藏药熏倒牛化学成分研究解析.docx

1、藏药熏倒牛化学成分研究解析天然产物研究与开发NatProdResDev2009,21:1992202文章编号)022*藏药熏倒牛化学成分研究王维恩1,2,张晓峰13,沈建伟,娄灯吉11,2中国科学院西北高原生物研究所藏药中心,西宁810008;2中国科学院研究生院,北京100049摘要:利用色谱对藏药熏倒牛进行化学成分研究。从藏药熏倒牛(BiebersteiniaheterostemonMaxim.)中分离鉴2xylopyranoside(1)、定了6个化合物,采用波谱技术分别鉴定为hypolaetin72O2山羊豆碱(2)、反式242羟基山羊13豆碱(3)、甘露糖醇(4)、伞形花内脂(5)、

2、槲皮素(6)。对化合物1的H、CNMR信号进行了准确归属,化合物14均为首次从该植物中分离得到。2xylopyranoside;山羊豆碱关键词:熏倒牛;hypolaetin72O2中图分类号:R284.1;Q946文献标识码:AChemicalConstituentsinAerialPartsofBiebersteiniaheterostemonMaxim.WANGWei2en21,2,ZHANGXiao2feng,J2wei1311,TheNorthwestPlateauInstituteofBiology,ofXChina;GraduateUniversityofyBChinaAbstra

3、ct:SixcompoundsisBiebersteiniaheterostemonMaxim.(Geraniaceae)by2xylopyranoside(1),coloumstheywereidentifiedashypolaetin72O2galegine,242(3),mannitol(4),umbelliferone(5)andquercetin(6).2xylopyranoside;galegineKeyheterostemonMaxim.;hypolaetin72O2熏倒牛(Biebersteiniaheterostemon)的藏名译音为明见赛保,民间又称臭花椒、狼尾巴,是蔷薇纲

4、牻牛儿苗亚纲熏倒牛科的植物。熏倒牛科(Bieber2steiniaceae)是一单型科,仅有一属即熏倒牛属Biebersteinia。熏倒牛B.heterostemon为甘、宁、青、川2xylopyranoside)的波报道化合物1(hypolaetin72O2谱特征3,4,但对C22、C25的H,CNMR信号归属13有错误,本文对其进行了分析纠正,并首次报道化合物3的核磁共振数据,由X2ray射线单晶衍射确定其为反式242羟基山羊豆碱。张晓峰等曾报道在藏药熏倒牛中分得7个化合物5西北(诺尔盖)特有,于10003200m间黄土草原1河滩偶见,浓烈腥臭。其味辛、苦,性寒,具有消炎止痛,清热解毒,

5、清血热,祛风毒的作用,用于治疗各种炎症、结核症、丹毒、疟疾、咽喉肿痛、胃痛、全身2水肿、中风、虫蛇咬伤等。藏医认为所有的炎症3及热病都是“赤巴”引起的,而熏倒牛也常在藏医药中用来治疗“赤巴”病。我们在体外抗菌药效的跟踪研究中分离获得了六个化合物,根据理化性质2xylopyrano2和波谱数据分别鉴定为hypolaetin72O2side(1)、山羊豆碱(2)、反式242羟基山羊豆碱(3)、甘露糖醇(4)、伞形花内脂(5)、槲皮素(6)。文献曾,而本文分得的化合物14均为首次从该植物中分离。1仪器与材料XT4A数字显示双目显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司);NOVA2600(加拿大NOVA公司)

6、或BrukerAV2400核磁共震仪(瑞士Bruker公司),TMS为内标;APEX.FT2ICR型质谱仪(瑞士Bruker公司);Bio2RadFT2IR240型红外光谱仪(美国Bio2Rad公司),KBr压片;高效薄层板GF254(烟台化工科技开发试验厂);SephadexLH20、反相RP218柱料(Sig2ma公司);D101大孔吸附树脂(天津南开大学化工收稿日期:2007212213接受日期:2008203221基金项目:国家高科技研究发展863计划基金项目3通讯作者E2mail:xfzhang厂);200300目柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂);所有试剂均为光谱纯或分析纯。熏倒牛全草于

7、2006年8月采集于青海省黄南 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 200天然产物研究与开发Vol120州同仁县,中国科学院西北高原生物研究所卢学峰研究员鉴定为BiebersteiniaheterostemonMaxim,标本保存在西北高原生物研究所藏药中心标本室。归属在H22,所以本文分析纠正后的信号归属更为合理。具体信号归属见表1,其化学结构式见图1,HMBC相关见图2。2表15,8,3,42四羟基黄酮272O2D2木糖苷(1)的NMR数据2Table1NMRd

8、ataof5,8,3,42tetrahydroxyflavon272yl2D2xylopyranoside(1)碳原子编号No.2345678923456Xyl127.48(brs)10.46(s,OH)10.87(s,OH)6.91(brd,8.3)7.46(brd,8.3)4.96(d,7.8)3.3623.33e5.40(d,4.2,OH)33.2623.33e5.15(d,4.2,OH)43.3823.40e5.12(d,4.2,OH)53.81(brd,10.8)3.3823.33eNote:MeasuredinDMSO2d6at600MHz.eoverlappingwithothe

