性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展.docx

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性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展

性传播疾病的非侵入性检查方法研究新进展

　　摘要:

近年来淋病、非淋菌性尿道炎、尿道内尖锐湿疣、艾滋病等性传播病的非侵入性检查方法研究取得新进展，其中核酸扩增技术敏感性高、特异性强，可作为淋病、非淋菌性尿道炎的首选检查方法，对尿道内尖锐湿疣的诊断和疗效评定也有一定的临床意义。

采用免疫学方法检测HIV-抗体，以唾液为标本，具有与血清标本同样的诊断意义。

　　人们一直在寻找更灵敏、特异、快速、非侵入性的检测方法来诊断性传播疾病。

近年来，国外学者应用清晨首次尿，或长时间不排尿后的首段尿作离心沉淀，用尿沉渣来检测淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等病原体，应用唾液或口腔粘膜渗出液检测HIV-抗体，以分子生物学、免疫学新技术来检测这些病原体或其抗体，使STD诊断手段显着增加。

现就近年国外有关STD的非侵入性检查方法研究新进展作一综述。

　　淋病

　　核酸扩增技术：

核酸扩增技术的问世，使临床实验室检测感染性病原体的敏感性显着提高，可检测到标本中一个基因拷贝[1]。

聚合酶链反应，和连接酶链反应，是核酸扩增技术中最常用的方法。

　　PCR是1985年建立起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，它需要一对引物。

Crtchfelt等对344例男子的尿道拭子、尿沉渣标本和192例女子的宫颈拭子、尿沉渣标本分别进行淋球菌的共同PCR扩增试验。

扩增产物用微孔板进行了特异性杂交和比色法测定，并将检测结果与标准的培养法结果相比较。

淋球菌真阳性由针对其16srRNA的PCR确定。

结果：

PCR检测淋球菌的敏感性和特异性，男子尿道拭子标本分别为%、97%，尿沉渣标本分别%、%；女子宫颈拭子标本分别为100%、%，尿沉渣标本分别为90%、%。

结果提示：

无论是以尿道拭子、宫颈拭子为标本，还是以尿沉渣为标本，都是高度敏感的。

PCR法检测尿沉渣中的淋球菌，为普查高危人群中淋球菌的感染提供了一种有效的方法。

　　LCR为1989年建立起来的另一种核酸扩增技术，它需要两对引物，在连接酶的作用下使相邻两引物拉增片段连接起来。

Stary等对200例男子和125例女子分别取尿道或宫颈拭子、FVU沉渣作LCR试验检测淋球菌，以尿道或宫颈拭子淋球菌培养作为“金标准”。

结果：

男子尿道拭子标本LCR法检测淋球菌的敏感性和特异性均为100%，尿道拭子培养法检测淋球菌的敏感性和特异性分别为%、100%，FVU沉渣标本LCR法检测淋球菌的敏感性和特异性分别为98%、100%。

