微生物的分离和培养.docx

1、微生物的分离和培养微生物的分离和培养（2012大纲卷）5.关于细菌的叙述中，正确的是A.不同种类细菌的生长均需要相同碳源B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落C.细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期D.培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选【答案】D【解析】自养型细菌可以利用无机碳源，异养型细菌只能利用有机碳源，A错误。分离细菌并获得单菌落需要固体培养基，B错误。芽孢是细菌为适应不利的环境而产生的休眠体，而调整期资源丰富，不会产生芽孢，C错误。金黄色葡萄球菌有耐高浓度盐的特点，D正确。【试题点评】本题主要考查微生物培养和分离的相关知识，考查学生的分析和理解能力，难度中等。

2、需要学生在平时识记常见微生物的生活特征和生活史，理解几种常见的培养基的一般作用。（2012上海）44高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图15所示。过程称为_，过程是为了_。【答案】稀释 单个菌落的筛选（或筛选）（2012上海）45号培养基称为_(按功能分)；该培养基中除了加入淀粉外，还需加入另一种重要的营养成分_。 A琼脂 B葡萄糖 C硝酸铵 D碳酸氢钠【答案】选择培养基 C（2012上海）46一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了_。在高温淀粉酶运用到工业生产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定。图16中的曲线表

3、示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，即图16中的曲线。【答案】.杀死培养基中的细菌芽孢（2012北京）5高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上来源:中。国教。育出。版网D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上【答案】C【解析】植物组织培养中的外植体必须在严格的无菌环境中进行培养

4、，而且操作的各环节都要注意严格灭菌，必须无菌操作，C对；葡萄酒的制作原理是利用酵母菌无氧发酵时产生酒精，在无氧条件下，大部分微生物都不能生存，随着发酵的进行，酒精度增大，也有杀菌的作用；而制作腐乳时，主要是将毛霉等微生物接种在豆腐上，此过程的加盐、加卤汤等操作均有一定的杀菌作用；选择培养基只能允许目的菌生长，会抑制其他杂菌生长，因此不是严格无菌操作时A、B、D选项的情况下比C选项的受影响要小。【试题点评】本题考查对传统发酵技术的应用、微生物的培养和植物培养技术中无菌操作的掌握。重点要求考生熟悉相应操作过程中的注意事项，这种类型的题目考查的内容相对固定，重点放在细节，难度中等。（2011重庆）2

5、.下列有关细菌培养的叙述，正确的是A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C.向液体培养基中通人氧气能促进破伤风杆菌的生长D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动【答案】D【解析】菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌；青霉素培养基往往是真菌选择培养基，在加青霉素的培养基中，往往是抑制细菌生长而促进真菌生长；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长（2011新课标）39【生物 选修1：生物技术实践】（15分）有些

6、细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。【答案】（1）原油 选择 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强 （4

7、）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰【解析】该同学筛选能降解原油的菌株，可以将样品稀释液置于以原油为唯一碳源的固体培养基中培养，该培养基功能上属于选择培养基。菌株的接种方法，常用的有两种：平板划线法和稀释涂布平板法。菌株分解周围的营养物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株的降解能力强。实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。（2011四川）30（21分）回答下列I、II小题。I.（9分）有人通过实验探究某海藻的最佳培养条件，以获得最大生物量（注：生物量指单位体积的藻体干重）。（1）在有光条件下培养海藻时

8、，培养液中必须含有_,还需定时向培养液中通入空气，目的是提供 。海藻光合速率随着向光照强度的变化曲线如下图，图中B点表示最佳的_培养条件。（2）该海藻的无光条件下仍能生长，但需在培养液中添加葡萄糖等有机物，目的是提供_。（3）向培养液中添加葡萄糖配成不同浓度的培养液，在一定光照条件下培养该海藻，测定海藻的生物量如下表： 要确定培养海藻的最佳葡萄糖浓度，还需设计_的实验。（4综合上述实验，获得该海藻最大生物量的培养条件是_。【答案】（1）各种必需矿质元素（1分） CO2 （1分） 光照（1分）（2）碳源和能源（2分）（3）在0.2-0.6g/L之间更细分的浓度梯度 （2分）（4）适宜光照，添加适