9、rsignals.65.9CH269.5CH75.8CH8.76(s,12.35(s,OH)6.56(s)6.68(s)2提取与分离取熏倒牛全草10kg,粉碎成粗粉,用6倍量90%的乙醇回流提取3次,每次2h,过滤,合并滤液,回收乙醇得浸膏。将90%乙醇回流提取浸膏加适量水溶解,依次用石油醚、氯仿、醋酸乙脂及正丁醇萃取,醋酸乙酯萃取物浓缩后得到黄色沉淀3.5g,沉淀部分40温水溶解后上SephadexLH20柱,用水2乙醇(1001)洗脱,得到纯化的化合物1(960mg);剩余醋酸乙酯萃取物(130g)经硅胶柱色HC164.4102.8182.4152.498.6151.1127.27105.

10、4121.8113.7145.9150.1116.2119.4101.873.2DEPTCCHCCCHCCCCCCHCCCHCHCHCH谱,以氯仿2丙酮(20111)洗脱得化合物2(430mg);正丁醇萃取物(230g)用D101大孔吸附树脂以水和不同浓度的乙醇为洗脱剂,对得到的50%乙醇洗脱部位经硅胶柱色谱,以氯仿2甲醇洗脱,经薄层色谱鉴定,合并大致相同部分得到AD部分用RP218柱分离,甲醇2水(62),();后得到化合物()(14g)经硅胶柱色谱,酸乙脂为洗脱剂,得到的流份经重结晶得化合物5(250mg)和6(220mg)。3结构鉴定25化合物1黄色粉末,mp.204205,D+12.5

11、(10%水溶液),盐酸镁粉反应及Molish反应皆呈阳性,高效薄层板GF254点样,于醋酸乙酯:吡啶:水:甲醇(8020105)中展开,碘蒸气显色,薄KBr21层色谱Rf为0.68;FTIRm:3419(2OH),1661,maxc1612,1579,1513,1384,1051,834,625;HRESI2MSm/z:435.0725M+H。核磁共振氢谱数据和碳+2xylopyranoside谱数据与文献报道的hypolaetin72O24基本一致,推测化合物1分子式为C20H18O11,结2构被确定为5,8,3,42四羟基黄酮272O2D2木糖2xylopyranoside,文献对C2苷,

12、即hypolaetin72O22、C25的H、CNMR信号归属有错误,根据H2HCOSY和HMQC谱来看,C25对应.2,C22对C11611311应.7;H25和H22在.91(dd,J=8.3Hz,C113H6H)处有同核位移相关,而且在6.91(dd,J=8.3Hz,H)和7.46(dd,J=8.3Hz,H)处的两对双峰也证实了,而H6.91归属在H25H7.48(brs,H)2图15,8,3,42四羟基黄酮272O2D2木糖苷(1)的结构2xylopy2Fig11Structureof5,8,3,42tetrahydroxyflavon272yl2ranoside(1) 1994-20

13、10 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. Vol120王维恩等:藏药熏倒牛化学成分研究201表232甲基222丁烯基胍(2)和反式242羟基232甲基222丁烯基胍(3)的NMR数据Table2NMRdataofgalegine(2)andtrans242hydroxygalegine(3)碳原子编号No.2H3.69(d,6.4)5.17brtC40.1118.9136.3H3.92(d,6.3)5.19brtC38.6120.9140.32图25,8,3,42四羟基黄酮272O2木

14、糖苷的HMBCFig12SelectedH2HCOSY,HMBCcorrelationsof111123化合物2无色针晶(甲醇),mp.104105,改良碘化铋钾反应及坂口反应皆呈阳性,高效薄层板GF254点样,于氯仿:甲醇:乙酸:水(13511)中展开,碘蒸气显色,薄层色谱Rf为0.76;FTIRmax21cm:3357(2NH2),3178(2NH2),1680(2C=CH2),KBr4BH3(2CH3)C=NH1.69brs1.63brs7.50brs25.217.7156.53.95brd1.71s7.76brs60.214.1157.4Note:RecordedinDMSO2d6(1

15、H:400MHz;13C:100MHz).1645(2C=NH);核磁共振氢谱和碳谱的具体信号归属见表2。HRESI2MSm/z:128.1192M+H,综合上述理化性质及结合HRESI2MS,H、CNMR数据,推测其分子式为C6H13N3,数据与文献报道即山羊豆碱,6,7113+基本一致,故化合物2鉴定为32甲22,图332甲基222丁烯基胍Fig13Structureofgalegine化合物3无色针晶(甲醇),mp.118.5120.5,改良碘化铋钾反应及坂口反应皆呈阳性,表明其为胍类生物碱;高效薄层板GF254点样,于氯仿:甲醇:乙酸:水(13511)中展开,碘蒸气显色,薄层KBr21

