7.4.1 色谱条件色谱柱：C18，1502.1mm，粒径3

6、.5m，或相当者；流动相：A为0.1甲酸水溶液，B为甲醇；流速：0.3 mL/min；进样量：10 L；预平衡时间：2min；流动相梯度洗脱程序见表1：表1 梯度洗脱程序时间（min）A（%）B（%）曲线类型90101.5维持不变2线性变化55.17.4.2 质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应离子监测（MRM）；脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体。喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度。监测离子参数情况见表2。表2 金刚烷胺和D15-金刚烷胺特征离子参考质谱条件化合物定性离子对m/z定量离子对去簇电压（DP）/V碰撞能（CE）/eV金刚烷胺1

7、52.0135.0501893.04840D15-金刚烷胺167.3150.3357.4.3 定性测定通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%；试样特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断试样中存在金刚烷胺残留。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20% 至 50%10% 至 20%10%允许的相对偏差20%25%30%7.4.4 定量测定取试样溶液、溶剂标准溶液或基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，按内标法

8、以峰面积比定量，标准溶液及试样溶液中金刚烷胺和D15-金刚烷胺峰面积比均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，典型的金刚烷胺标准溶液、空白试样溶液和空白试样添加金刚烷胺溶液中特征离子的质量色谱图分别见附录A。7.5 空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行测定。8 结果计算和表述单点校准： （1）或标准曲线校准，由：（2）求得a和b，则 （3）试料中金刚烷胺的残留量（g/kg）按下式计算： （4）式中：X 供试试样中金刚烷胺残留量，g/kg。Ci 试样溶液中金刚烷胺浓度，g/L。Cis 试样溶液中D15-金刚烷胺浓度，Cs 标准溶液中金刚烷胺浓度，Cis 标准溶液中D15-

9、金刚烷胺浓度，Ai 试样溶液中金刚烷胺峰面积。Ais 试样溶液中D15-金刚烷胺峰面积。As 标准溶液中金刚烷胺峰面积。Ais 标准溶液中D15-金刚烷胺峰面积。V 溶解残渣的甲醇体积，mL。m 供试试样的质量，g。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 检测方法的灵敏度、准确度和精密度9.1 灵敏度本方法的检测限为1 g/kg，定量限为2 9.2 准确度 本方法在2 g/kg100 g/kg添加浓度水平上的回收率为70%120%。9.3 精密度 本方法批内相对标准偏差15%，批间相对标准偏差20%。附录A（资料性附录）（167.3150.3）（15

10、2.0135.0）附图A.1金刚烷胺标准溶液特征离子质量色谱图（4 g/L）附图A.2空白猪肉试样特征离子质量色谱图附图A.3空白猪肉添加金刚烷胺特征离子质量色谱图（2 g/kg）附录2动物性食品中四环素类药物残留量的测定 液相色谱法1 . 范围本标准规定了动物性食品中四环素类药物残留量检测的制样和液相色谱的测定方法。本标准适用于猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏和肾脏，猪和鸡的皮+脂肪和鸡蛋、牛奶、鱼肌肉、虾肌肉中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量的检测。2. 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版

11、本（包括所有的修改单）适用于本文件。3. 原理试样中残留的四环素类药物，经EDTA2Na-Mcllvaine缓冲溶液提取，HLB固相萃取柱串联LCX固相萃取柱净化，高效液相色谱-紫外法测定，以外标法定量。4. 试剂与材料4.1 盐酸土霉素标准品：含量97.0%；盐酸四环素标准品：含量97.5%；盐酸金霉素标准 品：含量93.1%；盐酸多西环素标准品：含量98.2%。4.2 甲醇：4.3 乙腈：4.4 三氟乙酸4.5 二氯甲烷4.6 乙二胺四乙酸二钠4.7 枸橼酸 4.8 磷酸氢二钠4.9 草酸4.10 硫酸4.11 钨酸钠 4.12 HLB固相萃取柱：500 mg/6 ml，或相当者。4.13 LCX固相萃取柱：4.14 0.1 mol/L柠檬酸溶液：取柠檬酸21.01 g，用水溶解并稀释至1 000 mL。4.15 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠71.63 g，用水溶解并稀释至1 000 mL。4.16 Mcllvain 缓冲溶液（pH4.0）：取0.1 mol/L枸橼酸溶液1 000 mL、0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液625 mL，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至4.00.05。4.17 EDTA 2Na-Mcllvaine缓冲溶液：取乙二胺四乙酸二钠60.5 g，加Mc