饲料厂化验室检测手册要点.docx
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饲料厂化验室检测手册要点
饲料厂化验室操作手册
饲料中的水分测定
1.原理:
试样在105℃±2℃烘箱内,在常压下烘干,直至恒重,逸失的重量为总水分。
2.测定步骤:
洁净的称样皿,在105℃±2℃烘箱中烘1h,取出,在干燥器中冷却30min,称准至0.0002g,再烘干30min,同样冷却,称重,直至两次的重量之差小于0.0005g为恒重。
用已恒重的称样皿称取2份平行试样,每份2-5g(含水量0.1g以上,样品厚度4mm一下)。
准确至0.0002g,不盖称样皿盖,在105℃±2℃烘箱中烘3h(以温度达到105℃开始计时),取出,盖好称样皿盖,在干燥器中冷却30min,称重。
在同样烘干1h,冷却,称重,直至两次称重的重量差小于0.002g.
烘干前的质量-烘干后的质量
水分=————————————————×100
烘干前的质量
粗蛋白的测定
1.原理:
凯氏定氮法测定试样中的含氮量,即在催化剂的作用下用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵,加入强碱进行蒸馏,用硼酸吸收后,再用盐酸滴定,测出含氮量,将结果乘以换算系数6.25,算出粗蛋白的含量。
2.测定步骤:
⑴.消煮:
称取样品0.5g,准确放入凯氏烧瓶中,加入6.4g催化剂,15ml硫酸,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360-410℃),直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h.
⑵.定容:
消煮后冷却,加20ml水至凯氏烧瓶中,摇匀,待消煮试样完全冷却后转移至100ml容量瓶中,用蒸馏水冲洗数次,并一起转入到容量瓶中,至刻度,摇匀,做为试样分解液。
⑶.蒸馏:
⑷.准备:
将蒸馏装置准备妥当以后,先用蒸馏水洗涤,移取分解液10ml,氢氧化钠(40%)10ml,加入少量水,塞好入口玻璃塞,且在入口处加水密封,防止露气,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,在将装有20ml硼酸和2滴甲基红指示剂的锥形瓶放在冷凝管的末端。
⑸.滴定:
将蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
(体积—空白)×浓度×0.014×6.25
粗蛋白=——————————————————×100
试样质量
0.014–与1.00ml盐酸标准溶液【c(Hcl)=1.000/mol·L-1】相当的以克表示的氮的质量
6.25—氮换算成蛋白质的平均系数
3.试剂配制:
1.混合催化剂:
4g硫酸铜+60g无水硫酸钠
2.氢氧化钠:
40g氢氧化钠+100ml水
3.硼酸:
1g硼酸+50ml水
4.混合指示剂:
甲基红0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存3个月
5.盐酸标准溶液配制:
c(Hcl)/mol·L-1盐酸(ml)
190
0.545
0.19
________________________________________________________
4.盐酸标定方法:
取在270—300℃温度下干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.015g,精密称重,加水50ml使溶解,加甲基红溴甲酚绿混合指示剂2滴,用盐酸滴定至溶液由绿色转变为灰红色,在煮沸2分钟,冷却至室温,继续滴定至溶液变为灰红色。
空白测定:
称蔗糖0.5g,代替试样,进行空白滴定,消耗0.1mol·L-1盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml,消耗0.02mol·L-1盐酸标准溶
体积不得超过0.3ml.
