小鼠动物试验技术平台.docx

1、小鼠动物试验技术平台小鼠（Mouse, Mus musculus）属于啮齿目（Rodentia）、鼠科（Muridae）、小鼠属（Mus）。 95%的实验动物为啮齿类动物，其中90%为小鼠和大鼠。选择小鼠作为实验模型的原因： 易于饲养； 繁殖能力强； 繁殖周期短； 背景知识较为清晰、全面； 与人类有相同的器官，并发挥相似功能； 可作为人类疾病模型； 大量自发基因突变品系，； 成熟的规模化培育技术。常用近交系（inbred strain）： BALB/c白色毛发，红眼 C3H杂色，深棕色毛发，毛发末梢有黄色条纹 C57B1/6黑色毛发 DBA棕色毛发，最老的近交系 129，FVB常用于转基因操作

2、常用远交系（outbred strain） ICR白色毛发 Black Swiss黑色毛发 Swiss Webster白色毛发 基因型鉴定 小鼠尾尖（ 50%），通常无临床症状。2. 病变：引起慢性鼻炎，间质性肺炎。 3. 控制：使用剖腹产及良好的屏障系统。（四） 鼠痘Mouse pox（缺肢畸形ectromelia病毒） 1. 属正黏液病毒属。宿主为小鼠。鼠痘是非常严重的疾病，具高度传染性及死亡率。传染途径：直接接触和媒介物：如小鼠组织，小鼠血清，转移性小鼠肿瘤。2. 有抵抗力的品系（明显的感染）：C57BL/6和C57BL/10；易感染的品系（表现明显临床症状）：BALB/c、DBA/2、

3、CBA和C3H。3. 临床症状：可呈现急性、慢性或隐性等型。包括面部水肿、皮下丘疹、脚、面部、耳和尾巴皮肤糜烂，或者是四肢和尾巴坏死腐脱。急性会导致小鼠死亡。4. 控制： (1) 对引进的小鼠和小鼠组织作隔离及检测。 (2) 消除感染的小鼠和组织，以及消除房舍内的污染。 (3) 停止繁殖，怀孕期间子宫内的感染，导致剖腹产可能无法完全避免污染。（五） 乳鼠流行性腹泻（Epidemic Diarrhea of Mice，EDIM）1. EDIM病毒属呼肠孤病毒科轮状病毒属，为双链RNA病毒,其外壳上具有区别于其它轮状病毒的特异性抗原。EDIM病毒对热敏感，pH39条件下稳定，无血凝素，对乙醚、氯仿

4、、脱氧胆酸盐和胰酶有抵抗力。EDIM病毒不能在鸡胚中生长，也不能在体外细胞培养中传代。2. 小鼠是EDIM病毒的唯一自然宿主，小鼠对本病的易感程度随日龄的增长及免疫力的提高而下降，一般15日龄内的小鼠最为易感。C3H对其敏感，而C57BL则具有相对的抵抗力。EDIM通过消化道和呼吸道传播，是一种高度接触性传染病。3. EDIM主要高发于第一胎15日龄以内的乳鼠。乳鼠感染后早期腹泻、脱水、消化不良、皮肤皱缩、肩背皮肤上有干燥白色痂皮，有时皮肤发绀，透过腹壁可看到胃内充满白色乳汁，身体粘附黄色稀便。后期粪便变干而阻塞肠道，可能引起直肠嵌塞而死亡。乳鼠可正常吃奶，但因消化不良而积于胃中。症状轻微时2

5、5天可自行康复。成年小鼠呈隐性感染并不断向外排毒。4. 预防采用剖腹产技术可建立无EDIM病毒的种子群。饲养室应安装高效空气过滤装置，进入饲养室的垫料、饲料、用具等应彻底消毒。一旦发生本病，应立即淘汰整个鼠群，焚烧尸体。饲养室应彻底消毒后重新引种建群。（六）淋巴球性脑膜脉胳膜炎病毒（Lymphocytic Choriomeningitis Virus, LCMV) 1. 淋巴球性脉络丛脑膜炎病毒属沙状病毒科（Arenaviridae），为单链RNA病毒。2. 病毒会由尿液、唾液及乳汁中排出。被病毒感染的动物所污染的垫及其他的病媒（如寄生虫等）为潜在传染源。3. 小鼠感染多为隐性无症状，发病小鼠

