AKTApurifier100操作规程修改.docx

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AKTApurifier100操作规程修改

题目

AKTApurifier100操作规程

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共6页

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颁发数量

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分发单位

一、范围：

本标准规定了AKTApurifier100操作要求和维护方法；

适用于本公司纯化岗位人员使用AKTApurifier100进行纯化工艺研究和小批量样品制备。

二、引用文献：

《AKTAdesignPurificationMethodhandbook》

《AKTApurifierInstallationGuide》

《AKTApurifierSystemManual》

《MakingyourfirstrunsBeginherewithAKTApurifier》

《OptionalConfigurationsAKTApurifierUserManual》

《ComponentUserManualsandInstructions》

三、仪器的组成

1、仪器的组成：

AKTApurifier100，层析柱，电脑。

2、AKTApurifier100组成

AKTApurifier100主要由Box-900，MonitorpH/C-900（pH，电导监控），MonitorUV-900（紫外监控），PumpP-901（泵）和ON/OFFbutton（总开关），injectonValveINV-907（injecton阀），OutletValvePV-908（收集阀PV-908），CU-950Installation（CU-950监控），Onlinefilter（在线滤器），MixerM-925（混合仪），UVflowcell（紫外检测），pHelectrode（pH电极），Conductanceelectrode（电导电极）组成。

四、主要技术参数

流速范围：

0.01-100ml/min

压力范围：

0-10MPa

电导范围：

1μS/cm-999.9mS/cm

pH范围：

2-12

温度范围：

4℃-40℃

体积：

500mm×460mm×

620mm

重量：

75kg

部件参数

P-901泵

流速范围：

0.01-100ml/min

增量：

0.01ml/min

压力范围：

0-10MPa（100bar，1450psi）

体积：

<1800ul/pumpmodule

粘性：

最大5cP

UV-900紫外光/可见光检测器

波长范围：

190-700nm

检测波长：

同时检测3个波长

波长可调范围：

1nm

带宽：

4nm

波长精度：

±2nm

重现性：

±0.01nm

线性：

<2%（在260nm，样品尿嘧啶，pH=2，紫外吸收上升到2AU时）

噪音：

<6×105AU（230nm）

漂移：

<2×104AU/h（254nm）

最大压力：

2MPa（20bar290psi）

pH/C-900pH/电导检测器

电导单元

电导范围：

1μS/cm-999.9mS/cm

噪音：

；0.5%（满刻度校准范围内）

pH单元

pH范围：

0-14（有效使用范围2-12）

精度：

±0.1pH单位，温度补偿

稳定性：

最大偏移0.1pH单位/10小时

五、操作程序

5.1开机

按位于底部平台前左侧的ON/OFF按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。

待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。

双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。

UNICORN的操作界面分为四个窗口（Fig3）

Fig3、Unicorn的操作界面

5.2准备工作溶液和样品

所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。

当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。

5.3清洗及管道准备

首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中，将B泵的进液管道（B1）放入高盐溶液中，在systemcontrol窗口点击工具栏内的manual，选择pump→pumpwashpurifier，选中A1,B1管道为ON，execute。

泵清洗将自动结束。

（Fig4）

Fig4、AKTApurifier的泵清洗操作

5.4安装层析柱

在manual里选择pump→flowrate，输入一定的低流速（Fig5），insert；选择Alarm&mon→alarmpressure，设置highalarm（输入填料或层析柱的耐受压力，以较低者为设置值，具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到），insert，execute（Fig6）。

待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。

Fig5、AKTAExplorer的流速设定操作

Fig6、AKTAExplorer的限压设定操作

5.5开始纯化：

1）在柱子平衡好之后（电导，pH的数值和变化趋势稳定）即开始上样了。

此时应将紫外调零（Fig7），选择Alarm&mon→autozero，exectue。

Fig7、AKTAExplorer的紫外调零操作

2）具体上样方式：

AKTA系统的上样方式比较灵活，可以根据具体样品的条件进行上样，包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等，这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。

点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。

3）洗脱：

上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。

在manual里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）（Fig8）。

Fig8、AKTAExplorer的洗脱条件设定操作

4）样品收集：

根据峰型，收集OutletValvePV-9081号管的样品。

5）清洗泵及卸下层析柱：

将A1和B1入口放入纯水中，启动pumpwashpurifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。