无水硫酸钠的质量
浓度=—————————————
(体积-空白)×0.05299
5.蒸馏步骤检测:
精确称取硫酸铵0.2g,代替试样进行消化蒸馏,测得硫酸铵含量21.19%±0.2%,可知消煮过程和试剂配制是否正常。
饲料中纯蛋白测定
1.原理:
硫酸铜在碱性溶液中,可将蛋白质沉淀,且不溶于热水,过滤和洗涤后,可将纯蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。
2.试剂:
(1)硫酸铜溶液:
10g硫酸铜溶于100ml水中。
(2)氢氧化钠溶液:
将2.5g氢氧化钠溶于100ml水中。
(3)氯化钡溶液:
1g氯化钡溶于100ml水中。
(4)2mol·L-1盐酸溶液。
3.测定步骤:
准确称取1g左右试样,置于200ml烧杯中,加50ml水,加热至沸,加入20ml硫酸铜溶液,20ml氢氧化钠溶液,用玻璃棒充分搅拌,放置1h以上,用倾斜过滤(定性滤纸),然后用60-80℃热水洗衣涤沉淀5-6次,用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液,直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。
将沉淀和滤纸放在65℃烘箱干燥2h,然后全部转移到凯氏烧瓶中。
消化后进行定氮测定。
4.结果计算同粗蛋白测定一样。
快速测盐分(饲料级)
1.盐分含量测定原理:
溶液澄清,在酸性条件下,加入过量硝酸银溶液使样品溶液中的氯化物形成氯化银沉淀,除去沉淀后,用硫氰酸铵回滴过量硝酸银,根据消耗硫酸氰铵的量,计算出氯化物的含量。
2.试剂配制:
Ango3:
称取硝酸银3.4g,用少量水溶解,定容至1L,储于棕色瓶中
3.标定:
称取在550℃下恒温1h的基准氯化钠0.02g,加50ml水,加5%铬酸钾指示剂1ml,用待标定的硝酸银标准溶液滴定至砖红色为终点。
20×0.02
C=——————
体积
4.测定步骤:
称取样品2g左右,加200ml蒸馏水搅拌,静止20min,吸取上清液20ml放入锥形瓶,加50ml蒸馏水,加1ml铬酸钾(10%),用Ango3滴定成桔红色。
浓度×体积×200×0.05845
CL=—————————————×100
样品质量×20
测食盐中CL的含量
称0.02g样品,放入锥形瓶中,加50ml蒸馏水,加1ml铬酸钾(10%),用Ango3滴定成桔红色。
浓度×体积×0.05845
CL=—————————————×100
样品质量
粗灰分、钙、磷连续测定(饲料级)
1.原理:
试样在550℃灼烧后所得残渣,用质量百分率表示。
残渣只要是氧化物、盐类等矿物质,也包括混入饲料中的沙石、土等,故称粗灰分。
2.步骤:
将干净的坩埚方入高温炉,在550±20℃下灼烧30min。
取出,在空气中冷却约1min,放入干燥器冷却30min,称其重量,在已恒重的坩埚中称取2-5g试料,准确至0.0002g。
在电炉上小心碳化至无烟,在放入高温炉,于550±20℃下灼烧3h。
取出,在空气中冷却约1min,放入干燥器中冷却30min,称取重量。
灰化后的质量
粗灰分=————————————×100%
灰化前的质量
钙:
在盛有灰分的坩埚中加入10ml(1:
3)盐酸,加3滴硝酸,小心煮沸,随即滤入100ml的容量瓶中,用蒸馏水洗涤坩埚和漏斗上的滤纸,定容至100ml,摇匀,取10ml分解液放入锥形瓶,加入50ml水,1%煮沸冷却后的淀粉溶液10ml,乙二胺1ml,三乙醇胺2ml,孔雀石绿1滴,20%氢氧化钠10ml,盐酸羟胺少许,钙指示剂少许,然后用EDTA滴定至蓝色。
EDTA体积×浓度
Ca=——————————×100
样品质量
试剂配制:
盐酸:
1:
3——1ml盐酸溶于3ml蒸馏水中
氢氧化钠:
20%——20g的氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中
三乙醇胺:
1:
1——1ml三乙醇胺溶于1ml蒸馏水中
乙二胺:
1:
1——1ml乙二胺溶于1ml蒸馏水中
孔雀石绿:
0.001g孔雀石绿溶于1ml蒸馏水中,既0.1g孔雀石绿溶于100g蒸馏水中
钙黄指示剂:
0.1g钙黄绿素,0.13g甲基百里香酚蓝,5g氯化钾研细混匀,储于磨砂口瓶中备用。
(钙红指示剂:
1g钙—羟酸指示剂与99g氯化钠)
EDTA:
0.02mol·L-1称取8g乙二胺四乙酸二钠,放入烧杯中,加200ml蒸馏水,加热溶解,冷却后转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀稀释至刻度。
标定:
钙标准溶液0.001gmol·L-1
准确称取在105—110℃下烘干3h,干燥至恒重的基准碳酸钙2.497g,溶于40ml(1:
3)盐酸中(沿烧杯壁慢慢加入),加热除去Co2,冷却,转移到1000ml容量瓶中,稀释到刻度,标定方法同测定方法同样。
0.01×20(分解液吸取值)
EDTA浓度=——————————————
EDTA的体积
磷:
取上述分解液1ml,放入50ml的容量瓶中,加10ml钒钼酸铵显色剂,定容至50ml,摇匀,放至20分钟。
用10毫米比色池,在420nm波长下,用分光光度计测定试样分解液的吸光度
波长所对应得含磷量
