常用缓冲溶液配制方法.docx
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常用缓冲溶液配制方法
常用缓冲溶液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L）
X毫升mol/L甘氨酸+Y毫升mol/LHCI，再加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
50
50
50
50
50
50
50
50
甘氨酸分子量=，mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（mol/L）
X毫升mol/L邻苯二甲酸氢钾+mol/LHCl，再加水稀释到20毫升
pH（20℃）
X
Y
pH（20℃）
X
Y
5
5
5
5
5
5
5
5
5
邻苯二甲酸氢钾分子量=，mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
pH
LNa2HPO4
（毫升）
L
柠檬酸
（毫升）
pH
LNa2HPO4
（毫升）
L
柠檬酸
（毫升）
Na2HPO4分子量=，mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量=，mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量=，mol/L溶液为21.01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
pH
钠离子浓度
（mol/L）
柠檬酸（克）
C6H8O7·H2O
氢氧化钠（克）
NaOH97%
盐酸（毫升）
HCl（浓）
最终体积（升）①
210
210
210
210
245
285
266
84
83
83
83
144
186
156
160
116
106
45
68
105
126
10
10
10
10
10
10
10
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（mol/L）
pH
mol/L
柠檬酸
（毫升）
mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
pH
mol/L
柠檬酸
（毫升）
mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
柠檬酸C6H8O7·H2O：
分子量，mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3C6H5O7·2H2O：
分子量，mol/L溶液为29.41克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（mol/L）
pH（18℃）
mol/L
NaAc
（毫升）
mol/L
HAc
（毫升）
pH（18℃）
mol/L
NaAc
（毫升）
mol/L
HAc
（毫升）
Na2Ac·3H2O分子量=，mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（）
pH
mol/L
Na2HPO4
（毫升）
mol/L
NaH2PO4
（毫升）
pH
mol/L
Na2HPO4
（毫升）
mol/L
NaH2PO4
（毫升）
Na2HPO4·2H2O分子量=，mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·12H2O分子量=，mol/L溶液为克/升。
NaH2PO4·2H2O分子量=，mol/L溶液为克/升。
磷酸盐是化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：
NaH2PO4：
pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：
pKa1＝，pKa2＝
配酸性缓冲液：
用NaH2PO4，pH＝1～4，
配中性缓冲液：
用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，
配碱性缓冲液：
用Na2HPO4，pH＝10～12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为：
①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于。
其缺点为：
①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15mol/L）
pH
mol/L/15Na2HPO4
（毫升）
mol/L
15M11.876克15M9.078克0.05M0.2M
20℃
20℃
18℃
0.04M
0.04M
0.04M8.25克0.05M25℃0.1M
1M溶液为12.114克/升。
Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2M硼酸（毫升）
pH
0.05M硼砂（毫升）
0.2M硼酸（毫升）
硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
甘氨酸分子量=;0.2M溶液含15.01克/升。
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
50
50
50
50
50
50
硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;0.05M溶液为19.07克/升。
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
pH
（毫升）
（毫升）
20℃
37℃
1
2
3
4
5
6
7
8
9
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Na2CO2·10H2O分子量=;0.1M溶液为28.62克/升。
N2HCO3分子量=;0.1M溶液为8.40克/升。
15．“PBS”缓冲液
pH
H2O
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4
1000
1000
1000
100ml
8.5g
2.2g
0.4g
pH标准缓冲溶液
StandardpHBufferSolutions
名称（Name）
配制
（Compoundingway）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
草酸盐标准缓冲溶液
c[KH3（C2O4）2·2H2O]为L。
称取12.71g四草酸钾[KH3（C2O4）2·2H2O]溶于无二氧化碳的水中，稀释至1000ml
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
酒石酸盐标准缓冲溶液
在25℃时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾（KHC4H4O6），并剧烈振摇至成饱和溶液
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
-
-
-
-
-
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液
c（C6H4CO2HCO2K）为L，称取于±℃干燥2～3h的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.21g，溶于无CO2的蒸馏水，并稀释至1000ml
（注：
可用于酸度计校准）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
磷酸盐标准缓冲溶液
分别称取在±℃干燥2～3h的磷酸氢二钠（Na2HPO4）（3．53±0．01）g和磷酸二氢钾（KH2PO4）（3．39±0．01）g，溶于预先煮沸过15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：
可用于酸度计校准）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
硼酸盐标准缓冲溶液
c（Na2B4O7·10H2O）称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）（3．80±0．01）g（注意：
不能烘！
），溶于预先煮沸过15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。
置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。
存放时要防止空气中的CO2的进入（注：
可用于酸度计校准）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
氢氧化钙标准缓冲溶液
在25℃，用无二氧化碳的蒸馏水制备氢氧化钙的饱和溶液。
氢氧化钙溶液的浓度c[1/2Ca（OH）2]应在（～）mol/L。
氢氧化钙溶液的浓度可以酚红为指示剂，用盐酸标准溶液[c（HCl）=L]滴定测出。
存放时要防止空气中的二氧化碳的进入。
出现混浊应弃去重新配制
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
-
-
-
-
-
注：
为保证pH值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用pH基准试剂配制。
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
PreparationandpHValuesofCommonpHBufferSolutions
序号（No.）
溶液名称
（Solutionname）
配制方法
（Preparation）
pH值
（pHvalue）
1
氯化钾-盐酸
mlmol/LHCl与mlmol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml
2
氨基乙酸-盐酸
在500ml水中溶解氨基乙酸150g，加480ml浓盐酸，再加水稀释至1L
3
一氯乙酸-氢氧化钠
在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH，溶解完全后再加水稀释至1L
4
邻苯二甲酸氢钾-盐酸
把mlmol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与mlmol/LHCl混合均匀，加水稀释至100ml
5
邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠
把mlmol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
6
六亚甲基四胺-盐酸
在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g，加浓HCl10ml，再加水稀释至1L
7
磷酸二氢钾-氢氧化钠
把mlmol/L的磷酸二氢钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
8
硼酸-氯化钾-氢氧化钠
把mlmol/L的硼酸-氯化钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
9
氯化铵-氨水
把mol/L氯化铵与mol/L氨水以2：
1比例混合均匀
10
硼酸-氯化钾-氢氧化钠
把mlmol/L的硼酸-氯化钾与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
11
氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠
把mlmol/L氨基乙酸-氯化钠与mlmol/LNaOH混合均匀
12
磷酸氢二钠-氢氧化钠
把mlmol/LNa2HPO4与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
13
氯化钾-氢氧化钠
把mlmol/LKCl与mlmol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
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