9、宜浓度的葡萄糖 （2分）【解析】（1）海藻是植物，因此培养时必需在培养液中加入各种必需矿质元素。通入空气，目的是提供光合作用所需CO2。B点光照强度生物量最大。（2）无光条件下海藻不能进行光合作用，因此必需提供有机物作C源、能量来源。（3）要确定培 养海藻的最佳葡萄糖浓度，还需在0.2-0.6g/L之间更细分的浓度梯度。（4）、根据图，获得该海藻最大生物量需光照强度适宜，据表格知需添加适宜浓度葡萄糖（2011山东）34.（生物生物技术实验）研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或_接种。对新配制的培养基灭菌时所用的

10、设备是_。实验前需对超净工作台进行_处理。（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的_来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。【答案】（2）稀释涂布平板法 高压蒸汽灭菌锅 紫外线消毒（4）大小（2010山东）34. 【生物生物技术实践】生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。 用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_、_方法从油料作物中提取。（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供_，培养基

11、灭菌采用的最适方法是_法。（3）测定培养液中微生物数量，可选用_法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测_，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用_技术使脂肪酶能够重复使用。（4）若需克隆脂肪酶基因，可利用耐热DNA聚合酶催化的_技术。【答案】（1） 压榨；萃取（注：两空顺序无先后）（2）碳源 高压蒸汽灭菌（3）显微镜直接计数 酶活性（或酶活力） 固定化酶（或固定化细胞）（4）PCR（或多聚链式反应，聚合酶链式反应）【解析】本题综合考查多种生物技术（1）因为植物油不挥发，所以不适合采用蒸馏法提取，应用压榨法或萃取法提取。（2）植物油中不含矿物质元素，只为微生物提供碳源。培养

12、基适合用高压蒸汽灭菌发进行灭菌。（3）测定微生物的数量，可以用显微镜直接计数。分离出的脂肪酶要对其活性进行检测，以确定其实用价值。可以利用酶固定技术重复使用脂肪酶。（4）利用PCR技术可以扩增基因。（2010全国卷）34（12分）某种细菌体内某氨基酸（X）的生物合成途径如图：这种细菌的野生型能在基本培养基（满足野生型细菌生长的简单培养基）上生长，而由该种细菌野生型得到的两种突变型（甲、乙）都不能在基本培养基上生长；在基本培养基上若添加中间产物2，则甲、乙都能生长；若添加中间产物1，则乙能生长而甲不能生长。在基本培养基上添加少量的，甲能积累中间产物1，而乙不能积累。请回答： （1）根据上述资料可

13、推论：甲中酶 的功能丧失；乙中酶 的功能丧失，甲和乙中酶的功能都正常。由野生型产生甲、乙这两种突变型的原因是野生型的 （同一、不同）菌体中的不同 发生了突变，从而导致不同酶的功能丧失。如果想在基本培养基上添加少量的X来生产中间产物1，则应选用 （野生型、甲、乙）。（2）将甲、乙混合接种于基本培养基上能长出少量菌落，再将这些菌落单个挑出分别接种在基本培养基上都不能生长。上述混合培养时乙首先形成菌落，其原因是 （3）在发酵过程中，菌体中X含量过高时，其合成速率下降。若要保持其合成速率，可采取的措施是改变菌体细胞膜的 ，使X排出菌体外。【答案】（1） 由题干“而甲不能生长”，可知：乙中酶a功能丧失，

14、甲中酶b功能丧失。长生甲、乙两种突变的原因是野生型的不同菌体的不同基因发生了突变。因为“在培养基上添加少量的X，甲能积累中间产物1”，所以要想产生中间产物1，应选用甲（2） 由题干“若添加中间产物1乙能生长”，而“甲能积累中间产物1”所以将甲、乙混合培养时甲产生的中间产物1能使乙合成X，使乙首先形成菌落。（3） 在发酵过程中，可以采取一定的手段改变细胞膜的通透性，使X排出细胞外（2009年广东）38. （10分）生物技术实践（1）商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生 ，可根据其大小选择目的菌株，所

15、得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间的 表示。【答案】透明圈； 植酸钠的消耗量（减少量）或磷酸（肌酸）的生成量（产量）；（2009四川）2.下列关于几种微生物的营养代谢和生长繁殖的描述，正确的是A. 根瘤菌通过生物固氮，制造了含氮养料和含碳有机物B. 接种到培养基上的青霉菌，进入对数期能大量积累青霉素C. 培养液中溶氧量的变化，会影响酵母菌的生长繁殖和代谢途径D. 用32P标记的噬菌体感染细菌，在新形成的噬菌体中都能检测到32P【答案】C（2009重庆）3. 下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是 A. 大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个环状D