16、色谱Rf为0.82;FTIRm:3428(2OH),3347maxc化合物4无色方晶(甲醇),mp1161162,25KBr21D20140(10%水溶液)。FTIRm:3271maxc(2OH),2935,1462,1378,1088,1026,932,713,890,1624;HNMR(400MHz,DMSO2d6):31323160(8H,m);13CNMR(100MHz,DMSO2d6):63181,69160,71125;HRESI2MSm/z:20510702M+Na,其+(2NH2),3157(2NH2),1680(2C=CH2),1645(2C=NH);核磁共振氢谱和碳谱的具体

17、信号归属见表2。HRESI2MSm/z:144.1238M+H,综合上述理化+分子式为C6H14O6。以上数据与文献报道的甘露醇糖一致9性质及结合HRESI2MS,H、CNMR数据和X2Ray单晶衍射图推测其分子式为C6H13N3O,化合物3被确定为反式242羟基232甲基222丁烯基胍,即反式242羟基山羊豆碱。有文献报道曾在蝶形花科植物山羊豆(Galegaofficinalis)中分离得到42羟基山羊豆碱8113,故化合物4鉴定为甘露醇糖。,本文首次报道化合物3的核磁共振数据,并由化合物5无色针晶(甲醇),紫外下显蓝色荧KBr21光,mp1230232。FTIRm:3153(2OH),ma

18、xc1706,1680(C=O),1603,1570,1569(C2O),1508,1455,1408,1324(C2O),1235(C=O),1136,902,1837;HNMR(400MHz,DMSO2d6):6119(d,J=914Hz,H),7193(d,J=914Hz,H),7152(d,J=814Hz,H),6178(dd,J=814Hz,H),6170(d,J=X2ray射线单晶衍射确定其为反式242羟基山羊豆碱,化学结构见图4,X2ray射线单晶衍射见图5。 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House

19、. All rights reserved. 202天然产物研究与开发Vol120130116Hz,H);CNMR(100MHZ,DMSO2d6):+try,2004,65:2072213.10211,11113,11114,11311,12917,14415,15515,16014,16113。HRESI2MSm/z:16310396M+H,其5ZhangXF(张晓峰),HuBL(胡伯林),ZhouBN(周炳南).StudiesontheactiveconstituentsofTibetanherbBieberstein2iaheterostemonMaxim.ActaPharmSinica

20、,1995,30:2112分子式为C9H6O3。以上数据与文献报道的伞形花内脂一致,故化合物5鉴定为伞形花内脂。化合物6黄色针晶(甲醇),mp1310315。KBr21IROH),1663(C=O),1603,1518,maxcm:3330(21436,1370,1289,1252,1222(C2O),1050,831,711,696,558。红外数据与有机物谱图库槲皮素红外数12据基本吻合;与槲皮素标准品(Sigma公司)混和10,11214.6EichholzerJV,LewisIAS,MacleodJK,etal.Galegineandanewdihydroxyalkylacetamid

21、efromVerbesinaenceloiodes.Phytochemistry,1982,21:97299.7DelleMG,RitaVA,DelleMF,etal.Furtherhypotensiveme2tabolitesfromVerbesinacaracasan.Bioorg&MedChemLet2ters,1999,9:324923254.点样共薄层,于醋酸乙酯:吡啶:水:甲醇(8020105)中展开,碘蒸气显色,薄层色谱Rf为0178,显示一个点,故鉴定化合物6为槲皮素。参考文献1TheEditorialBoardoftheFloraofChinaofChineseAcade2m

22、yofSciences(中国科学院中国植物志编辑委员会).Flo2raofChina(中国植物志).Vol.1.Beijing:2004.415.2YangYC(杨永昌).().Xinning:Qles1991.2632264.3MarkhamKR,A,oyBrianPJ,etal.FlavonoidprofilesofnewZealandlibocedrusandrelatedgenera.Phyto2chemistry,1990,29:5012507.8DesvagesG,OlomuckiM.ResearchofguanidinederivativefromGalegaoffcinalis

23、L.:galegineandhydroxygalegine.BullSocChim,1969,9:322923232.9YangNY(杨念云),DuanJA(段金廒),QianSH(钱世辉),etal.StudiesonchemicalofTageteserectaL.J(),2003,.2A,ShafieeA,etal.Phy2tofFerulogobernardiiTomk&M.pimen.PharmMatMed(DARU),2006,14:2142221.11ShiY(施瑶),LiDX(李定祥),MinZD(闵知大).Chemi2calconstituentsofZanthoxylumd

24、imorphophyllum.ChinTra2ditHerbDrugs(中草药),2006,37:13215.12SDBS(SpectralDatabaseforOrganicCompounds,NIMC)(有机物谱图库,日本).DB/OL.SDBSNO2621.4TsutomuN,NaokiI,YukaI,etal.NeolignanandflavonoidglycosidesinJuniperuscommunisvar.depressa.Phytochemis2 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.