最新基因工程复习资料含答案Word格式.docx

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转化：

受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。

停滞效应：

PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。

逆转录PCR：

以mRNA为原始模板进行的PCR反应。

PCR:

即聚合酶链式反应。

在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。

α-互补（α-complementation）：

指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。

感染（infection）特指以λ噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

其中，由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导（transduction）。

47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

二、填空题（20%）

1、DNA片段重组连接的方法主要有平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接。

2、感受态细胞是指具有摄取外源DNA分子能力的细胞。

3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时，包装长度为野生型λDNA的75~105%。

5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种dNTP，合适的缓冲液体系。

6、核酸探针包括：

cDNA探针；

基因组DNA探针；

寡核苷酸探针和RNA探针。

7、部分酶切可采取的措施有：

（1）____________

（2）___________（3）___________等。

（1）减少酶量；

（2）缩短反应时间；

（3）增大反应体积

8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：

（1）____________；

（2）________________的活性。

枯草杆菌蛋白酶；

（1）5'

-3'

合成酶的活性；

（2）3'

-5'

外切核酸酶

9、为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。

碱性磷酸酶；

5’端的磷酸基团

10、基因工程中有3种主要类型的载体：

_______________、_____________、______________。

质粒DNA；

病毒DNA；

质粒和病毒DNA杂合体

11、pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。

pMBl；

pSCl01；

pSF2124（R质粒）

13、DNA重组连接的方法大致分为四种：

（1）_________________　

（2）_______________（3）_____________（4）_______________________。

（1）黏性末端连接；

（2）平末端连接；

（3）同聚物接尾连接；

（4）接头连接法

14、差示杂交（differentialhybridization）技术需要__________________________。

两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因

16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。

基因组DNA克隆；

基因组DNA文库

17、根据Northern杂交的结果可以说明：

_____________________________。

外源基因是否进行了转录

18、在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上，然后与放射性的DNA探针杂交。

Southern印迹

19、可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。

5’→3’合成酶；

3’→5’外切核酸酶

20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：

（1）_______________

（2）__________________（3）_________________。

（1）克隆的是完整的基因；

（2）使用的是表达载体；

（3）不含内含子

21、放射免疫筛选的原理基于以下三点：

（1）抗体能够被吸附到固体支持物上；

（2）同一个抗原可以同几种抗体结合；

（3）抗体能够被标记

22、黏粒（cosmid）是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到　　　kb。

质粒；

λ噬菌体；

45

23、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。

属名的第一个字母；

种名的前两个字母；

株名

24、第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；

而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。

EcoK；

EcoRl

25、切口移位（nicktranslation）法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。

DNA聚合酶I：

5'

一3'

外切核酸酶；

合成酶

26、就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：

_______________、_____________、______________。

另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

复制区：

含有复制起点；

选择标记：

主要是抗性基因；

克隆位点：

便于外源DNA的插入

27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。

pUC系列的载体是通过

和两种质粒改造而来。

它的复制子来自，Amp抗性基因则是来自。

pBR322和M13；

转座子

28、噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：

一是；

二是。

它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；

对某些噬菌体（如λ噬菌）的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽

29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：

（1）__________________________________________________________________

（2）_________________________________________________________________。

（1）印迹的对象不同：

Northern是RNA，Southern是DNA；

（2）电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件

30、限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

31、II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。

它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。

32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。

33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。

0︒C；

42︒C

34、野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：

（1）

（2）（3）。

（1）分子量大，

（2）酶的多切点，（3）无选择标记

35、形成平末端的方法有：

用产生平末端的限制酶切，用S1核酸酶切除粘末端，用DNA聚合酶填平粘末端。

36、回收DNA片段时，在确定DNA条带位置时，应使用长波长紫外灯，以最大限度减少对DNA的照射损伤。

37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型，m-表示修饰缺陷型，rec-表示重组缺陷型。

38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时，DNA以DNA-Ca2+复合物形式吸附于细胞表面。

39、TaqDNA聚合酶具有，缺乏因此无。

5‘→3‘聚合酶活性，3’→5‘外切酶活性，校正功能

40、PCR循环次数一般设定为，过多的循环次数会导致的出现。

25－30次，PCR反应“平台效应”。

41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。

如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。

Klenow酶填补的方法；

T4DNA聚合酶

42、限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链DNA。

43、需要部分酶切时可采取的方法有：

减少酶的用量；

缩短反应时间；

增大反应体积。

45、重组DNA技术的基本过程：

①目的基因的制备；

②载体的选择和制备；

③DNA分子的体外连接；

④将重组DNA导入宿主细胞；

⑤重组体的筛选和鉴定；

⑥重组体的扩增、表达和其他研究。

46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：

可以扩增质粒DNA；

抑制了菌体的数量，有利于裂解。

48、II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。

50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型，m-表示修饰缺陷型，rec-表示重组缺陷型。

52、核酸的体外标记法分为和。

化学法；

酶法

53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。

125I；

光敏生物素标记。

54、影响核酸分子杂交的因素有：

（1）核酸分子的浓度与长度；

（2）温度；

（3）离子强度；

（4）甲酰胺；

（5）核酸分子的复杂性；

（6）非特异性杂交反应等。

三、选择题（20%）

1、下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（ 

）C

　　A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体

　　B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

　　C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快

　　D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达

2、下列不属于获取目的基因的方法是（ 

）B

A．“鸟枪法”　B．转录法　　C．反转录法　　D．根据已知