16、NA分子 B. 在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源 C. 用大肠杆菌工程菌生产干扰素时应及时添加核酸等生长因子 D. 处于对数期的大肠杆菌常作为生产用的菌种和科研的材料【答案】D（2009全国II卷）33. （10分）利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现在野生菌株对淀粉的转 化效率低，某同学尝试对其进行改造，以活得高效菌株。（1）实验步骤：配置 （固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为 。将 接入已灭菌的培养基平板上。立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是 。菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现 现象的菌落即

17、为初选菌落。经分离、纯化后即可达到实验目的。（2）若已得到二株变异菌株和，其淀粉转化率较高。经测定菌株淀粉酶的催化活性高，菌株的淀粉酶蛋白含量高。经进一步研究发现，突变发生在淀粉酶基因的编码区或非编码区，可推测出菌株的突变发生在 区，菌株的突变发生在 区。【答案】（1）固体 玉米淀粉野生菌株对野生菌株进行诱变浅色范围大（2）编码 非编码【解析】利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，首先一步应是配制固体培养基，其碳源是玉米淀粉；其次要将野生菌株接种到培养基上；用紫外线照射的目的是对野生菌株进行诱变处理；加碘液是为了检验淀粉有没有被分解，如果颜色变浅，说明淀粉被分解了，这种菌落即为初选菌落。依题意，菌株

18、淀粉酶的催化活性高，说明该突变发生在编码区，菌株淀粉酶的蛋白含量高，说明该突变发生在非编码区。（2008山东）34.科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。（2）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。（4）细菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。【答案】(2)碳源 氮源(4)平板划线法 稀释涂布平板法(稀释混合平板法) 灭菌（2008广东）38(生物技术实践，10分) 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的

19、废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题：（1）中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基 (A影响；B不影响)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用_法。（2）为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于 ；使用 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养?（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小? （4）实验过程中如何防止其它微生物的污染?【答案】（1）中的选择培养基中应加入苯酚作为碳源，中不同浓度的碳源A影响细菌数量，稀释涂

20、布平板法来测定中活菌数目。（2）与培养基的主要区别在于的培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基的中加入苯酚作为碳源。使用释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。（3）5支洁净培养瓶分别加入相同培养基（加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，用苯酚调试使之相等，苯酚是唯一的碳源）分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种在相同的适宜条件下培养相同的时间再用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯酚的能力不同，5支瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH试纸

21、检测这5支瓶内培养基的pH值，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作：具体内容见人教版选修1 P15（2008全国）3下列关于细菌的叙述，错误的是（ ）A硝化细菌能以NH3 作为氮源和能源物质B某些细菌可以利用光能固定CO2 合成有机物C生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌【答案】D【解析】某些细菌如蓝细菌（蓝藻）、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长

22、因子，它们都是要从外界获得补充的。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。（2008天津）31、（16分）莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津的作用机理之一是阻断光反应中的电子传递过程，影响NADP+形成，进而影响在中进行光合作用的暗反应过程，最终抑制杂草生长。从使用莠去津农田中，选到了能遗传的耐莠去津杂草，将它与敏感型植株杂交，结果见下表：杂交亲本后代中耐药型植株比例（%）后代中敏感型植株比例（%）耐药型敏感

23、型1000敏感型耐药型0100由表推断，控制该耐药性状的基因位于。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。据图回答：由于莠去津的作用，在长期使用莠去津的土壤中可能含有目的菌。下图是AC瓶中三类细菌的最大密度柱形图，由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是；甲类细菌密度迅速降低的主要原因是；从A瓶中应选择细菌生长处于期的菌液加入到B瓶中，培养效果会更好。在固体培养基中，无透明菌落利用的氮源主要是；有透明带菌落利用的氮源主要是，据此可筛选出目的菌。【答案】 NADPH叶绿体基质 细胞质中 自然

24、选择初步选择能降解莠去津的细菌（目的菌）并提高其密度培养液中缺少甲类细菌可利用的氮源或（和）有氧条件抑制了甲类细菌的生长对数 氮气莠去津（2008北京）31（18分）水华可因蓝藻爆发所致。科研人员尝试利用某种细菌限制蓝藻数量，相关实验的示意图如下。图中表示实验步骤。请回答问题: (1)从细胞结构的特点与复杂程度上看，蓝藻属于 _细胞；从生态系统的营养结构上看，蓝藻处于_ ；蓝藻的代谢类型通常是 _。 (2)引发水华的蓝藻可产生蓝藻毒素。蓝藻毒素 _（是、不是）蓝藻生长、繁殖所必需的物质。蓝藻毒素对人是一种致癌因子，可使原癌基因_ ，导致正常细胞发生癌变。 (3)图中、通常使用的是、中已培养至_

