饲料厂化验室检测手册要点.docx

1、饲料厂化验室检测手册要点饲料厂化验室操作手册饲料中的水分测定1原理：试样在1052烘箱内，在常压下烘干，直至恒重，逸失的重量为总水分。2测定步骤：洁净的称样皿，在1052烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.0002g，再烘干30 min，同样冷却，称重，直至两次的重量之差小于0.0005g为恒重。用已恒重的称样皿称取2份平行试样，每份2-5g（含水量0.1g以上，样品厚度4mm一下）。准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在1052烘箱中烘3h（以温度达到105开始计时），取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min，称重。在同样烘干1h ,冷却，称重，直至两次称重的重量差小

2、于0.002g.烘干前的质量烘干后的质量水分= 100烘干前的质量粗蛋白的测定1.原理：凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂的作用下用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，加入强碱进行蒸馏，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，算出粗蛋白的含量。2.测定步骤：.消煮：称取样品0.5g，准确放入凯氏烧瓶中，加入6.4g催化剂，15ml硫酸，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360-410），直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h.定容：消煮后冷却，加20ml水至凯氏烧瓶中，摇匀，待消煮试样完全冷却后转移至100ml容量

3、瓶中，用蒸馏水冲洗数次，并一起转入到容量瓶中，至刻度，摇匀，做为试样分解液。.蒸馏:.准备：将蒸馏装置准备妥当以后，先用蒸馏水洗涤，移取分解液10ml，氢氧化钠（40%）10ml，加入少量水，塞好入口玻璃塞，且在入口处加水密封，防止露气，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，在将装有20ml硼酸和2滴甲基红指示剂的锥形瓶放在冷凝管的末端。.滴定：将蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 （体积空白）浓度0.0146.25 粗蛋白= 100 试样质量0.014 与1.00ml盐酸标准溶液【c(Hcl)=1.000/ molL-1】相当的以克表示的氮的质量6.25氮换算成蛋白质的平

4、均系数3.试剂配制：1.混合催化剂：4g硫酸铜+60g无水硫酸钠2.氢氧化钠：40g氢氧化钠+100ml水3.硼酸： 1g硼酸+50ml水4.混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存3个月5.盐酸标准溶液配制： c(Hcl)/ molL-1 盐酸（ml） 1 90 0.5 45 0.1 9_4.盐酸标定方法：取在270300温度下干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.015g，精密称重，加水50ml使溶解，加甲基红溴甲酚绿混合指示剂2滴，用盐酸滴定至溶液由绿色转变为灰红色，在煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液变为灰红色。 空白测定: 称蔗糖0.

5、5g，代替试样，进行空白滴定，消耗0.1 molL-1盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml，消耗0.02 molL-1盐酸标准溶体积不得超过0.3ml. 无水硫酸钠的质量 浓度= (体积-空白)0.052995.蒸馏步骤检测：精确称取硫酸铵0.2g，代替试样进行消化蒸馏，测得硫酸铵含量21.19%0.2%，可知消煮过程和试剂配制是否正常。饲料中纯蛋白测定1.原理：硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。2.试剂：（1）硫酸铜溶液：10g硫酸铜溶于100ml水中。（2）氢氧化钠溶液：将2.5g氢氧化钠溶于100

6、ml水中。（3）氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中。（4）2 molL-1盐酸溶液。3. 测定步骤：准确称取1g左右试样，置于200ml烧杯中，加50ml水，加热至沸，加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上，用倾斜过滤（定性滤纸），然后用60-80热水洗衣涤沉淀5-6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中。消化后进行定氮测定。4.结果计算同粗蛋白测定一样。快速测盐分（饲料级）1. 盐分含量测定原理：溶液澄清，在酸性条件下，加入过量硝酸银溶液使样品溶液中的氯化

7、物形成氯化银沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸铵回滴过量硝酸银，根据消耗硫酸氰铵的量，计算出氯化物的含量。2. 试剂配制：Ango3：称取硝酸银3.4g，用少量水溶解，定容至1L，储于棕色瓶中3. 标定：称取在550下恒温1h的基准氯化钠0.02g，加50ml水，加5%铬酸钾指示剂1ml，用待标定的硝酸银标准溶液滴定至砖红色为终点。200.02 C = 体积4.测定步骤：称取样品2g左右，加200ml蒸馏水搅拌，静止20min，吸取上清液20ml放入锥形瓶，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。浓度体积2000.05845CL = 100样品质量20测食盐中CL的含量称