然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。

再给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。

整个过程中应防止气泡进入。

6）关闭电源：

从软件控制系统的第一个窗口unicornmanager点击退出，其他窗口不能单独关闭。

然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。

3、程序设定操作

在methodeditor窗口点击工具栏内的methodwizard，弹出窗口界面如Fig9所示，可以分别在mainselection、column以及columnposition三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所安装的层析柱在柱位选择阀的位置，选好之后，点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig10），在此可以设定检测的波长，针对AKTAEXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控，并在此设定A泵和B泵的溶液进口，设定好之后，点击next，出现如Fig11所示窗口，可以在此设定对层析柱进行平衡的条件。

Fig9

Fig10

fig11

Fig12

完成之后，点击next出现Fig12的窗口，在此可以设定上样的条件，可选择的条件包括上样的方式，如上样环上样以及样品泵上样，对上样的体积也要进行设定。

如果利用系统泵上样，在此无法进行设置，不过可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步骤中进行设置。

在上步设置完成之后，点击NEXT出现如Fig13所示窗口，这里是针对流穿组分收集所进行一些设置，针对安装的不同的收集器，具体内容可能有些差异，这里显示的界面是在安装了Frac-950收集器之后所出现的界面，设置完成点击NEXT出现如Fig14所示的窗口，设置目标组分收集的一些参数，点击NEXT，出现如Fig15所示的窗口，针对具体的洗脱条件可以进行设置。

当全部设置完成之后，点击finish，弹出Fig16所示的窗口，可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改，完成之后点击

按钮，完成程序存盘操作。

至此完成洗脱程序的设定工作，在应用自动洗脱程序时，可在SYSTEMCONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run，在弹出的对话框中选择目标洗脱程序所在的位置并执行，之后会依次弹出一些对话框，主要是再次确认程序的设置条件，并选择洗脱结果文件的保存位置，全部设置完之后，洗脱将自动进行，结果将自动的保存在设定的文件夹中。

Fig13Fig14

Fig15Fig16

4、结果的浏览与简单处理

在纯化完成后，Unicorn软件会自动的按照预先的设置保存结果文件，如果没有指定，那么结果文件会保存于一个文件名以manualN开头的文件中，N为系统依次生成的一个1-10之间的数字。

对于结果的浏览应在evaluation窗口（Fig17）中进行，打开文件及对文件进行普通编辑的菜单如Fig18所示。

Fig17Evaluation窗口

Fig18纯化结果普通编辑菜单

这里已经选择了一个纯化文件，打开后，在结果浏览窗口点击鼠标右键，选择properties，可以弹出如Fig19所示的操作菜单，可以分别对结果进行编辑，如改变曲线的颜色，设定横轴或纵轴的显示区间，进行文本文件的编辑等等。

Fig19

五清场

将pH电极取出，放入装有保护液的PH探头保护套中。

将用过的样品、收集样品、器具清理，倾倒废液，擦拭仪器表面，保持仪器表面和操作台面干净整洁。

六、系统清洁与维护

（1）每天维护

如果第二天使用相同的缓冲液，只要将设备处于一个低速运行状态（大约为使用流速的10%）如果第二天使用不同的缓冲液，请将pump和系统用去离子水清洁，操作步骤如下：

a、将泵头洗净放入去离子水中

b、运行“PumpWashPurifier”程序

（2）每周维护

用去离子水，运行“PumpWashPurifier”程序清洗系统，20%乙醇保存（将pH电极取出）过周末。

pH电极维护：

pH电极不使用时，将pH电极从流动池中取出，将假电极头插入流动池。

pH电极需要用pH4.0缓冲液：

2MKNO3=1：

1的溶液保存。

（3）每月维护

每月定期清洁维护或者结果出现“鬼峰”时。

a、取下层析柱，并且用G5管道代替连接系统。

b、所有的管道用1MNaOH浸泡；

c、运行PumpWashPurifier”程序清洗4个泵头管道；

d、用1MNaOH将整个系统清洗20min（1ml/min）

e、用去离子水，重复c~d步骤，洗净NaOH。

七、使用环境条件

室内温度：

4-40℃（相对稳定）

相对湿度：

10-90%（冷柜要有除湿功能，无冷凝水）

输入电压：

100-120/220-240VAC

功率：

400VAC-900VAC

注意事项：

1、电源要有良好的接地，推荐使用UPS或稳压电源

2、当把主机置于远端控制时，COM线不要长于15米。