细菌霉菌及酵母菌计数方法验证.docx

1、细菌霉菌及酵母菌计数方法验证有限公司GMP管理文件题 目细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证制定审 核批 准制定日期审核日期批准日期颁发部门GMP办颁发数量生效日期分发单位企管部、质保部、生产部、工程部文件编码共14页 第1页一、 U 的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法 的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。二、 适用范圉：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。三、 责 任 者：质量标准分析方法验证小组。四、 正 文：1、 验证申请2、 验证立项申请表3、 验证方案4、 验证方案的批复5、 验证报告6、 验证报告的审批、验证证书7文件编码 第2页 细

2、菌.霉菌及酵母菌计数方法验证申请细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请。我公司细菌、霉菌及酵母菌讣数方法严 格按照中华人民共和国兽药典2005年版质量标准分析方法验证指导原则进 行，今拟对细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证。请予以批准！ 附：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证小组成员名单组长： 成员:申报单位：质量标准分析方法验证小组申报日期：年 月 日文件编码 第3页验证申请批复立项部门申请日期立项题目要求完成日期验证原因类别验证要求及目的立项部门负责人签名：主管部门意见日年 月 签名：验证部门意见日 签名：年 月总经理意见日月 年 签名：指定编制验证方案的部门：编制验证方案要求：验证完成要求及日期

3、：总经理签名： 年 月 日备注：文件编码 第4页细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案、概述：1、 名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、 H的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验 证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、 验证判断标准：中华人民共和国兽药典2003年版附录乂叮4、 验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、 验证日期：二.验证1、 验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。 按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计

4、数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进 行。2、 内容:（1） 菌液所用的菌株传代次数为3代，接种大肠埃希菌，金黃色葡萄球菌，枯 草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种口色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培 养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉 的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0. 9%无菌氯化 钠溶液，将抱子洗脱。然后吸出泡子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝 的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每51含泡子数 60cfu的抱子悬液。（2） 验证方法

5、 验证试验进行了 3次独立的平行试验。A、试验组 供试液（1 ）纯化水lml （ II ）药品名称（1： 100） 10g,取供试液 试验菌。60cfu过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入lml5 页 第文件编码测括所加试验菌数。B、菌液组，按菌落数据计数方法测定供试lml）取相当于供试品lg C供试品对照组品本底菌数。无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓09%、稀释剂对照组 用 相应稀释液D ,按薄膜过滤法制备计菌落数。1ml供试液60cfu度为每（1 ） 纯化水C组回菌回项U D组菌稀释剂对照对照供试品收率菌液组B%收率试验组AD C 组组（A-C） /BD/B菌株312312323121 70

6、 事大肠 $70埃希菌平均：70 2金黄色 270葡萄球菌平均：70 2 枯草芽抱 M70杆菌平均：70 白色念珠 R70平均：菌7070黑曲霉M 平均：6页 第文件编码（II）产品名称回组菌D组菌项 收率照对回收品对照稀释剂供试B 试验组A菌液组（A-C） /B%组菌株C组D率D/B大肠702 2 70埃希菌 平均：金黄色 7070 22 平均：葡萄球菌 枯草芽抱7070 杆菌 平均： 白色念珠 70R70 菌平均： 70黑曲霉$70 M 平均：作为阴依薄膜过滤法操作，无菌氯化钠1IU1,以上试验同时取试验用稀释液0.9% 性对照试验，均应无菌生长。）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。（3

7、验 证方案应进行严格细致精密认真的实施，根对于细菌霉菌及酵母菌讣数方法据统计结果，数据基本上应在允许偏差范用。4）培训：所有参与的人员在开 始验证前应作充分的培训。（）结果判断（5 （稀释剂对3次独立的平行试验中， 稀释剂对照组的菌回收率，由上表可知，在 7第页 文件编码 试验组的菌回收，70%应均不低于照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的白 分率）.率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌 落数的白分率）应均大于70亂则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细 菌霉菌及酵母菌数。（6）再验证当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证