6、出现伴随大量淋巴细胞浸润的脑脊髓膜炎和肝炎。4. 感染LCMV会干扰实验结果：(1) 造成生化物质的污染（肿瘤，细胞系，病毒种株白血病和狂犬病）；(2) 造成小鼠体液免疫和细胞免疫下降；(3) 在感染初期诱发天然免疫细胞的活性；(4) 增加其它病原体的感染力。5. 预防：(1) 针对新进无症状动物以及内部具感染风险的动物族群进周期性的血清学监测。(2) 尽量避免过密饲养，给予良好的饲养环境。 （七） 其它小鼠也容易受到其他病毒感染，如K病毒、泰氏脑脊髓炎病毒、小鼠腺病毒等。这些病毒在健康小鼠体内呈隐性感染，无明显临床症状。但是这些病毒仍会对研究造成影响。一般应做定期血清学ELISA检验或病理学

7、检查。二、霉浆菌性和细菌性疾病 （一） 霉浆菌症（Murine mycoplasmosis） 1. 又称慢性鼠类肺炎。为革兰氏阴性菌，在啮齿目常见菌种有Mycoplasma pulmonis。感染大鼠、小鼠。在开架饲养区动物中常见，在SPF屏障系统内饲养动物则可能有非显性感染。单纯感染本病为中高患病率、中低死亡率。2. 感染途径：飞沫传染，子宫内垂直感染。3. 临床症状包含弓背、皮毛粗糙、体重下降、活动力下降等。严重发病时呼吸急促、鼻音明显、歪头、大鼠眼窝外与鼻部周围有红色分泌物使毛色呈微红。4. 唾液腺泪腺病毒、仙台病毒、呼吸道杆菌或巴斯德杆菌等对呼吸道有亲合性的病原体会加重霉浆菌感染的症状

8、。空气中氨浓度过高也可能促使动物发病。室温太高、动物过度拥挤、通风不畅也可能增加发病的几率。5. 预防：控制饲养环境，增加笼盒更换频率；降低饲养密度以降低氨浓度。（二） 葡萄球菌感染（Staphylococcal infection） 1. 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）通常存在于鼻咽喉、下消化道，毛发和皮肤上，在开架与屏障系统饲养的动物，包括小鼠、大鼠及人类中都有。2. 致病性依宿主状况、卫生状况、皮肤和黏膜有否创伤等不同因素而异。可以引起小鼠皮肤炎及化脓，尤其是裸鼠的皮肤脓疮。在免疫系统完全的品系C57BL/6Bd中可引起脸部脓疮。引起裸鼠眼眶和脸部皮肤脓疮。

9、引起C3H/HeN品系包皮腺（preputial gland）脓疮。造成年轻有攻击性的公鼠自体阴茎切断（毁损）。3. 金黄色葡萄球菌的感染可能会造成宿主免疫反应的改变。4. 控制方式： (1) 改善卫生状况。 (2) 消除可能造成皮肤伤害的设备。 (3) 降低饲养密度。 (4) 减少公鼠交配的母鼠数。 (5) 治疗效果不佳，因定期检查并淘汰感染小鼠。 （三） 链球菌症1. 链球菌（Streptococcus dermatitis）可以引起局部坏死性溃疡性皮肤炎与全身系统性的感染。可以在颈部两耳间，耳下与耳翼处见到溃疡。全身感染导致败血症及心内膜炎。2. 改进动物环境卫生或使用系统性抗生素疗法，

10、可以避免感染的机会。 （四） 泰瑞氏疾病（Tyzzers disease） 1. 梭状杆菌（Clostridium piliforme）引起。常发生在恶劣环境或免疫缺陷的小鼠中。2. 传染途径为经口传染（芽胞，粪便等）。临床症状为水样下痢、脱水及食欲不振或无临床症状突然死亡。3. 预防： (1) 保持良好的卫生状况，降低饲养密度。 (2) 食物和垫料用高温高压灭菌锅消毒。 (3) 用0.3 %的次氯酸钠清毒房舍以杀灭芽胞。（五）与纤毛相关的呼吸道杆菌1. 天然的宿主为大鼠、家兔和小鼠。属于革兰氏阴性菌。通常在感染霉浆菌的动物身上被发现。微生物依附在呼吸道的上皮细胞。2. 临床症状：无症状或轻度

