AKTApurifier100操作规程修改.docx
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AKTApurifier100操作规程修改
题目
AKTApurifier100操作规程
编码:
共6页
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批准
制定日期
审核日期
批准日期
颁发部门
颁发数量
份
生效日期
分发单位
一、范围:
本标准规定了AKTApurifier100操作要求和维护方法;
适用于本公司纯化岗位人员使用AKTApurifier100进行纯化工艺研究和小批量样品制备。
二、引用文献:
《AKTAdesignPurificationMethodhandbook》
《AKTApurifierInstallationGuide》
《AKTApurifierSystemManual》
《MakingyourfirstrunsBeginherewithAKTApurifier》
《OptionalConfigurationsAKTApurifierUserManual》
《ComponentUserManualsandInstructions》
三、仪器的组成
1、仪器的组成:
AKTApurifier100,层析柱,电脑。
2、AKTApurifier100组成
AKTApurifier100主要由Box-900,MonitorpH/C-900(pH,电导监控),MonitorUV-900(紫外监控),PumpP-901(泵)和ON/OFFbutton(总开关),injectonValveINV-907(injecton阀),OutletValvePV-908(收集阀PV-908),CU-950Installation(CU-950监控),Onlinefilter(在线滤器),MixerM-925(混合仪),UVflowcell(紫外检测),pHelectrode(pH电极),Conductanceelectrode(电导电极)组成。
四、主要技术参数
流速范围:
0.01-100ml/min
压力范围:
0-10MPa
电导范围:
1μS/cm-999.9mS/cm
pH范围:
2-12
温度范围:
4℃-40℃
体积:
500mm×460mm×
620mm
重量:
75kg
部件参数
P-901泵
流速范围:
0.01-100ml/min
增量:
0.01ml/min
压力范围:
0-10MPa(100bar,1450psi)
体积:
<1800ul/pumpmodule
粘性:
最大5cP
UV-900紫外光/可见光检测器
波长范围:
190-700nm
检测波长:
同时检测3个波长
波长可调范围:
1nm
带宽:
4nm
波长精度:
±2nm
重现性:
±0.01nm
线性:
<2%(在260nm,样品尿嘧啶,pH=2,紫外吸收上升到2AU时)
噪音:
<6×105AU(230nm)
漂移:
<2×104AU/h(254nm)
最大压力:
2MPa(20bar290psi)
pH/C-900pH/电导检测器
电导单元
电导范围:
1μS/cm-999.9mS/cm
噪音:
;0.5%(满刻度校准范围内)
pH单元
pH范围:
0-14(有效使用范围2-12)
精度:
±0.1pH单位,温度补偿
稳定性:
最大偏移0.1pH单位/10小时
五、操作程序
5.1开机
按位于底部平台前左侧的ON/OFF按钮,打开色谱系统,然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。
UNICORN的操作界面分为四个窗口(Fig3)
Fig3、Unicorn的操作界面
5.2准备工作溶液和样品
所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
5.3清洗及管道准备
首先将A泵的进液管道(A1)放入缓冲液或平衡液中,将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在systemcontrol窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pumpwashpurifier,选中A1,B1管道为ON,execute。
泵清洗将自动结束。
(Fig4)
Fig4、AKTApurifier的泵清洗操作
5.4安装层析柱
在manual里选择pump→flowrate,输入一定的低流速(Fig5),insert;选择Alarm&mon→alarmpressure,设置highalarm(输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到),insert,execute(Fig6)。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
Fig5、AKTAExplorer的流速设定操作
Fig6、AKTAExplorer的限压设定操作
5.5开始纯化:
1)在柱子平衡好之后(电导,pH的数值和变化趋势稳定)即开始上样了。
此时应将紫外调零(Fig7),选择Alarm&mon→autozero,exectue。
Fig7、AKTAExplorer的紫外调零操作
2)具体上样方式:
AKTA系统的上样方式比较灵活,可以根据具体样品的条件进行上样,包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等,这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。
点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
3)洗脱:
上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