磷含量=——————————————
质量×100×分解液移取量
试剂配制:
钒钼酸铵显色剂:
称取偏钒酸铵1.25g,先加入量水,使其差不多溶解,加硝酸250ml,另取钼酸铵25g加蒸馏水400ml溶解,冷却后将此溶液倒入上述溶液中,加水定容至1000ml。
避光保存,入生成沉淀则不能使用。
磷标准溶液:
将磷酸二氢钾在105℃烘箱中干燥1小时,在干燥器中冷却后称取0.2195g,定量转入1000ml容量瓶中,加硝酸3ml,用水稀释至刻度,摇匀,即50微克/毫升的磷标准溶液。
标准曲线绘制:
准确吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml于50ml容量瓶中,各加入钒钼酸铵显色剂10ml,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,静止10分钟以上,以0溶液为参比,用10毫米比色池,在420nm波长下,用分光光度计测定各溶液的吸光度。
以磷含量为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线图。
饲料中粗脂肪的测定
1.原理:
用装有乙醚的索氏脂肪提取器,提取试样中的脂肪,称脂肪包的重量,提取的脂肪中除脂肪外还有有机酸,磷脂,脂溶性维生素,叶绿素等,因而测定结果称为粗脂肪或乙醚提取物。
2.测定步骤:
称试样1-5g(准确至0.0002g),于滤纸筒中,或用滤纸包好,放入105℃烘箱中,烘干120min,滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度,滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准,将滤纸筒或包放入抽提管,在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml,在60-75℃的水浴上加热,使乙醚回流,控制乙醚回流次数约每小时10次,共回流约50次(油脂高的约70次)或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。
(约3个小时)
取出试样,仍用原提取器回收乙醚,直至抽提瓶全部回收完,取下抽提瓶,将回收的乙醚倒入乙醚瓶中保存。
取出滤纸包,仍放回原称样皿,开盖在105℃±2℃烘箱中烘干2h,(刚放烘箱时将烘箱门打开,使滤纸包中的乙醚挥发完以后在合上门,否者会有危险),取出,放入干燥器中冷却,称重,在烘干30min,冷却称重,直至两次误差小于0.001g为止。
烘干后试样的重量-提取脂肪后试样的重量
粗脂肪=—————————————————————×100
烘干前试样的重量
大豆脲酶活性的测定(滴定法)
1.选用范围:
本法适用于大豆制品品及其副产品中脲酶活性的测定,可确认大豆的温热处理程度和抗胰蛋白酶等抗营养因子的水平。
2.定义:
尿素酶活性指:
在30±0.5℃和pH7的条件下,每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
3.原理:
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30min,尿酶催化尿素水解产生氨的反应。
用过里盐酸中和产生的氨,再用氢氧化钠标准溶液回滴。
4.试剂:
1尿素缓冲溶液:
准确称取3.4g经110℃烘干的磷酸二氢钾和4.45g磷酸氢二钠,用蒸馏水溶解后定容至1000ml,再将30g尿素溶解在此缓冲液中,可保持一个月。
20.1mol·L-1盐酸溶液:
用量筒量取8.4ml浓盐酸(GB622),注入1000ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。
30.1mol·L-1氢氧化钠(GB629)标准溶液:
按GB601的规定配制。
(5mlNaOH饱和溶液定容至1L)
5.测定步骤:
准确称取已粉碎的试样约0.2g(精确至0.0001g),置于刻管中(如活性很高,只称0.05g)。
加入10ml尿素缓冲溶液,立即盖好试管并剧烈摇动,马上置于(30±0.5℃)恒温水浴中,准确计时保持30min。
取下后立即加入10ml0.1mol·L-1盐酸溶液,并迅速冷却至20℃,将试管中内容物无损地移入50ml烧杯中,用5ml蒸馏水冲洗试管2次,立即用0.1mol·L-1的氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.7,记录氢氧化钠标准溶液的消耗量。
同时做空白试验。
尿素—苯酚磺试剂法(脲酶活性)
1.原理:
在尿素—苯酚磺指示剂存在的条件下,以尿素转变成氨的多少及显色度检测大豆饼中的脲酶的活性。
2.试剂与溶液:
⑴0.2mol·L-1氢氧化钠溶液:
量取澄清的饱和氢氧化钠溶液11.2ml,置于1000ml容量瓶中,用新沸过的冷水稀释至刻度,混匀即可。
⑵0.1mol·L-1硫酸溶液:
量取5.6ml浓硫酸,注入已加了少量蒸馏水的1000ml容量瓶中,冷却稀释至刻度。
⑶尿素—苯酚磺指示剂:
取1.2g苯酚红溶于30ml0.2mol·L-1氢氧化钠溶液中,用蒸馏水稀释至300ml,加入90g尿素,溶解后再用水稀释至2000ml,加70ml0.1mol·L-1硫酸溶液,稀释至3000ml。