女子FVU沉渣标本LCR法检测淋球菌的敏感性最高：

%，宫颈拭子标本培养法敏感性最低：

%（P＜）。

该研究结果提示男子FVU沉渣LCR法检测淋球菌具有优越性。

　　免疫学技术：

近年来出现一种增强发光酶免疫分析新技术。

其基本原理是将某种发光剂或其衍生物加入到一个免疫反应体系中，在酶的催化作用下产生发光，可以发光强度来计算待测抗原或抗体的量。

而加入发光增强剂后，发光信号增强，持续时间延长，可以重复测量，方法灵敏、准确[6、7]。

　　非淋菌性尿道炎

　　Crotchfelt等也同时对CT进行了共同PCR扩增试验。

CT的真阳性由DFA或针对CT的主要外膜蛋白PCR确定。

结果：

男子尿道拭子标本PCR法检测CT的敏感性和特异性分别为%、%，尿沉渣标本分别为%、%。

女子宫颈拭子标本PCR法检测CT的敏感性和特异性均为100%，尿沉渣标本分别为100%、%。

结果提示可以用尿沉渣来代替尿道或宫颈拭子作标本，对大规模高危人群进行CT感染的普查。

　　Gaydos等对高危人群男女各300例的生殖道拭子和尿沉渣分别用LCR法检测CT。

LCR测定在CT质粒内用配体标记探针扩增的特殊系列，扩增产物用自动免疫分析仪检查。

对于不同结果的标本，对CT的OMP-1的靶基因用LCR法检测予以证实。

结果：

以尿沉渣为标本，LCR法检测CT的的敏感性和特异性分别为：

男子100%、%，女子100%、%。

提示LCR法检测FVU中的CT具有高度的敏感性和特异性，用该方法普查STD高危人群中CT的感染，极有实际意义。

　　随后，Gaydos等[10]对该课题进行了下一步的研究。

他们取得408例美国高校女生志愿者FCU沉渣，分别用PCR法和LCR法检测CT。

结果：

PCR法的敏感性，特异性分别为：

%、%，LCR法的敏感性、特异性分别为89%、%。

因此，作者认为以尿沉渣为标本，用PCR法和LCR法检测CT，其敏感性比用宫颈拭子标本作PCR要敏感得多。

原因可能是在宫颈分泌物中含有PCR抑制因子[11]。

　　Mocada等[12]用EIA法对1341例有症状和816例无症状男性FCU标本中CT抗原进行了检测。

作者采用了4种商品化EIA试剂盒：

KodaksureCell,Chlamydiazyme,SyvaMicroTrak和IDEIA来检测FCU的沉渣，取尿道拭子标本作组织培养。

结果：

有症状者EIA法敏感性和特异性范围分别为76%～91%、95%～99%。

组织培养法敏感性约为90%。

无症状者EIA法特异性高达96%～99%，敏感性因标本冷冻与否而波动较大，未经冷冻标本Chlamdiazyme法敏感性为77%，尿沉渣SyraeIA法敏感性最高：

86%。

作者认为EIA法检测有或无病症男性FCU的敏感性相当于尿道拭子标本的组织培养分离法。

用EIA法检测尿沉渣标本，可以提供筛查无症状男子CT感染的一种非侵入性方法。

　　而Stary等[13]应用两种DNA扩增法PCR、LCR和酶免疫测定法法对705例无症状男子FUV中的CT进行了检测。

所用CT抗原检测试剂盒为MicrotrackEIA及DFA，LCR为扩增质粒DNA的LCx试剂盒，PCR为Amplicor试剂盒。

真阳性用DFA法或用针对CT的主要外膜蛋白基因的LCR对标本或备用标本进行确证。

结果：

EIA、PCR、LCR法的敏感性分别为%、%、%，特异性分别为%、%、100%。

EIA法检测尿沉渣的CT敏感性远不如PCR、LCR法，而尤其以LCR法敏感性最高。

　　尖锐湿疣

　　Iwasawa等[14]检查了47例男子尿沉渣标本，其中29例有尿道内尖锐湿疣，25例尿道内CA作组织病理学检查。

3例为阴茎CA。

15例无CA者作健康对照。

使用HVP6、11、16、18和33的共同引物L1型特异引物作PCR，共检出22例HPVdNA均阳性。

同一患者尿液中与尿道内CA组织中检出HPV类型相同。

因此，作者认为：

尿液可冲下尿道上皮被HPV感染的细胞，尿沉渣PCR检测HPVdNA，能鉴定男子尿道内HVP的感染，用尿液作标本检测HPVDNA是一种非侵入性的、简单的方法，比活检更具可行性，适合用作尿道内HPV感染的流行病学调查，也可用于评价治疗效果。

作者还分析了部分尿道内CA患者尿沉渣PCR法检测HPVdNA阴性的原因，可能与尿中含有的抑制因子如脲、铁、肝素等有关，可通过尿标本煮沸、氯仿-酚抽提等方法予以避免。

　　艾滋病

　　目前检测HIV-抗体主要采用免疫学方法。

常用的方法有EIA法、蛋白印迹法等。

　　Emmons等[15]报告了以唾液为标本，检测HIV-抗体能达到很高的精确度。

采用ELISA、IgG抗体捕获酶联免疫吸附法、WB等方法，对高危、低危人群唾液标本进行了HIV-抗体的检测，敏感性达%～100%，特异性达%～100%。

其中以GACELISA、ELISA+WB为最优越。

作者认为，唾液与血清标本比较，具有易采取、依从性好、敏感性及特异性均高等优点。

　　Saville等[16]对615名美国高危、低危人群进行了研究。

他们对615名志愿者全部采取了唾液和血清标本。

两种不同的唾液采取设备和快速检测系统包括①theOrapette/SalivaCardHIV-1/HIV-2,②theOmniSal/ImmunoCcmbⅡHIV-1和HIV-2。

血清组用ELISA法检查HIV-1和HIV-2抗体，并用WB法作确认试验。

结果：

两种快速唾液标本测定法的敏感性为100%，特异性为%～100%。

作者认为：

这种快速检查技术和简易采取唾液的使用方法相结合，可作为有效的、精确的、常规的检查HIV-抗体方法，尤其适合对大规模人群的初筛试验。

　　小结

　　淋球菌的检出对淋病有确认意义，PCR、LCR法检测尿沉渣中的淋球菌具有很高的敏感性和特异性，这种非侵入性检查方法非常有利于大规模的高危／低危人群的普查。

CT是非淋菌性尿道炎的主要病原菌，用PCR、LCR法检查尿沉渣中CT，具有很高的敏感性和特异性，完全可以取代尿道/宫颈拭子标本对大规模高危/低危人群进行普查，是非常理想的非侵入性检查方法。

免疫学方法检测HIV-抗体，目前还处于无法替代的地位。

以唾液为标本检测HIV-抗体，与以血清为标本相比较，其敏感性和特异性没有显着差异。

George等[18]认为口腔粘膜渗出液与血液标本比较具有以下潜在优势：

①没有静脉穿刺的压迫和疼痛感；②安全；③被检查者依从性好；④更经济；⑤更方便。

　　参考文献

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