25、 期的蓝藻和溶藻细菌。(4)图中实验组在每个培养皿中，如果做三个重复实验，可采取的做法是： _ 。为完善实验设计方案，应增设对照组，可采取的做法是： _ 。(5)蓝藻通常呈蓝绿色，观察实验结果，发现培养皿中出现褪色空斑，说明蓝藻_ 。【答案】(1)原核 第一营养级 自养需氧型 (2)不是 从抑制状态变成激活状态 (3)对数(4)在每个培养皿中，选择三个不同位置，各滴加等量菌液在每个培养皿中，选择三个不同位置，各滴加等量的、不含溶藻细菌的溶藻细菌培养液(5)被溶藻细菌裂解（死亡）【解析】蓝藻（蓝细菌）是原核生物，进行光合作用，是自养需氧生物，在生态系统的成分中属生产者，在营养结构中是处于第一营养

26、级。蓝藻毒素是蓝藻的次级代谢产物，可使蓝藻在生存斗争中处于较有利的地位。原癌基因在正常情况下是处于被抑制状态，当在致癌因子作用下原癌基因被激活，正常细胞分化成为癌细胞。对数期的菌体形态和生理特征稳定，所以微生物培养中，通常选用对数期菌体作为菌种进行培养。题干中已经提示，“在每个培养皿中”“做三个重复实验”，所以只能在一个培养皿中选择三个不同位置，且是重复实验，处理条件是完全相同的。实验组是滴加含溶藻细菌的培养液，那么对照组就滴加不含溶藻细菌的培养液，其他条件均相同（如加的培养液的量、光照、培养的温度等）。由于蓝藻先培养，先形成菌落（绿斑），后加入溶藻细菌的培养液，溶藻细菌分解绿斑里的蓝藻，最终

27、会使蓝藻的菌落（绿斑）褪色成为空斑（蓝藻彻底被裂解死亡）。（2007四川）5.在细菌的连续培养过程中，要以一定速度不断添加新的培养基，同时以同样速度放出老的培养基。下图表示培养基的稀释率（培养基的更新速率）与培养容器中营养物质浓度、细菌代时（细菌数目增加一倍所需的时间）、的关系。下列相关叙述不正确的是（ ）A.在稀释率很低的情况下，稀释率的增加会导致细菌密度的增加B.稀释率从a到b的变化过程中，细菌生长速率不断提高C.稀释率超过b点后，营养物质浓度过高导致细菌死亡率增大，细菌密度降低D.为持续高效地获得发酵产品，应将稀释率控制在b点附近【答案】C【解析】此题考查了微生物的生长情况。微生物的生长

28、有一定的规律，可以划分四个时期，调整期、对数期、稳定期和衰亡期。连续培养就是根据各个时期的特点，使微生物保持较长时间的高速生长。微生物的生长受多种因素的限制，其中营养物质的浓度就是一个因素，营养物质对生长的影响，表现为只有在低浓度时才影响生长速率，浓度高时并不影响生长的速率，因此 A和B答案是正确的。而在b是一个临界点，b点后，细菌的密度减小，代谢产物也会减少，要持续高效获得发酵产品，应控制在b点附近。（2007山东）34（8分）【生物生物技术实践】乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：（1）玉米秸杆经预处理后，应该选用 酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡

29、萄糖。（2）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？ （多选）A酿制果醋的醋酸菌 B.生长在腐木上的霉菌C制作酸奶的乳酸菌 D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌（3）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为 （按功能分），培养基中的碳源为 。（4）从生物体提取出的酶首先要检测 ，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用 技术。（5）发酵阶段需要的菌种是 ，在产生酒精时要控制的必要条件是 。【答案】（8分）（1）纤维素（酶） （2）B、E （3）选择培养基 纤维素（4）酶的活性（活力） 固定化细胞（固定化酶）（5）酵母菌 无氧（密闭、密封）（2007江苏）22不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一【答案】B【解析】以CO2为唯一碳源的自养微生物其能量来自于光能，或者氧化环境中的无机物释放的化学能