在manual里选择pump→gradient,按照自己的工艺选择targetB(100%)和length(10CV)(Fig8)。
Fig8、AKTAExplorer的洗脱条件设定操作
4)样品收集:
根据峰型,收集OutletValvePV-9081号管的样品。
5)清洗泵及卸下层析柱:
将A1和B1入口放入纯水中,启动pumpwashpurifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。
然后再将A1和B1入口放入20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。
再给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头。
整个过程中应防止气泡进入。
6)关闭电源:
从软件控制系统的第一个窗口unicornmanager点击退出,其他窗口不能单独关闭。
然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源。
3、程序设定操作
在methodeditor窗口点击工具栏内的methodwizard,弹出窗口界面如Fig9所示,可以分别在mainselection、column以及columnposition三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所安装的层析柱在柱位选择阀的位置,选好之后,点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定(Fig10),在此可以设定检测的波长,针对AKTAEXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控,并在此设定A泵和B泵的溶液进口,设定好之后,点击next,出现如Fig11所示窗口,可以在此设定对层析柱进行平衡的条件。
Fig9
Fig10
fig11
Fig12
完成之后,点击next出现Fig12的窗口,在此可以设定上样的条件,可选择的条件包括上样的方式,如上样环上样以及样品泵上样,对上样的体积也要进行设定。
如果利用系统泵上样,在此无法进行设置,不过可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步骤中进行设置。
在上步设置完成之后,点击NEXT出现如Fig13所示窗口,这里是针对流穿组分收集所进行一些设置,针对安装的不同的收集器,具体内容可能有些差异,这里显示的界面是在安装了Frac-950收集器之后所出现的界面,设置完成点击NEXT出现如Fig14所示的窗口,设置目标组分收集的一些参数,点击NEXT,出现如Fig15所示的窗口,针对具体的洗脱条件可以进行设置。
当全部设置完成之后,点击finish,弹出Fig16所示的窗口,可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改,完成之后点击
按钮,完成程序存盘操作。
至此完成洗脱程序的设定工作,在应用自动洗脱程序时,可在SYSTEMCONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run,在弹出的对话框中选择目标洗脱程序所在的位置并执行,之后会依次弹出一些对话框,主要是再次确认程序的设置条件,并选择洗脱结果文件的保存位置,全部设置完之后,洗脱将自动进行,结果将自动的保存在设定的文件夹中。
Fig13Fig14
Fig15Fig16
4、结果的浏览与简单处理
在纯化完成后,Unicorn软件会自动的按照预先的设置保存结果文件,如果没有指定,那么结果文件会保存于一个文件名以manualN开头的文件中,N为系统依次生成的一个1-10之间的数字。
对于结果的浏览应在evaluation窗口(Fig17)中进行,打开文件及对文件进行普通编辑的菜单如Fig18所示。
Fig17Evaluation窗口
Fig18纯化结果普通编辑菜单
这里已经选择了一个纯化文件,打开后,在结果浏览窗口点击鼠标右键,选择properties,可以弹出如Fig19所示的操作菜单,可以分别对结果进行编辑,如改变曲线的颜色,设定横轴或纵轴的显示区间,进行文本文件的编辑等等。
Fig19
五清场
将pH电极取出,放入装有保护液的PH探头保护套中。
将用过的样品、收集样品、器具清理,倾倒废液,擦拭仪器表面,保持仪器表面和操作台面干净整洁。
六、系统清洁与维护
(1)每天维护
如果第二天使用相同的缓冲液,只要将设备处于一个低速运行状态(大约为使用流速的10%)如果第二天使用不同的缓冲液,请将pump和系统用去离子水清洁,操作步骤如下:
a、将泵头洗净放入去离子水中
b、运行“PumpWashPurifier”程序
(2)每周维护
用去离子水,运行“PumpWashPurifier”程序清洗系统,20%乙醇保存(将pH电极取出)过周末。
pH电极维护:
pH电极不使用时,将pH电极从流动池中取出,将假电极头插入流动池。
pH电极需要用pH4.0缓冲液:
2MKNO3=1:
1的溶液保存。
(3)每月维护
每月定期清洁维护或者结果出现“鬼峰”时。
a、取下层析柱,并且用G5管道代替连接系统。
b、所有的管道用1MNaOH浸泡;
c、运行PumpWashPurifier”程序清洗4个泵头管道;
d、用1MNaOH将整个系统清洗20min(1ml/min)
e、用去离子水,重复c~d步骤,洗净NaOH。
七、使用环境条件
室内温度:
4-40℃(相对稳定)
相对湿度:
10-90%(冷柜要有除湿功能,无冷凝水)
输入电压:
100-120/220-240VAC
功率:
400VAC-900VAC
注意事项:
1、电源要有良好的接地,推荐使用UPS或稳压电源
2、当把主机置于远端控制时,COM线不要长于15米。