GPC 操作规程.docx
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GPC操作规程
排阻色谱SEQ分析
排阻色谱SEQ分为GPC(凝胶渗透色谱)和GFC(凝胶过滤色谱)GPC主要用于聚合物领域,GFC主要用于生物科学领域。
以下介绍岛津GPC分析系统特点:
★以分子量大小分离:
分子量大的先洗出,小的后洗出。
按保留时间计算分子量分布。
★专用色谱柱分类:
●以分子量大小分类(表明分离线性范围)。
●以流动相分类
使用四氢呋喃作流动相。
使用DMF作流动相。
(二甲基甲酰胺)
使用氯仿作流动相。
使用水性溶液作流动相。
根据色谱柱线性分布,色谱柱可以串连使用,先连接分子量大的,再接分子量小的。
岛津GPCVol.1.02软件操作
首先,在CLASS-VP中对标准品进行色谱分析,优化积分后,得到理想的色谱图和数据,即去掉杂质峰和负峰(Method∈IntegrationEvents中MinArea最小峰面积,Intergateoff
禁止积分,WIDTH半峰宽等等)。
然后进入GPC分析软件:
1.点击开始∈程序∈GPC∈GPCforCLASS-VP
出现下面对话框:
在Datafilename下为从CLASS-VP中由色谱文件(***。
dat)转换成的对应GPC文件起名
和排序号******.D**(如DLSICA。
D01)。
然后点击OK进入下面菜单:
在窗口中有以下七个处理功能图标:
GPCGPCMolGPCSuperSingleFile
configurationMethodWeightBatchImposeChrmatogramManager
GPC配置GPC方法分子量批处理叠加单色谱文件管理
上述图标中选择GPCGPC方法即可以满足日常分析应用。
Method
2.下面再返回到CLASS-VP工作站中操作,先将其它界面最小化,如图:
如图:
选择File∈Data∈Open打开标准品色谱数据
选择数据文件后,打开
选择File∈Method∈Open打开分析该标准品的方法(已优化积分完毕)
选择Analysis∈Analyze分析计算该标准品一次。
3.点击最下方图标栏中的GPCforCLASS-VP图标,如图:
进入下面界面:
双击GPC方法图标,进入下面菜单:
该菜单分为三部分:
CalibrationCurveTable为校准曲线表,编辑标准品保留时间Time,分子量Molecular等参数
CalibrationCurve(Linear)标定后,显示校准曲线。
Chromatograph显示打开的标准品GPC格式图谱。
4.如图选择File∈LoadLCDatafile
选择
(2)中分析标准品时转换的GPC数据文件,确定后显示下面界面:
点击该界面中的GET键,得到下面界面:
提问是否ClearCalibrationTable?
(清除现在的校准表?
)选择是显示下面界面:
在CalibrationCurveTable校准曲线表中的Molecular项中,分别键入各个组分峰的分子量
然后点击该表左下角的Draw显示得到拟合曲线的界面:
在该界面(CalibrationCurve(Linear)中,显示标定后的校准曲线。
如果校准曲线拟合的不理想,可以点击该曲线左下角的Type键,显示下面界面,选中合理的拟合类型:
点击OK得到下面重新拟合后的曲线:
●修正:
*如果样品与标准品一致(例如皆为聚苯乙烯)则不需修正。
在上面界面中选择Parameter∈GPCParameter如图:
出现下面界面:
NameQfactorV---αV---k
样品名粘度系数标准品α值标准品k值
如无则粘度系数Q和α,k皆输入1,点击OK校准曲线立即得到修正。
*如果样品与标准不一致(标准与样品不一致)则需修正。
在上面界面中选择Parameter∈MHConversion如图:
出现下面界面:
V—α粘度系数(据MH公式手册查出键入),V—k粘度系数(据MH公式手册查出键入)
PolymerA标准品的α,k值。
PolymerB样品的α,k值。
点击OK校准曲线立即得到修正。
如果查不到样品的粘度系数α,k值,则不做该相修正。
粘度修正Parameter∈MHConversion在说明书后有介绍,请仔细阅读。
*有时样品α,k值化学手册查不到,可以不修正,则最后样品的分析报告,为相对于标样(如聚苯乙烯)的分子量分布。
(Mn,M/W等)
●保存校准曲线:
点击File∈SaveFileAs
出现下面界面:
在Filename中键入****
在Pathname中确定保存路径*:
\*:
\*:
\
点击Save键,该校准曲线已保存完毕,将来使用者再做相同样品,相同条件的GPC分析时可以随时打开调用,不用每次分析都做标准品分析标定。
需要注意的是,如果分析条件发生变化(如流动相,流速等),出峰的保留时间产生偏移较大时,应该重新分析标准品标定校准曲线,以保证分析结果的准确。
5.样品的GPC分析:
现在可以返回到CLASS-VP中对样品进行色谱分析,分析结束后,执行分析计算一次即可。
也可以调入已做完的样品色谱数据,执行分析计算一次,都会得到相应转换的GPC文件。
然后进入GPC方法界面,点击如图Calculation∈GPCCalculation:
出现下面界面:
在LCCalc。
Data:
中点击图标■打开需要的样品GPC文件名
在GPGMethod:
中确认所用的校准曲线文件名,如下图:
点击确定
再点击上面界面中的Calculation键,显示下面界面:
样品的GPC计算即告完成。
6.分析报告检查:
点击View菜单中各项
点击View∈Slice检查切片数据
点击View∈Peak检查个峰数据
点击View∈AverageMolecularWeight检查分子量数据
点击Report∈Format编辑报告输出格式
在下面界面各项中选择打印内容和打印位置:
点击Report∈Print则直接在打印机打印报告。
7.GPC分析软件的退出:
先从最小化图标中逐项打开各项操作界面并关闭。
在CLASS-VP中清洗系统。
然后停止CLASS-VP的系统运行。
最后退出CLASS-VP。
8.关闭所有单元电源开关。
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