8、，以 确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。页8第 文件编码.验证方案批复验证方案名称验证方案起讫日期验 证 工 作负责验证部门人员参加部门人员参加部门人员参加部门人员检验部门人员验证方案概要结论年 月日 验证小组负责人验证小组成员会签生产使用部门意见负责人 日月年验证管理部门意见 月年负责人日总经理意见年 日月备注文件编码 页9第细菌.霉菌及酵母菌计数方法验证报告、概述：1、 名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、 H的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法

9、的验 证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、 验证判断标准：中华人民共和国兽药典2003年版附录乂叮4、 验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、 验证日期：二.验证1、 验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。 按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进 行。2、 内容:（1） 菌液所用的菌株传代次数为3代，接种大肠埃希菌，金黃色葡萄球菌，枯 草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂

10、培养基中，培养48小时，上述培 养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉 的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0. 9%无菌氯化 钠溶液，将抱子洗脱。然后吸出抱子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝 的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含泡子数 60cfu的泡子悬液。（2） 验证方法 验证试验进行了 3次独立的平行试验。A试验组 供试液（I ）纯化水lml （ H ）药品名称（1： 100） 10g,取供页10第 文件编码.60cfu试验菌。试液lml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入 测定所加试 验

11、菌数。B菌液组，按菌落数据计数方法测定供试品lml）取相当于供试品lg （C 供试品对照组本底菌数。无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度0.9%稀释剂对照组 用 相应稀释液D ,按薄膜过滤法制备计菌落数。lml供试液60cfu为每（1 ）纯 化水回组菌D组菌C项目%收回收率稀 释剂对照供试品对照BA试验组菌液组(A-C) /BC组D率组菌株D/B3123123123 12大肠 73. 33 50 83. 33 52 51 50 51 96 96 97 60 60 60 52 埃希菌 506052平均965252 54 54 52 60 97 金黄色 97 96 60 60 53 71. 678

12、0. 67 97平均52葡萄球菌60545050 52 50 60 60 60 51 52 枯草芽抱 96 96 96 73. 3383. 33 5096平均6052杆菌 52 52 51 52 52 52 96 白色念珠 93 95 60 60 60 86. 67 71.675252平均菌956096 96 96 60 60 60 53 53 52 51 50 51 85. 00 黑曲霉 71.675160 5396平均页文件编码11第(II)药品名称回C组菌D组 项目收率照回收对品照稀释剂对供试B菌液组试验组A(A-C)/B%菌株组C组D率D/B312312123123大肠 85. 00

13、86.67 51 52 60 38 38 38 52 89 89 88 60 60 埃希菌 52388960平均5050 50 40 60 60 41 金黄色 41 91 90 91 60 83. 3383. 33 91平均604150葡萄球菌 50 51 51 38 39 39 89 枯草芽抱 89 89 60 60 60 83. 0085.00 51896039杆菌平均 52 52 37 38 52 88 88 60 60 60 38 白色念珠 88 83. 3386.67 5238菌平均886050 50 51 60 39 40 39 60 90 89 89 60 83. 3383. 3

14、3黑曲霉50906040平均作为阴依薄膜过滤法操作，无菌氯化钠lml, 0.9%以上试验同时取试验用稀释液 性对照试验，均无菌生长。）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。（3验证 方案进行了严格细致精密认真的实施，根 对于细菌霉菌及酵母菌讣数方法 据统 计结果，数据基本上在允许偏差范圉。4）结论：（稀释剂对3次独立的平行试 验中，稀释剂对照组的菌回收率，山上表可知，在 试验组的菌回收率均不低于 70%,照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）页第 12文件 编码（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均 菌则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉，均大于落数的白分 率）70%菌及酵母菌数。结论人： SWJ：批准人： 日期：（5）再验证当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以 确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。文件编码页13第验证报告批复验证项目