性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展.docx

1、性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展摘要: 近年来淋病、非淋菌性尿道炎、尿道内尖锐湿疣、艾滋病等性传播病的非侵入性检查方法研究取得新进展，其中核酸扩增技术敏感性高、特异性强，可作为淋病、非淋菌性尿道炎的首选检查方法，对尿道内尖锐湿疣的诊断和疗效评定也有一定的临床意义。采用免疫学方法检测HIV-抗体，以唾液为标本，具有与血清标本同样的诊断意义。人们一直在寻找更灵敏、特异、快速、非侵入性的检测方法来诊断性传播疾病。近年来，国外学者应用清晨首次尿，或长时间不排尿后的首段尿作离心沉淀，用尿沉渣来检测淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等病原体，应用唾液或口腔粘膜渗

2、出液检测HIV-抗体，以分子生物学、免疫学新技术来检测这些病原体或其抗体，使STD诊断手段显着增加。现就近年国外有关STD的非侵入性检查方法研究新进展作一综述。淋病核酸扩增技术：核酸扩增技术的问世，使临床实验室检测感染性病原体的敏感性显着提高，可检测到标本中一个基因拷贝1。聚合酶链反应，和连接酶链反应，是核酸扩增技术中最常用的方法。PCR是1985年建立起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，它需要一对引物。Crtchfelt等对344例男子的尿道拭子、尿沉渣标本和192例女子的宫颈拭子、尿沉渣标本分别进行淋球菌的共同PCR扩增试验。扩增产物用微孔板进行了特异性杂交和比色法测定，并将检测结果与

3、标准的培养法结果相比较。淋球菌真阳性由针对其16srRNA的PCR确定。结果：PCR检测淋球菌的敏感性和特异性，男子尿道拭子标本分别为%、97%，尿沉渣标本分别%、%；女子宫颈拭子标本分别为100%、%，尿沉渣标本分别为90%、%。结果提示：无论是以尿道拭子、宫颈拭子为标本，还是以尿沉渣为标本，都是高度敏感的。PCR法检测尿沉渣中的淋球菌，为普查高危人群中淋球菌的感染提供了一种有效的方法。LCR 为1989年建立起来的另一种核酸扩增技术，它需要两对引物，在连接酶的作用下使相邻两引物拉增片段连接起来。Stary等对200例男子和125例女子分别取尿道或宫颈拭子、FVU沉渣作LCR试验检测淋球菌，

4、以尿道或宫颈拭子淋球菌培养作为“金标准”。结果：男子尿道拭子标本LCR法检测淋球菌的敏感性和特异性均为100%，尿道拭子培养法检测淋球菌的敏感性和特异性分别为%、100%，FVU沉渣标本LCR法检测淋球菌的敏感性和特异性分别为98%、100%。女子FVU沉渣标本LCR法检测淋球菌的敏感性最高：%，宫颈拭子标本培养法敏感性最低：%(P)。该研究结果提示男子FVU沉渣LCR法检测淋球菌具有优越性。免疫学技术：近年来出现一种增强发光酶免疫分析新技术。其基本原理是将某种发光剂或其衍生物加入到一个免疫反应体系中，在酶的催化作用下产生发光，可以发光强度来计算待测抗原或抗体的量。而加入发光增强剂后，发光信号

5、增强，持续时间延长，可以重复测量，方法灵敏、准确6、7。非淋菌性尿道炎Crotchfelt等也同时对CT进行了共同PCR扩增试验。CT的真阳性由DFA或针对CT的主要外膜蛋白PCR确定。结果：男子尿道拭子标本PCR法检测CT的敏感性和特异性分别为%、%，尿沉渣标本分别为%、%。女子宫颈拭子标本PCR法检测CT的敏感性和特异性均为100%，尿沉渣标本分别为100%、%。结果提示可以用尿沉渣来代替尿道或宫颈拭子作标本，对大规模高危人群进行CT感染的普查。Gaydos等对高危人群男女各300例的生殖道拭子和尿沉渣分别用LCR法检测CT。LCR测定在CT质粒内用配体标记探针扩增的特殊系列，扩增产物用自

6、动免疫分析仪检查。对于不同结果的标本，对CT的OMP-1的靶基因用LCR法检测予以证实。结果：以尿沉渣为标本，LCR法检测CT的的敏感性和特异性分别为：男子100%、%，女子100%、%。提示LCR法检测FVU中的CT具有高度的敏感性和特异性，用该 方法普查STD高危人群中CT的感染，极有实际意义。随后，Gaydos等10对该课题进行了下一步的研究。他们取得408例美国高校女生志愿者FCU沉渣，分别用PCR法和LCR法检测CT。结果：PCR法的敏感性，特异性分别为：%、%，LCR法的敏感性、特异性分别为89%、%。因此，作者认为以尿沉渣为标本，用PCR法和LCR法检测CT，其敏感性比用宫颈拭子

7、标本作PCR要敏感得多。原因可能是在宫颈分泌物中含有PCR抑制因子11。Mocada等12用EIA法对1341例有症状和816例无症状男性FCU标本中CT抗原进行了检测。作者采用了4种商品化EIA试剂盒：Kodak sure Cell,Chlamydiazyme,Syva Micro Trak和IDEIA来检测FCU的沉渣，取尿道拭子标本作组织培养。结果：有症状者EIA法敏感性和特异性范围分别为76%91%、95%99%。组织培养法敏感性约为90%。无症状者EIA法特异性高达96%99%，敏感性因标本冷冻与否而波动较大，未经冷冻标本Chlamdiazyme法敏感性为77%，尿沉渣Syra eI

