HBcAb分析性能评估资料.docx

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HBcAb分析性能评估资料

试剂盒的性能评估部分主要从空白限/最低检出限及定量检测限，线性范围、精密度、重复性，定量准确度，干扰物质，加速稳定性，开封稳定性，冻融稳定性几方面进行评估，根据实验结果，对设计验证批次试剂盒的性能指标进行评估。

∙检测限（参考EP17）

∙空白限（LOB）

∙试验方法

取3份空白样品进行检测，每次4复孔/份，连续检测5天，共得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果）。

使用多个样品有助于确保不出现某样品内含有明显量分析物的情况。

若数据呈正态分布，则使用参数程序按公式：

LoB=µBB估计LoB；其中µB、σB分别为空白样本的均值和标准差。

若数据呈非正态分布（在0处截平），使用等式：

LoB=PctB100-α（即在（B100-α）百分位数位置的值，α=5%）

∙试验数据

表1LOB检测数据（N=3*4*5=60）

实验时间

样本1#

样本2#

样本3#

第一天

第二天

第三天

第四天

第五天

∙试验结论

经统计分析计算，所测得的60个样本数据不符合正态分布，统计分析图见图1

图1LOB的概率分布图

从上面的分布图来看，零值样本的浓度值并不是正态分的，浓度值并不是呈现正态分布，于是用公式LOB=PctB100-α，将零值样本测得的浓度值按照从低到高的顺序进行排列，找到95%的分布数=60*0.95=57，于是LOB的值为第57个数值，即为试剂的1IU/ml。

∙最低检出限（LOD）

∙试验方法

取3个低水平样品，浓度约在LoB到4倍LoB间，每次4复孔/份，连续检测5天，共得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果）。

计算结果超过LoB的个数。

∙试验数据

表2LOD检测数据（N=3*4*5=60）

实验时间

样本1#

样本2#

样本3#

第一天

0.326

0.354

第二天

0.310

0.345

第三天

0.355

第四天

0.379

第五天

0.364

0.371

LOD结果评价：

从表2结果可以看出，测试结果中LoD>LoB的个数占整个检测结果的百分数均大于86%，满足LoD测试接受标准，因此给定的LoD有效。

∙定量检测限（LOQ）

∙试验方法

取1份低水平样品，浓度约在给定的LoQ附近（），每天12复孔测定，连续检测5天，得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果），计算60个结果的CV。

∙试验数据

表3LOQ检测数据（N=5*12=60）

实验时间

第一天

第二天

第三天

第四天

第五天

∙LOQ结果评价：

从表3的数据来看，CV=6.15%，能达到接受标准，LOQ有效。

∙线性范围（参考EP17）

∙试验方法

取超过线性范围高限20%的强阳性样本，使用混合阴性血浆按比例梯度稀释的11个样本，根据说明书对每个样品复孔检测，要求复孔CV≤20%，取平均值进行计算。

以理论浓度（靶值）作为X轴，测定浓度为Y轴，做直线回归方程:

Y=Bx+A

∙接受标准：

线性系数r≥（即r2≥）

∙试验数据

表4线性范围试验数据

稀释度（高值+稀释液）

测定值1

测定值2

平均值

靶值

差异率

0%（0+10）

3.25%

10%（1+9）

-18.23%

20%（2+8）

-5.82%

30%（3+7）

-1.48%

40%（4+6）

3.72%

50%（5+5）

8.18%

60%（6+4）

2.82%

70%（7+3）

0.79%

80%（8+2）

-0.72%

90%（9+1）

4.86%

100%（10+0）

-4.11%

表5线性范围试验数据

稀释度（高值+稀释液）

测定值1

测定值2

平均值

靶值

差异率

0%（0+10）

5.17%

10%（1+9）

-8.17%

20%（2+8）

-4.54%

30%（3+7）

-0.53%

40%（4+6）

-3.98%

50%（5+5）

-1.16%

60%（6+4）

-0.99%

70%（7+3）

6.80%

80%（8+2）

-1.56%

90%（9+1）

4.35%

100%（10+0）

2.34%

∙试验结论

根据以上图表可知，在浓度范围内，线性范围测量结果满足接受标准。

∙精密度（参考EP5-A2）

∙试验方法

配制3个精密性质控品作为测试样本，抽取1个批次的试剂，连续测定20天，每天上午、下午各1次实验，2个样本各测定2个复孔，每个样本共80个结果。

以记录的数据按下述公式进行统计处理，得到批内、批间、日间和总精密度。

∙批内不精密度（即重复性）

批间不精密度

∙日间不精密度

∙总不精密度

∙接受标准

批内不精密度≤10%，总不精密度≤20%

∙试验数据

表6低值精密性质控品测定数据

第一批

第二批

Mean

日期

结果1

结果2

平均1

结果1

结果2

平均2

每天平均

第1天

第2天

第3天

第4天

第5天

第6天

第7天

第8天

第9天

第10天

第11天

第12天

第13天

第14天

第15天

第16天

第17天

第18天

第19天

第20天

表7低值精密性质控品计算结果

批内不精密度

批间不精密度

日间不精密度

总不精密度

S（标准差）

CV（变异系数）

2.3%

2.0%

5.6%

6.0%

表8中等浓度精密性质控品测定数据

第一批

第二批

Mean

日期

结果1

结果2

平均1

结果1

结果2

平均2

每天平均

第1天

第2天

第3天

第4天

第5天

第6天

第7天

第8天

第9天

第10天

第11天

第12天

第13天

第14天

第15天

第16天

第17天

第18天

第19天

第20天

表9中等浓度精密性质控品计算结果

批内不精密度

批间不精密度

日间不精密度

总不精密度

S（标准差）

CV（变异系数）

2.5%

1.8%

3.5%

4.1%

表10高值精密性质控品测定数据

第一批

第二批

Mean

日期

结果1

结果2

平均1

结果1

结果2

平均2

每天平均

第1天

第2天

第3天

第4天

第5天

第6天

第7天

第8天

第9天

第10天

第11天

第12天

第13天

第14天

第15天

第16天

第17天

第18天

第19天

第20天

表11高值精密性质控品计算结果

批内不精密度

批间不精密度

日间不精密度

总不精密度

S（标准差）

CV（变异系数）

2.7%

1.8%

3.4%

4.1%

∙试验结论

按照EP-A2进行精密度验证，测试结果表明批内不精密度以及总不精密度均满足接受标准。

∙重复性

∙试验方法

用设计验证批次乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒测试3个精密性质控品，每个样品重复测量20次，计算CV值。

在实验中必须同时测量质控品，以保证结果是可靠的，数据能够采用。

∙接受标准

精密性质控品重复性CV≤10%

名称

靶值（IU/mL）

合格范围（IU/mL）

质控品1#

质控品2#

质控品3#

∙试验数据

表12精密性质控品浓度测值数据

　浓度测值（IU/ml）

mean

低值CV

0.471

0.026

5.56%

中值CV

1.258

0.051

4.08%

高值CV

2.689

0.141

5.23%

质控品1#

质控品2#

质控品3#

∙试验结论

试验数据表明，精密性质控品重复性评估结果均满足接受标准，且质控测值均在质控范围内，说明本次实验有效。

∙准确度

∙试验方法

收集阴性混合血清，分成体积相同的4份，在其中的3份中添加相同体积但浓度不同的纯分析物标准液，制成3份添加浓度分别为2IU/mL、3IU/mL以及4IU/mL的回收血清样本，在另外1份混合血清中添加同样量无分析物的溶剂，制成1份基础血清样本，用研发批次乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒进行测定，每个血清样本至少进行3次重复分析，取其均值进行计算。

计算回收率，平均回收率以及比例系统误差。

样本编号

配制比例

样本1

1ml阴性生理盐水

样本2

1ml阴性（2IU/mL）（样本5）

样本3

1ml阴性（3IU/mL）（样本6）

样本4

1ml阴性（4IU/mL）（样本7）

按照以下公式进行计算

计算回收率：

回收率n=

加入浓度n=标准液浓度n×[标准液加入体积/（样本体积+标准液体积）]

计算平均回收率：

平均回收率=

计算比例系统误差：

比例系统误差=|100%-平均回收率|

∙接受标准

回收率比例系统误差在±20%之内

∙试验数据

表13样本回收率数据

复孔1

复孔2

复孔3

平均值（IU/ml）

样本1

样本2

样本3

样本4

样本5

样本6

样本7

表14样本回收率结论

回收率

样本2

106.00%

样本3

103.89%

样本4

95.58%

平均回收率

101.82%

比例系统误差

1.82%

∙试验结论

由表14可知，回收率比例系统误差在可接受范围内。

∙干扰试验

∙样本管添加物干扰试验

∙试验方法

收集雅培乙肝肝炎病毒核心抗体检测试剂盒测完24h内的新鲜同源血。

以普通真空血清管（无添加剂）采集的临床样本作为对照，与添加了抗凝剂或促凝剂的同一病人标本（即同源血）用研发乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒同时进行双份测定，比较结果差异。

∙接受标准

同一份样本，血清样本（普通真空采血管采集，无添加剂）与添加了抗凝剂（或促凝剂）样本检测结果阴阳符合率结果一致。

∙试验数据

表15同源血测定数据

样本编号

检测结果（IU/ml）

无抗凝剂（红盖）

枸橼酸钠（绿盖）

（紫盖）

肝素锂（蓝盖）

0.322

0.332

0.322

0.502

0.524

0.316

0.378

0.358

0.322

0.328

0.325

10#

11#

12#

0.381

0.388

13#

14#

15#

16#

17#

18#

19#

20#

21#

22#

23#

24#

25#

∙试验结论

由以上结果可知，抗凝剂肝素锂（蓝盖）、（紫盖）、枸橼酸钠（绿盖）几种样本管添加物质对本试剂盒检测结果无显著影响，所采集样本可用于本试剂盒检测。

∙加速稳定性

∙试验方法

研发批次乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒37℃放置8天，9天，11天，与2-8℃对照试剂盒同时进行检测，并测定精密性参考品及质控品。