11、呼吸道症状。肥胖小鼠有时有轻度啰音。（六）沙门氏菌症（Salmonellosis） 1. 有2种血清型，常见于小鼠和大鼠（S. typhimurium和S. enteritidis）。属于人畜共同传染病原。2. 感染途径：粪便污染的垫料、食物及饮水，由口摄入感染。 3. 临床症状：哺乳期的小鼠或限制食物和饮水时易导致感染而发病。 4. 预防与控制： (1) 隔离受感染的操作人员，清除受感染的动物，实施剖腹产。 (2) 定期做健康质量监控，维持良好的屏障系统。 三、寄生虫 蛲虫（Pinworms） 1. 可感染大小鼠的蛲虫有三种，大鼠蛲虫（Syphacia Muris），鼠蛲虫（Aspiculu

12、ris tetrater）及小鼠蛲虫（Syphacia obvelata）。后两者在小鼠中常见。2. 蛲虫寄生在盲肠与结肠。轻微感染时无症状，严重时会发生生长迟缓、下痢、肠套迭和脱肛等现象。3. 控制： (1) 定期的健康监测。 (2) 严格的环境消毒，饲料与垫料充分灭菌。 (3) 定期给药。 (4) 增加换笼次数。 (5) 感染严重时，可将比较珍贵的感染动物实施剖腹产，再隔离饲养。(6) 使用有滤网的笼盖可防止笼间感染。 四、其它疾病 （一） 环尾症（Ring Tail） 1. 一般实验动物房相对湿度应保持在50-70 %，温度应保持在20-25之间。当湿度降至40 %以下而温度较高时，易发

13、生环尾症。2. 环尾症出现于大、小鼠，但小鼠较常发生。尾巴出现圆形环状纹，初期呈现水肿，出血，皮肤坏死及脱皮。严重者尾根及尾巴成坏疽病变，留下永久性环形纹。（二） 其它1. 外伤：常发生于同笼的公鼠互相攻击。 2. 脱毛：可在全身各处发生，原因很多。理毛行为、打斗、外伤、过密饲养、内分泌异常等都可能引起脱毛。小鼠饲养记录 所有在养小鼠必须建立详细的饲养记录，并准备随机抽查。必须及时更新小鼠饲养的详细、准确记录。详细的小鼠饲养记录将帮助实验动物平台管理人员和研究人员确认动物实验操作程序是否按照制定的标准程序实施。 管理记录：包括房间登记本可以帮助跟踪此房间在养动物种类、动物来源、室温、湿度、换笼

14、时间、饲料级饮用水更好时间、房间消毒等日常管理工作。 标准操作程序：所有人员都应可在任何时候按照标准操作程序完成同样的操作。标准操作程序应放置在饲养间的指定位置，以备实验动物平台工作人员和研究人员随时查阅。 治疗记录：所有在养动物都必须建立治疗记录，包括品系、性别、出生日期、健康状况、用药情况、手术类型、术后护理及其它相关信息。 实验动物使用记录：各实验室应建立详细、准确的实验动物使用记录，并及时更新。实验动物使用记录包括品系、性别、出生日期、交配情况、处死时间、处死方式、处死后尸体处理方式、在养期间实验动物健康状况、用药情况、开展实验类型、是否实施手术、手术类型、术后护理及其它相关信息。实验

