1、转化:受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。停滞效应:PCR中后期,随着目的DNA扩展产物逐渐积累,酶的催化反应趋于饱和,DNA扩增产物的增加减慢,进入相对稳定状态,即为停滞效应,又称平台期。逆转录PCR:以mRNA为原始模板进行的PCR反应。PCR: 即聚合酶链式反应。在模板,引物,4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。-互补(-complementation):指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中,插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列(又称-肽),该序列不
2、能产生有活性的-半乳糖苷酶。感染(infection)特指以噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。其中,由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导(transduction)。47、转染(transformation)指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。二、填空题(20%)1、DNA片段重组连接的方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。2、感受态细胞是指 具有摄取外源DNA分子能力的细胞。3、噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时,包装长度为野生型D
3、NA的75105%。5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶,化学合成的寡核苷酸引物,四种dNTP,合适的缓冲液体系。6、核酸探针包括: cDNA探针;基因组DNA探针;寡核苷酸探针和RNA探针。7、部分酶切可采取的措施有:(1)_(2)_ (3)_等。(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性: (1)_; (2)_的活性。枯草杆菌蛋白酶;(1)5-3合成酶的活性;(2)3-5外切核酸酶9、为了防止DNA的自身环化,可用_去双链DNA_。碱性磷酸酶;5端的磷酸基团1
4、0、基因工程中有3种主要类型的载体: _、_、_。质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体11、pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于 ,它的四环素抗性基因来自于 ,它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl; pSCl01;pSF2124(R质粒)13、DNA重组连接的方法大致分为四种:(1)_(2)_ (3) _(4)_ _。(1)黏性末端连接; (2)平末端连接; (3)同聚物接尾连接; (4)接头连接法14、差示杂交(differential hybridization)技术需要_。两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中
5、不能表达这些基因16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_。基因组DNA克隆; 基因组DNA文库17、根据Northern杂交的结果可以说明:_。外源基因是否进行了转录18、在_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。Southern印迹19、可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有_和_的活性。53合成酶;3 5外切核酸酶20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素: (1)_ (2)_(3)_。(1)克隆的是完整的基因;(2)使用的是
6、表达载体;(3)不含内含子21、放射免疫筛选的原理基于以下三点:(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;(2)同一个抗原可以同几种抗体结合; (3)抗体能够被标记22、黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体,它的复制子来自 、COS位点序列来自 ,最大的克隆片段达到 kb。质粒;噬菌体; 4523、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_,第二、三两个字母取自_,第四个字母则用_表示。属名的第一个字母;种名的前两个字母;株名24、第一个分离的限制性内切核酸酶是_;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_。EcoK;EcoRl25、切口移位(nick transl
7、ation)法标记DNA的基本原理在于利用_的_和_的作用。DNA聚合酶I:5一3外切核酸酶;合成酶26、就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:_、_、_。另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 复制区: 含有复制起点;选择标记: 主要是抗性基因;克隆位点: 便于外源DNA的插入27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ,Amp 抗性基因则是来自 。pBR322和M13;转座子28、噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:一是 ; 二是 。它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DN
8、A的扩增;对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别: (1)_ (2)_。(1)印迹的对象不同:Northern是RNA,Southern是DNA;(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件30、限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的 限制 和对自身DNA的 修饰 来实现的。31、II型限制酶既具有 识别位点 的专一性,也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性
9、(RFLP)。33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄人DNA。0C;42C34、野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:(1) (2) (3) 。(1)分子量大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记35、形成平末端的方法有: 用产生平末端的限制酶切,用S1核酸酶切除粘末端 ,用DNA聚合酶填平粘末端。36、回收DNA片段时,在确定DNA条带位置时,应使用 长 波长紫外灯,以最大限度减少对DNA的照射损伤。37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型, m-表示 修饰缺陷型 ,rec-表示 重组缺陷型。38、CaCl2法制备感受态细胞转
10、化DNA时,DNA以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。39、TaqDNA聚合酶具有 ,缺乏 因此无 。53聚合酶活性, 35外切酶活性,校正功能40、PCR循环次数一般设定为 ,过多的循环次数会导致 的出现。2530次, PCR反应“平台效应”。41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5突出的黏性末端,则可以用_进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3突出的黏性末端,可以用_进行3末端标记。Klenow酶填补的方法;T4DNA聚合酶42、限制酶是一类专门切割DNA的酶,它能特异性识别切割双链DNA。43、需要部分酶切时可采取的方法有:减少酶的用量;缩短反应时
11、间;增大反应体积。45、重组DNA技术的基本过程:目的基因的制备;载体的选择和制备;DNA分子的体外连接;将重组DNA导入宿主细胞;重组体的筛选和鉴定;重组体的扩增、表达和其他研究。46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:可以扩增质粒DNA;抑制了菌体的数量,有利于裂解。48、II型限制酶既具有 识别位点 的专一性,也具有 切割位点 的专一性。50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型, m-表示 修饰缺陷型 ,rec-表示 重组缺陷型。52、核酸的体外标记法分为 和 。化学法;酶法53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是 和 标记。125I;光敏生物素标记。54、影响核酸分子杂交的因素有:(1)核酸分子的浓度与长度;(2)温度;(3)离子强度;(4)甲酰胺;(5)核酸分子的复杂性;(6)非特异性杂交反应等。三、选择题(20%)1、下列有关基因工程技术的叙述,正确的是( ) CA重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达2、下列不属于获取目的基因的方法是( ) BA“鸟枪法”B转录法C反转录法D根据已知
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