间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立图文精Word格式文档下载.docx

1、所以磨玻璃样改变少见嘲。总之正确认识骨骼弯锄畸形与病灶内的纤维组织有着密切联系这一现象。对鉴别诊断、尤其是与非骨纤维病变韵鉴别【】段承祥，王晨光，李键丁骨肿瘤影像学【京：科学出版社，【王玉凯骨肿瘤线诊断学【】北京：人民卫生出版社，张惠，蒋智铭，陈洁睛，等纤维结构不良的形态学变异及鉴别诊断叨临床与实验病理学杂志，（）：【】李景山郑晓峰，陈骨纤维异常增殖症的影像诊断田实用放射学杂志，（）：】张显秋骨性纤维异常的诊断与治疗【】实用骨科杂志，：】，：，：】彭明惺，谭永淑，刘利君骨性纤维发育异常【】中华骨科杂志，（）：收稿日期：间接测定血清中含量方法的建立刘宇，刘基巍，燕秋，崔秀云（大连市第三人民医院肿

2、瘤科，辽宁大连；大连医科大学附属第一临床学院肿瘤科，辽宁大连；大连医科大学生化和分子生物学教研室，辽宁大连）【摘要】固钓：建立检测廒清中核糖核酸酶抑制因子（，）含量的间接酶联免疫吸附法（），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人砒抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清砒定量检测的间接法。结果：所建立的用于血清中含量检测的间接方法特异性好。灵敏度高。结论：间接法可以用于测定血清中的抗原含量。具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中韵表达情况。【关键词】核糖核酸酶抑制因子；间接酶联免疫吸附试验文章编号：（）碡中图分类号：文献标识码：，（死涮毋

3、，。；【触嘣】侧耐饨：；，蚵），：，：】勰：，：印恍抵【（）；（）酶联免疫吸附法（）是目前在生物学和生物化学研究以及临床检验工作中应用较为广泛的一项技术。核糖核酸酶抑制因子（，）是一种分子量约为的酸性糖蛋白】，可以与血管生长因子（，）紧密结合，从而阻断肿瘤新生血管形成，有效地抑制肿瘤的生长。目前，检测砒最常用的方法是免疫印迹，该方法只能用于半定量测定。且操作复杂、费时。本实验将间接法用于的测定。研究资料和方法资料：（）血清样品：对照血清为随机抽取的正常人血清。（）抗原抗体：标准品、抗抗体（一抗，）均由大连医科大学生化和分子生物学教研室制备并纯化闰，标记的羊抗兔抗体（二抗，）由大连联星生物公司提

4、供。（）底物、，终止液，洗涤液均购自上海实业科华公司，包被液、封闭液、洗涤液、抗体缓冲液均为自行制备。（）孔酶标板购自美国公间接法定量测定包被在酶标板上的抗原的可行性以期为砒的研究找到一种特异性强、灵敏度高、操作简单、快捷的新方法。司，酶标仪、洗板机为美国圈（公司产品，一托型精密计由上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂生产。方法万方数据现代医药生年卷期间接法检测血清中含量：取血清样品用包被液稀释成不同浓度（：、：、：）后，取入到酶标板各孔中，每个样品包被孔，过夜。洗板后每孔加封闭液，孵育，时。每个样品中取三孔加入用抗体缓冲液稀释倍的一抗“，作为反应孔，其他三孔只加抗体缓冲液山，作为空白孔，孵育时

5、。将酶标记二抗稀释至倍，各孔加汕，孵育分钟。每孑加入底物和各山，混匀后孵育分钟，每孔加终止液山终止反应。用酶标仪在波长处读取各孔吸光度值。用反应孔平均值减去空白孔平均值得各样品的光密度值（）。线性分析：包被梯度稀释的标准品于酶标板上，用上述间接法测光密度值（）精密度测定：包被同一份血清其他条件不变，比较同一酶标板和不同酶标板的吸光度，计算其变异系数（）。特异性测定：通过免疫印迹法检测标准品、血清中的与抗体间有无特异性反应。血清中抗原的稳定性测定：在无污染情况下。新鲜分离血清标本存放周。一存放月取不同时间的标本每孔包被，其他条件不变通过法测定后，观察光密度值，进行稳定性分析。结果灵敏度与线性分析

6、：光密度值在范围内所对应的血清稀释度在：之问皇直线关系，如图，回归方程为。，了（）。哇嚣鬃爱血清稀释度圉血清稀释度与光密度值问的关系精密度检测：见表。检测结果表明分别为批内。批阅，均小于。表批内和批阍光密度值比较特异性：免疫印迹法转移后的硝酸纤维素膜经与蛋白分子量标准对照后，在约处瞰标准品和血清中均有特异条带出现，为的位置，说明抗体只与结合，而与其它蛋白无反应（见图）。血清中抗原的稳定性：当天测得光密度值为、周测得值、周、周、月。因此不同时间测得的光密度之间的为。小于。说明标本存放一定时间对检测结果无明显影响。讨论万方数据图抗体特异性分析肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，新生血管的生成对于肿瘤

7、的生长和转移是必须的：在正常成年人体内，血管生成几乎是静止的，只有的内皮细胞处于分裂期圈，外源性限翩血管的生成可以明显地抑制肿瘤的生长，甚至可以使肿瘤消退。是一种分子量为的酸性糖蛋白，具有强烈的诱发血管生成活性，与具有较高的亲和力。作为的高效抑制剂在与结合后即可以产生抑制其促进血管生成活性的作用，抑制瘤体生长与转移嘲。因此，研究在抗肿瘤血管生成治疗中的作用具有重要的意义。目前检测最常用的方法是免疫印迹，该方法只能用于半定量测定，且操作复杂、费时。用于蛋白、多肽类检测的方法很多法因其灵敏度高、精确度好、特异性强、操作简便快捷等特点而被广泛应用于蛋白、多肽类的检测【研。我们利用间接法可以用于抗原或抗体检测的原理，对人血清中的抗原含量进行测定。并对此方法的特异性、敏感性和精密度等作了研究确定了本方法的可靠性和实用性。法的基本原理为抗原与抗体的特异性反应，因此，抗原能与抗抗体（一抗）之间能否产生特异性结合是本次实验的关键。我们通过免疫印迹法证实了这一点，为在接下来的实验中使用础抗体提供了依据。在检测中，影响结果的因素很多，其中最重要的是