配好的溶液应呈琥珀色,若溶液转变呈桔红色时,用再适量滴加0.1mol·L-1硫酸溶液,调成琥珀色。
试剂最好现配现用。
3.测定步骤:
取粉碎的大豆粕少许,在表面皿上均匀的铺成薄层,用吸管吸取尿素—苯酚磺指示剂,浸湿表面皿上平铺的大豆粕,放置5min,观察显色结果。
4.结果判定:
⑴无任何红点出现时,再放置25min,若仍无红点出现时,说明被检大豆粕没有脲酶活性,是过熟的大豆粕。
⑵有少数红点,或表面有25%-50%红点出现,表示含有微量脲酶,大豆粕可以使用。
⑶若大豆粕表面75%-100%被红点覆盖,说明脲酶活性很强,粕过生,不能直接使用。
挥发性盐基氮(VBN)测定方法
1、原理:
利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来,用硼酸吸收,再用标准酸滴定,计算出含氮量。
2、试剂:
1、0.lmol/L盐酸标准溶液(无水碳酸钠标定):
吸取分析纯盐酸8.3mL,用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液:
用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液:
分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂:
甲基红0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液:
化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
3、测定:
1、称取1~5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中,加蒸馏水100mL,振荡摇匀30min后静置,上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中,加混合指示剂2滴,使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,且保持此溶液为橙红色,否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中,再加入10mL1%的氧化镁溶液,用少量蒸馏水冲洗进样入口,将玻璃塞塞好,且在入口处加水封好,防止漏气,蒸馏10min,使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水洗冷凝管末端,洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定,溶液由蓝绿色变为灰红色为终点,同时进行试剂空白测定。
4、测定结果计算:
(盐酸体积-空白)×浓度×14
挥发性盐基氮的含量=——————————————————×100
(质量×分解液体液)÷分解液总体积
2、重复性:
每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。
允许相对偏差为5%
油脂酸价测定
取干燥的锥形瓶(带手套取)。
称重记录,加入测样2-3g,称重记录,取烧杯加入50ml醇醚,5滴酚酞指示剂,Naoh滴定空白体积变成粉紫色,把滴定的醇醚倒入盛有测样的锥形瓶中,摇匀,再滴5滴酚酞指示剂,用Naoh滴定成粉红色,半分钟之内不变色。
计算公式:
浓度×(体积—空白)×56.11
酸价=————————————————
样品质量
试剂配制:
Naoh标准溶液0.05mol/L
配制方法1:
取2g氢氧化钠放入1000ml容量瓶中,用新沸过的冷水定容至1000ml,摇匀。
方法2:
取饱和溶液2.8ml,用新沸过的冷水定容至1000ml
标定:
取在105-110℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.2g,精密称重,加新沸过的冷水50ml,摇匀,使其溶解,加酚酞指示剂2滴,用本液滴定至粉红色。
邻苯二甲酸氢钾质量
浓度=-----------------------
Naoh体积×0.2042
中性醇醚:
2:
1(2ml乙醇+1ml乙醚)
1%酚酞乙醇指示剂:
1g酚酞+100ml乙醇
油脂TBA值的测定方法
1.原理:
油脂受到光、热、空气中氧等的作用,发生酸败。
分解出醛、酮之类的化合物。
丙二醛就是分解产物的一种,它能与TBA(硫代巴比妥酸)作用生成粉红色化合物,在532nm波长处有吸收高峰,利用此性质即能测出丙二醛含量,从而推导出油脂酸败的程度。
2.操作步骤:
1、标准曲线的绘制
准确吸取上述标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于纳氏比色管中,加水至总体积为5ml,加入5mlTBA溶液,然后按样品测定步骤进行,测得吸光度并绘制标准曲线。
2、样品制备与检测
准确称取均匀的豆油15g,置于100ml具塞三角瓶内,准确加入25ml三氯乙酸混合液,振摇半小时(保持油脂融溶状态),用四层滤纸过滤,除去油脂。