8、0.02g样品，放入锥形瓶中，加50ml蒸馏水，加1ml铬酸钾（10%），用Ango3滴定成桔红色。浓度体积0.05845CL = 100样品质量粗灰分、钙、磷连续测定（饲料级）1.原理： 试样在550灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣只要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料中的沙石、土等，故称粗灰分。2.步骤： 将干净的坩埚方入高温炉，在55020下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min，称其重量，在已恒重的坩埚中称取2-5g试料，准确至0.0002g。在电炉上小心碳化至无烟，在放入高温炉，于55020下灼烧3h。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器

9、中冷却30min，称取重量。 灰化后的质量 粗灰分= 100% 灰化前的质量钙：在盛有灰分的坩埚中加入10ml（1：3）盐酸,加3滴硝酸，小心煮沸，随即滤入100ml的容量瓶中，用蒸馏水洗涤坩埚和漏斗上的滤纸，定容至100ml，摇匀，取10ml分解液放入锥形瓶，加入50ml水，1%煮沸冷却后的淀粉溶液10ml,乙二胺1ml，三乙醇胺2 ml，孔雀石绿1滴，20%氢氧化钠10 ml，盐酸羟胺少许，钙指示剂少许，然后用EDTA滴定至蓝色。 EDTA体积浓度 Ca= 100 样品质量试剂配制：盐酸：1：31ml盐酸溶于3ml蒸馏水中氢氧化钠：20% 20g的氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中三乙醇胺：

10、 1：11ml三乙醇胺溶于1ml蒸馏水中乙二胺： 1：11ml乙二胺溶于1ml蒸馏水中孔雀石绿：0.001g孔雀石绿溶于1ml蒸馏水中，既0.1g孔雀石绿溶于100g蒸馏水中钙黄指示剂：0.1g钙黄绿素，0.13g甲基百里香酚蓝，5g氯化钾研细混匀，储于磨砂口瓶中备用。（钙红指示剂：1g钙羟酸指示剂与99g氯化钠）EDTA：0.02 molL-1称取8g乙二胺四乙酸二钠，放入烧杯中，加200ml蒸馏水，加热溶解，冷却后转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀稀释至刻度。标定：钙标准溶液0.001g molL-1准确称取在105110下烘干3h，干燥至恒重的基准碳酸钙2.497g，溶于40ml（1：

11、3）盐酸中（沿烧杯壁慢慢加入），加热除去Co2,冷却，转移到1000ml容量瓶中，稀释到刻度，标定方法同测定方法同样。 0.0120（分解液吸取值）EDTA浓度= EDTA的体积磷：取上述分解液1ml，放入50ml的容量瓶中，加10ml钒钼酸铵显色剂，定容至50ml，摇匀，放至20分钟。用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定试样分解液的吸光度 波长所对应得含磷量磷含量= 质量100分解液移取量试剂配制：钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，先加入量水，使其差不多溶解，加硝酸250ml，另取钼酸铵25g加蒸馏水400ml溶解，冷却后将此溶液倒入上述溶液中，加水定容至1000ml

12、。避光保存，入生成沉淀则不能使用。磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105烘箱中干燥1小时，在干燥器中冷却后称取0.2195g，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，摇匀，即50微克/毫升的磷标准溶液。标准曲线绘制： 准确吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静止10分钟以上，以0溶液为参比，用10毫米比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。饲料中粗脂肪的测定1.原理：用装有乙醚的索氏脂肪提取器，提取试样中的脂肪，称脂

13、肪包的重量，提取的脂肪中除脂肪外还有有机酸，磷脂，脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称为粗脂肪或乙醚提取物。2.测定步骤：称试样15g（准确至0.0002g），于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105烘箱中，烘干120min，滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准，将滤纸筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml，在60-75的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数约每小时10次，共回流约50次（油脂高的约70次）或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。（约3个小时）取出试样，仍用原提取器回收乙醚，直至抽提瓶全部回收完，取下抽提瓶，将回收的乙