∙接受标准

精密性质控品测值以及血样测值与2-8度放置试剂盒测值比较偏差不大于20%

∙试验数据

表16加速稳定性数据

校准品

2-8℃

37℃8天

37℃9天

37℃11天

521804

460510

425111

434919

278864

266978

235960

247742

131321

132348

109723

125590

30398

33021

28486

32947

7986

9125

7296

7658

3119

3505

2948

3260

质控品1#（IU/mL）

质控品2#（IU/mL）

质控品3#（IU/mL）

精密性1#（IU/mL）

精密性2#（IU/mL）

精密性3#（IU/mL）

检验项目

质量标准

检测结果

判定

1、校准品荧光强度

A＞450000

■符合/□不符合

F＜8000

■符合/□不符合

2、阳性参考品符合率

15/15

■符合/□不符合

3、阴性参考品符合率

15/15

■符合/□不符合

4、灵敏度

3/3

■符合/□不符合

5、线性检测

R≥800

■符合/□不符合

6、质控品

■符合/□不符合

7、精密性

CVⅠ≤10%

■符合/□不符合

CVⅡ≤10%

■符合/□不符合

CVⅢ≤10%

■符合/□不符合

检验项目

质量标准

检测结果

判定

1、校准品荧光强度

A＞450000

■符合/□不符合

F＜8000

■符合/□不符合

2、阳性参考品符合率

15/15

■符合/□不符合

3、阴性参考品符合率

15/15

■符合/□不符合

4、灵敏度

3/3

■符合/□不符合

5、线性检测

R≥800

■符合/□不符合

6、质控品

■符合/□不符合

7、精密性

CVⅠ≤10%

■符合/□不符合

CVⅡ≤10%

■符合/□不符合

CVⅢ≤10%

■符合/□不符合

表17烘烤前后质控品测值差异比较

37℃8天/2-8℃8天

37℃9天/2-8℃9天

37℃11天/2-8℃11天

质控品1#

98.98%

90.20%

89.33%

质控品2#

94.58%

86.91%

92.43%

质控品3#

93.15%

91.67%

95.83%

精密性1#

93.30%

92.92%

95.09%

精密性2#

96.78%

91.79%

102.28%

精密性3#

99.76%

98.20%

98.68%

∙结论

试剂盒烘烤后可以满足接受标准，精密性参考品以及质控品浓度测值偏差均在20%范围内，说明试剂盒加速稳定性良好。

∙开封稳定性

∙试验方法

研发批次乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒分别在0天，7天，15天，30天，45天开袋，每次开袋10分钟，液体组分每次开盖后吹打20次。

产品于2~8℃保存。

45天后，根据说明书操作步骤检测企业血清盘，结果满足产品标准。

∙接受标准

性能指标

接受标准

精密性1#

≤10%

精密性2#

≤10%

精密性3#

≤10%

质控品1#

质控品2#

质控品3#

灵敏度1#

检测结果为阳性（即测值浓度）

灵敏度2#

检测结果为阳性（即测值浓度）

灵敏度3#

检测结果为阳性（即测值浓度）

∙试验数据

表18开封稳定性试验数据（单位：

IU/mL）

未开封

开封7天

开封15天

开封30天

开封45天

精密性1#

精密性2#

精密性3#

精密性1#

精密性2#

精密性3#

精密性1#

精密性2#

精密性3#

精密性1#

精密性2#

精密性3#

精密性1#

精密性2#

精密性3#

Mean

1.16%

0.78%

5.51%

4.14%

3.19%

5.09%

1.10%

0.85%

4.64%

1.98%

1.28%

5.39%

5.35%

4.18%

3.11%

质控品1#

质控品2#

质控品3#

灵敏度1#

灵敏度2#

灵敏度3#

∙试验结论

试剂盒开封45天后仍能满足接受标准，因此可证明本试剂盒开封30天仍满足临床检测使用要求。

∙试剂盒反复冻融稳定性

∙试验方法

将研发批次乙型肝炎病毒核心抗体定量检测试剂盒置于-20℃冻一夜，第2天取出置于室温复融8小时，再置于-20℃冻一夜，如此经过5次冻融循环后，根据说明书要求检测精密性参考品以及灵敏度参考品，并与未冻融过的试剂盒比较准确度质控品测值以及灵敏度质控品测值差异。

∙接受标准

性能指标

接受标准

精密性1#

≤10%

精密性2#

≤10%

精密性3#

≤10%

质控品1#

质控品2#

质控品3#

灵敏度1#

检测结果为阳性（即测值浓度）

灵敏度2#

检测结果为阳性（即测值浓度）

灵敏度3#

检测结果为阳性（即测值浓度）

与未冻融过的试剂盒比较质控品以及灵敏度质控品测值差异，测值偏差≤15%

∙试验数据

表19

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