准确移取上述滤液10ml置于25ml比色管内,准确加入TBA溶液10ml,混匀,加塞,置于90℃水浴内保温40min,取出,冷却1h,移入小试管内,离心5min,上清液倾入25ml纳氏比色管中,加入5ml氯仿,摇匀,静置,分层,吸出上清液于532nm波长处,用1-5cm比色皿比色(同时作空白试验)。
3.试剂配制:
1、0.02mol/LTBA水溶液:
称取TBA0.288g加热溶于水中,并稀释至100ml;
2、三氯乙酸混合液:
称取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA,用水溶解,稀释至100ml;
3、氯仿(分析纯);
4、丙二醛标准溶液:
称取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷,溶解后稀释至1000ml,此溶液每ml相当于丙二醛100μg,置于冰箱内保存。
准确吸取10ml,稀释至100ml,此溶液每ml相当于丙二醛10μg,备用。
丙二醛浓度×混合液体积×(滤液体积+TBA水溶液体积)
丙二醛=—————————————————————————
油脂质量×TBA水溶液体积
油脂过氧化值测定方法
1.原理:
油脂氧化过程中产生过氧化物,与碘化钾作用,生成游离碘,以硫代硫酸钠溶液滴定,计算过氧化值。
2.试剂和溶液:
1、饱和碘化钾溶液:
称取14g碘化钾,加10ml水溶解,必要时微热使其溶解,冷却后贮于棕色瓶中;
2、三氯甲烷–冰乙酸混合液:
量取40ml三氯甲烷,加60ml冰乙酸,混匀;
3、1%淀粉试剂:
将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状,倒入50ml沸水中调匀,煮沸,临时用现配;
4、0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液;(26g硫代硫酸钠/16无水硫代硫酸钠溶于1000ml水中)0.1mol·L-1
配制:
称取2.6g硫代硫酸钠/1.6无水硫代硫酸钠于1000ml容量瓶中,用适量新沸(煮沸10分钟)过的水溶解并稀释至1000ml,摇匀,放置2周以后备用。
硫代硫酸钠标定方法:
取适量基准重铬酸钾在120℃烘箱中烘至恒重(3h),然后称取0.15g,精确至0.0001g,置于碘量瓶中,溶于25ml煮沸并冷却的蒸馏水中,加2g碘化钾及20%硫酸溶液20ml,摇匀,于暗处放置10min。
加150ml水,用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。
近终点时(即呈黄绿色或淡黄色时),加3ml淀粉指示剂(5gL-1),继续滴定至溶液蓝色消失为终点,同时做空白。
重铬酸钾的质量
硫代硫酸钠浓度=————————————————
(体积—空白)×0.04903
0.04903—与1ml硫代硫酸钠标准溶液以克表示的重铬酸钾的质量
4.测定方法:
称取2~3g油样(称准至0.0002g)于碘量瓶中(对于固态样品应先用索氏提取器将样品中油脂提取出来),加30ml三氯甲烷–冰乙酸混合液,使样品完全溶解。
加入1ml饱和碘化钾溶液,紧密塞好瓶盖,并轻轻振摇0.5min,然后在暗处放置3min,取出加100ml水,摇匀,立即以淀粉试液为指示剂,用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。
同时做空白试验。
0.1269×浓度(体积-空白)
过氧化值(%)=-------------------------------×100
质量
0.1269——换算系数;
油脂皂化值的测定方法
1.原理:
油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时,发生皂化反应,剩余的碱可用标准酸液进行滴定,从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。
2.试剂和溶液
1、0.5mol/L的盐酸标准溶液;
2、1%酚酞指示剂;
3、0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液:
称取30g化学纯氢氧化钾,溶于95%乙醇中使成1L,摇匀,静置24h,倾出上层清液,贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。
3.操作步骤
称取适量样品(纯油样2g;固态样品10g并用索氏提取法提取出样品中的粗脂肪,蒸干乙醚溶剂),准确至0.0002g,准确加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml,在沸水浴上加热回流30min,不时摇动。
取下冷凝管,冷却后加入数滴酚酞指示剂,用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至红色消失。
同时做空白试验。
56.1×浓度×(空白-体积)
皂化值(mgKOH/g)=------------------------------
质量
备注
一般植物油的皂化价如下:
棉子油189~198,花生油188~195,大豆油190~195,菜子油170~180,芝麻油188~195,葵子油188~194,茶子油188~196。