14、醚倒入乙醚瓶中保存。取出滤纸包，仍放回原称样皿，开盖在1052烘箱中烘干2h，（刚放烘箱时将烘箱门打开，使滤纸包中的乙醚挥发完以后在合上门，否者会有危险），取出，放入干燥器中冷却，称重，在烘干30min，冷却称重，直至两次误差小于0.001g为止。 烘干后试样的重量提取脂肪后试样的重量 粗脂肪= 100 烘干前试样的重量大豆脲酶活性的测定（滴定法）1.选用范围：本法适用于大豆制品品及其副产品中脲酶活性的测定，可确认大豆的温热处理程度和抗胰蛋白酶等抗营养因子的水平。2.定义：尿素酶活性指：在300.5和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。3.原理： 将粉碎的大豆制品

15、与中性尿素缓冲溶液混合，在30保持30min，尿酶催化尿素水解产生氨的反应。用过里盐酸中和产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。4. 试剂：1 尿素缓冲溶液：准确称取3.4g经110烘干的磷酸二氢钾和4.45g磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，再将30g尿素溶解在此缓冲液中，可保持一个月。2 0.1 molL-1盐酸溶液：用量筒量取8.4ml浓盐酸（GB 622），注入1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。3 0.1molL-1氢氧化钠（GB 629）标准溶液 ：按GB 601的规定配制。（5ml NaOH饱和溶液定容至1L）5. 测定步骤： 准确称取已粉碎的试样约0.2g（精确

16、至0.0001g），置于刻管中（如活性很高，只称0.05g）。加入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于（300.5）恒温水浴中，准确计时保持30min。取下后立即加入10ml 0.1molL-1盐酸溶液,并迅速冷却至20，将试管中内容物无损地移入50ml烧杯中，用5ml蒸馏水冲洗试管2次，立即用0.1molL-1的氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.7,记录氢氧化钠标准溶液的消耗量。同时做空白试验。尿素苯酚磺试剂法（脲酶活性）1.原理：在尿素苯酚磺指示剂存在的条件下，以尿素转变成氨的多少及显色度检测大豆饼中的脲酶的活性。2.试剂与溶液： 0.2molL-1氢氧化钠溶液：量取澄清的

17、饱和氢氧化钠溶液11.2ml，置于1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水稀释至刻度，混匀即可。 0.1 molL-1硫酸溶液：量取5.6ml浓硫酸，注入已加了少量蒸馏水的1000ml容量瓶中，冷却稀释至刻度。 尿素苯酚磺指示剂：取1.2g苯酚红溶于30ml 0.2 molL-1氢氧化钠溶液中，用蒸馏水稀释至300ml，加入90g尿素，溶解后再用水稀释至2000ml，加70ml 0.1 molL-1硫酸溶液，稀释至3000ml。配好的溶液应呈琥珀色，若溶液转变呈桔红色时，用再适量滴加0.1 molL-1硫酸溶液，调成琥珀色。试剂最好现配现用。3.测定步骤： 取粉碎的大豆粕少许，在表面皿上均匀的铺成

18、薄层，用吸管吸取尿素苯酚磺指示剂，浸湿表面皿上平铺的大豆粕，放置5min，观察显色结果。4.结果判定： 无任何红点出现时，再放置25min，若仍无红点出现时，说明被检大豆粕没有脲酶活性，是过熟的大豆粕。 有少数红点，或表面有25%-50%红点出现，表示含有微量脲酶，大豆粕可以使用。 若大豆粕表面75%-100%被红点覆盖，说明脲酶活性很强，粕过生，不能直接使用。挥发性盐基氮（VBN）测定方法 1、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。2、试剂： 1、0.lmolL盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏

19、水定容至1000mL。2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。5、1%氧化镁溶液：化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。3、测定： 1、称取15g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。 2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。 3、蒸馏

20、装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。 4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，再加入10mL 1%的氧化镁溶液，用少量蒸馏水冲洗进样入口，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。 5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。4、测定结果计算： （盐酸体积空白）浓度14挥发性盐基氮的含量100 （ 质量分解液体液）分解液总体积2、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，

21、以其算术平均值为结果。允许相对偏差为5%油脂酸价测定 取干燥的锥形瓶（带手套取）。称重记录，加入测样2-3g，称重记录，取烧杯加入50ml醇醚，5滴酚酞指示剂，Naoh滴定空白体积变成粉紫色，把滴定的醇醚倒入盛有测样的锥形瓶中，摇匀，再滴5滴酚酞指示剂，用Naoh滴定成粉红色，半分钟之内不变色。计算公式： 浓度（体积空白）56.11酸价= 样品质量试剂配制：Naoh标准溶液0.05mol/L配制方法1：取2g氢氧化钠放入1000ml容量瓶中，用新沸过的冷水定容至1000ml，摇匀。方法2：取饱和溶液2.8ml，用新沸过的冷水定容至1000ml标定：取在105-110干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢

22、钾约0.2g，精密称重，加新沸过的冷水50ml，摇匀，使其溶解，加酚酞指示剂2滴，用本液滴定至粉红色。 邻苯二甲酸氢钾质量浓度 = - Naoh体积0.2042中性醇醚：2：1（2ml乙醇+1ml乙醚）1%酚酞乙醇指示剂：1g酚酞+100ml乙醇油脂TBA值的测定方法1.原理： 油脂受到光、热、空气中氧等的作用，发生酸败。分解出醛、酮之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。2.操作步骤：1、标准曲线的绘制 准确吸取上述标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0

23、.4、0.5、0.6ml置于纳氏比色管中，加水至总体积为5ml，加入5ml TBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得吸光度并绘制标准曲线。2、样品制备与检测 准确称取均匀的豆油15g，置于100ml具塞三角瓶内，准确加入25ml三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态），用四层滤纸过滤，除去油脂。准确移取上述滤液10ml置于25ml比色管内，准确加入TBA溶液10ml，混匀，加塞，置于90水浴内保温40min，取出，冷却1h，移入小试管内，离心5min，上清液倾入25ml纳氏比色管中，加入5ml氯仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长处，用1-5cm比色皿比色（同时作空白试验）。

24、 3.试剂配制： 1、0.02mol/L TBA水溶液：称取TBA 0.288g加热溶于水中，并稀释至100ml；2、三氯乙酸混合液：称取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml； 3、氯仿（分析纯）；4、丙二醛标准溶液：称取0.315g 1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100g，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10g，备用。 丙二醛浓度混合液体积(滤液体积TBA水溶液体积)丙二醛 = 油脂质量TBA水溶液体积 油脂过氧化值测定方法1.原理: 油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作

25、用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算过氧化值。 2.试剂和溶液: 1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中； 2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀； 3、1%淀粉试剂：将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状，倒入50ml沸水中调匀，煮沸，临时用现配；4、0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液；（26g硫代硫酸钠/16无水硫代硫酸钠溶于1000ml水中）0.1 molL-1配制：称取2.6g硫代硫酸钠/1.6无水硫代硫酸钠于1000ml容量瓶中，用适量新沸（煮沸10分钟）过的水溶解并稀释至1000ml，摇匀，放

26、置2周以后备用。硫代硫酸钠标定方法： 取适量基准重铬酸钾在120烘箱中烘至恒重(3h)，然后称取0.15g，精确至0.0001g，置于碘量瓶中，溶于25ml煮沸并冷却的蒸馏水中，加2g碘化钾及20%硫酸溶液20ml，摇匀，于暗处放置10min。加150ml水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时（即呈黄绿色或淡黄色时），加3ml淀粉指示剂（5gL-1），继续滴定至溶液蓝色消失为终点，同时做空白。 重铬酸钾的质量 硫代硫酸钠浓度= （体积空白）0.049030.04903与1ml硫代硫酸钠标准溶液以克表示的重铬酸钾的质量4.测定方法: 称取23g油样（称准至0.0002g）于碘量瓶中（对于固态

27、样品应先用索氏提取器将样品中油脂提取出来），加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1ml饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加100ml水，摇匀，立即以淀粉试液为指示剂，用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。同时做空白试验。 0.1269浓度（体积空白） 过氧化值（%）= -100 质量 0.1269换算系数；油脂皂化值的测定方法1.原理： 油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。2.试剂和溶液 1、0.5mol/L的盐酸标准溶液； 2、

28、1%酚酞指示剂； 3、0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液：称取30g化学纯氢氧化钾，溶于95%乙醇中使成1L，摇匀，静置24h，倾出上层清液，贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。3.操作步骤 称取适量样品（纯油样2g；固态样品10g并用索氏提取法提取出样品中的粗脂肪，蒸干乙醚溶剂），准确至0.0002g，准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，在沸水浴上加热回流30min，不时摇动。取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。同时做空白试验。 56.1浓度(空白体积) 皂化值(mg KOH/g)= - 质量 备注 一般植物油的皂化价如下：棉子油189198，花生油188195，大豆油190195，菜子油170180，芝麻油188195，葵子油188194，茶子油188196。