8、A法敏感性最高：86%。作者认为EIA法检测有或无病症男性FCU的敏感性相当于尿道拭子标本的组织培养分离法。用EIA法检测尿沉渣标本，可以提供筛查无症状男子CT感染的一种非侵入性方法。而Stary等13应用两种DNA扩增法PCR、LCR和酶免疫测定法法对705例无症状男子FUV中的CT进行了检测。所用CT抗原检测试剂盒为Micro track EIA及DFA，LCR为扩增质粒DNA的LCx试剂盒，PCR为Amplicor试剂盒。真阳性用DFA法或用针对CT的主要外膜蛋白基因的LCR对标本或备用标本进行确证。结果：EIA、PCR、LCR法的敏感性分别为%、%、%，特异性分别为%、%、100%。E

9、IA法检测尿沉渣的CT敏感性远不如PCR、LCR法，而尤其以LCR法敏感性最高。尖锐湿疣Iwasawa等14检查了47例男子尿沉渣标本，其中29例有尿道内尖锐湿疣，25例尿道内CA作组织病理学检查。3例为阴茎CA。15例无CA者作健康对照。使用HVP6、11、16、18和33的共同引物L1型特异引物作PCR，共检出22例HPV dNA均阳性。同一患者尿液中与尿道内CA组织中检出HPV类型相同。因此，作者认为：尿液可冲下尿道上皮被HPV感染的细胞，尿沉渣PCR检测HPV dNA，能鉴定男子尿道内HVP的感染，用尿液作标本检测HPV DNA是一种非侵入性的、简单的方法，比活检更具可行性，适合用作尿

10、道内HPV感染的流行病学调查，也可用于评价治疗效果。作者还分析了部分尿道内CA患者尿沉渣PCR法检测HPV dNA阴性的原因，可能与尿中含有的抑制因子如脲、铁、肝素等有关，可通过尿标本煮沸、氯仿-酚抽提等方法予以避免。艾滋病目前检测HIV-抗体主要采用免疫学方法。常用的方法有EIA法、蛋白印迹法等。Emmons等15报告了以唾液为标本，检测HIV-抗体能达到很高的精确度。采用ELISA、IgG抗体捕获酶联免疫吸附法、WB等方法，对高危、低危人群唾液标本进行了HIV-抗体的检测，敏感性达%100%，特异性达%100%。其中以GACELISA、ELISA+WB为最优越。作者认为，唾液与血清标本比较

11、，具有易采取、依从性好、敏感性及特异性均高等优点。Saville等16对615名美国高危、低危人群进行了研究。他们对615名志愿者全部采取了唾液和血清标本。两种不同的唾液采取设备和快速检测系统包括the Orapette/SalivaCard HIV-1/HIV-2,the OmniSal/ImmunoCcmbHIV-1和HIV-2。血清组用ELISA法检查HIV-1和HI V-2抗体，并用WB法作确认试验。结果：两种快速唾液标本测定法的敏感性为100%，特异性为%100%。作者认为：这种快速检查技术和简易采取唾液的使用方法相结合，可作为有效的、精确的、常规的检查HIV-抗体方法，尤其适合对大

12、规模人群的初筛试验。小结淋球菌的检出对淋病有确认意义，PCR、LCR法检测尿沉渣中的淋球菌具有很高的敏感性和特异性，这种非侵入性检查方法非常有利于大规模的高危低危人群的普查。CT是非淋菌性尿道炎的主要病原菌，用PCR、LCR法检查尿沉渣中CT，具有很高的敏感性和特异性，完全可以取代尿道/宫颈拭子标本对大规模高危/低危人群进行普查，是非常理想的非侵入性检查方法。免疫学方法检测HIV-抗体，目前还处于无法替代的地位。以唾液为标本检测HIV-抗体，与以血清为标本相比较，其敏感性和特异性没有显着差异。George等18认为口腔粘膜渗出液与血液标本比较具有以下潜在优势：没有静脉穿刺的压迫和疼痛感；安全；

13、被检查者依从性好；更经济；更方便。参考文献QuinnTransm Dis,1994;21(2 Suppl):19-27RogersPathol,1994;25(60:591-593Crotchfelt KA etClin Microbiol,1997;35(6):1536-1540Stary A etClin Microbiol,1997;35(1):239-242Larry J etChem,1991;37(9):1472-1481Mccapra F etBiolumin Chemilumin,1989;4(1):51-55Bonini PA et al.J Biolumin Chemilu

14、min,1990;5(2):193-198Zheng HY etClin Invest,1992;90(9):1000-1006Gaydos CA etTransm Dis,1996;23(5):402-406Gaydos CA etInfect Dis,1998;177:417-424Bauwens JE etClin Microbiol,1993;31:3032-3037Moncada J etTransm Dis,1994;21(1):8-12Stary A etTransm Dis,1996;23(2):93-102Iwasawa AK etTransm Dis,1997;24(3):165-168Emmons W etJ Med,1997;102(4A):15-20Saville&nb sp;RD etClin Lab Anal,1997;11(1);63-68Geddy PM etMed ,1993;69:276-279George JR etJ Med ,1997;102(4A):21-25