15、动物安乐死所有实验动物平台工作人员和研究人员仅可使用以下方式在必要时对实验动物处以安乐死。 CO2（推荐使用此种方法。只应使用压缩CO2钢瓶。小鼠小于2周时，因呼吸系统发育不完全，无法使用此种方法。） 过量麻醉剂 麻醉后放血 麻醉后灌注 颈椎脱臼（必须对动物实施麻醉） 子宫脱位（必须对动物实施麻醉） 断头（必须对动物实施麻醉）小鼠基本生理数据基本数据血液成年小鼠体重血压：收缩压133-160 mmHg雄性20-40克舒张压102-110 mmHg雌性18-35克体积：血浆3.15ml/100g体重体表面积体重(g)2/39104全血5.85ml/100g体重体温36.5-37.7 C心跳310

16、-480bpm饲料摄取量15g/100g体重/天潮气量0.18 (0.09-0.38)ml 饮水量15ml/100g体重/天每分输出量24 (11-36) ml /min 繁殖每搏输出量1.3-2.0ml/beat性成熟期血浆： pH7.2-7.4雄性28-49天CO221.9mmol/l雌性28-49天呼吸频率163 (60-220)bpm怀孕期19-21天O2消耗量1.69 ml O2/克/小时 (1.63-2.17)假孕10-13天产后易孕期24-48小时内血液学产仔量4-12白细胞8.4 (5.1-11.6) 103/l出生体重1-1.5克嗜中性粒细胞17.9 (6.7-37.2)%移

17、植4-5天淋巴细胞69 (63-75)%受精交配后2小时单核细胞1.2 (0.7-2.6)%幼鼠睁眼12-14天嗜酸性粒细胞2.1 (0.9-3.8)%幼鼠毛发2-3天嗜碱性粒细胞0.5 (0-1.5)%幼鼠耳朵张开3-4天红细胞8.7 -10.5 108/mm3断奶21天（10-12 g）血色素13.4(12.2-16.2)g/dL交配起始50-60天红细胞比积44 (42-44)%交配期：雄性1年红细胞寿命40-47天雌性6-12个月（6-10胎）血小板600(100-1000) 103/l血液凝固时间2-10分钟尿液0.5-2.5 ml/天凝血时间55-110秒尿液pH7.3-8.5比重

18、1.058 (1.30-1.070)血尿素氮(BUN)12-30 mg/100ml葡萄糖124-262 mg/dL胃饲量5ml/kg蛋白4-6 g/dL最大单次取血量1.25ml/100g体重肌酐0.3-1 mg/dL推荐采血位点胆红素0.1-0.9 mg/dL上颌窦后眼眶静脉血清白蛋白2.5-4.8 g/dL足底静脉心脏穿刺血清球蛋白0.6隐静脉颈静脉胆固醇26-82 mg/dL尾静脉/动脉断头常见小鼠健康问题 实验动物的使用必须遵循“3R”原则，即尽可能使用其它的替代实验手段（Replacement），使用实验动物的数量尽可能地保持最小（Reduction），尽可能用最优化的实验条件开展研

19、究工作（Refinement）。除了这“3R”原则外，研究人员应最大限度地保证实验动物免受不必要的不适和疼痛。研究人员（不仅仅是实验动物平台工作人员）有义务密切关注实验动物的健康状况，保证实验动物舒适的生活环境，并对实验动物进行及时的护理和治疗。这是所有研究人员必须遵循的第四个“R”原则，即责任（Responsibility）。同时，精心护理的实验动物将在最大程度上有利于科研工作的开展，包括：更加准确地掌握实验动物的表型，更加明确、准确的实验指标，减小实验误差，及时发现预期之外的表型，并可以使用更少的实验动物获得理想的实验结果，节省科研经费。实验动物安乐死时机的选择 如实验动物在实验过程中预期将可能遇到任何的不适，在实验动物研究方案中研究人员应明确对实验动物实施安乐死的时机选择原则。正确选择对实验动物实施安乐死的时机不仅将在最大程度上减少实验动物承受的不必要的痛苦，同时有利于研究人员获得更好的实验结果，减少科研经费的浪费。在实验动物安乐死时机的选择中，应明确描述实验动物的健康状况，避免使用含糊、笼统、不明确的表述，如“不适”、“垂死”等。脱毛：小鼠在理毛过程中经常会导致脱毛现象，这通常是无害的。但打斗、皮肤疾病等引起的脱毛应予以重视，并给予及时、有效的护理。打斗：同笼饲养的雄性