OD值.docx
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OD值
OD值
OD是opticaldensity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，1OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。
光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
两对半OD值的意义
2008-07-0914:
25
乙肝两对半中常涉及到表面抗体的滴度，从而会对乙肝疫苗的加强针注射有一定的影响。
例如：
OD值为2.917 Cutoff值为0.1050 OD/CutOff为27.781
其中，OD值本身的意思是吸光度值。
这里的OD值，实际上是检测样本的OD值，一般以S表示。
这里的Cutoff，是对照样本的临界值，一般以C.O.表示。
那么OD/Cutoff即S/C.O.，以这个比值，来确定阴性或阳性。
乙肝表面抗体滴度小于10国际单位/ML时，说明抵抗力很强，不会轻易感染乙肝。
样品OD值÷阴性对照平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性。
OD值即光密度值，此种叫法已淘汰，现应称为吸光度值（A值）。
一般阴性对照A值均<0.05，按0.05计，则0.05×2.1=0.105，此值即阴阳性分界点值。
样本A值≥0.105即判为阳性。
因此，无论OD值为0还是0.075，都是阴性，说明表面抗体的浓度还不足以清除HBV。
免疫清除是否激发主要看ALT，而免疫清除激发后是否清除了HBV主要看HBV-DNA，免疫清除激发后是否产生了保护性主要看表面抗体。
密度梯度离心法
密度梯度离心法densitygradientcentrifugationmethod
〔1〕亦称平衡密度梯度离心法。
用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。
若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。
利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。
自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来，该法取得许多成果。
为得到必要的浓度梯度，多采用浓氯化铯溶液，所以有时也使用氯化铯浓度梯度离心法这个名称，还可采用氯化铷、溴化铯等溶液。
通常利用分析超离心机，但在将细胞颗粒成分进行分离等以纯化为目的的情况，利用密度差，使用分离超离心机，采用预先制备好的蔗糖等的密度梯度。
〔2〕采用蔗糖等一些小分子溶液，预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度，在其上面再加上一层少量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。
若含有沉降系数不同的许多成分，就会出现许多层。
这种情况采用适当的编排号码，取出样品池内的溶液，然后进行研究。
这是与〔1〕不同的一种沉降速度法，除了以相同的目的被用于通常的沉降速度法外，在能取出分离物这点上是有优越性的。
因多采用蔗糖密度梯度，所以亦称为蔗糖密度梯度离心法。
按同样原理，也可使用分析超离心机进行测定。
密度梯度离心
又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法；
原理：
不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。
介质梯度应预先形成，介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。
常用的有蔗糖、甘油；
密度梯度液的制备用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度；
操作：
离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面，离心形成区带。
离心后不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带；
可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。
方法2：
纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。
其过程如下：
1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3次后,置-20℃冰箱中,备用。
2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。
4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30%,45%,60%的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。
11万g离心2.5h,发现在30%与45%以及45%与60%之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。
5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒，然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即最后获得了纯化的病毒。
-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒含量。
EDTA
EDTA
品名：
乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）
简称：
EDTA
俗名；依地酸（特别是它的钙盐络合物，医学上称为依地酸钠钙）
分子量：
292.248
分子式：
C10H16N2O8
理化性质：
白色无臭无味、无色结晶性粉末，熔点240℃（分解）。
不溶于冷水、醇及一般有机溶剂，微溶于热水，溶于氢氧化钠，碳酸钠及氨的溶液中，能溶于160份100℃沸水。
其碱金属盐能溶于水，钠盐在水中的溶解度见下表（g/L）。
一般用乙二胺四乙酸的钠盐代替EDTA
用途：
是一种重要的络合剂。
EDTA用途很广，可用作彩色感光材料冲洗加工的漂白定影液，染色助剂，纤维处理助剂，化妆品添加剂，血液抗凝剂，洗涤剂，稳定剂，合成橡胶聚合引发剂，EDTA是螯合剂的代表性物质。
能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络合物。
除钠盐外，还有铵盐及铁、镁、钙、铜、锰、锌、钴、铝等各种盐，这些盐各有不同的用途。
此外EDTA也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起到解毒作用。
也是水的处理剂。
EDTA的制备：
由乙二胺与一氯乙酸在碱性溶液中缩和或由乙二胺、氰化钠和甲醛水溶液作用而得。
实验室制法：
称取一氯乙酸94.5g（1.0mol）于1000mL圆底烧瓶中，慢慢加入50%碳酸钠溶液，直至二氧化碳气泡发生为止。
加入15.6g（0.2mol）乙二胺，摇匀，放置片刻，加入40%NaOH溶液100mL，加水至总体积为600mL左右，装上空气冷却回流装置，于50℃水浴上保温2h，再于沸水浴上保温回流4h。
取下烧瓶，冷却后倒入烧怀中，用浓HCl调节pH至1.2，则有白色沉淀生成，抽滤，得EDTA粗品。
精制后得纯品。
生产原理：
由乙二胺与氯乙酸钠反应后，经酸化制得：
反应1
也可由乙二胺与甲醛、氰化钠反应得到四钠盐，然后用硫酸酸化得到：
反应2
工艺流程
工艺流程
原料配比（kg/t）
氯乙酸（95%）2000烧碱（工业品）880
乙二胺（70%）290盐酸（35%）2500
〔若用硫酸代替盐酸，则用硫酸（98%）1200kg〕
主要设备
成盐锅缩合反应罐酸化锅水洗锅离心机贮槽干燥箱
操作工艺
在800L不锈钢缩合反应罐中，加入100kg氯乙酸、100kg冰及135kg30%的氢氧化钠溶液，在搅拌下再加入18kg83%～84%的乙二胺。
在15℃保温1h后，以每次10L分批加入30%氢氧化钠溶液，每次加入后待酚酞指示剂不显碱性后再加入下一批，最后反应物呈碱性。
在室温保持12h后，加热至90℃，加活性炭，过滤，滤渣用水洗，最后溶液总体积约600L。
加浓盐酸至pH不小于3，析出结晶。
过滤，水洗至无氯根反应。
烘干，得EDTA64kg。
收率95%。
也可以在较高温度条件下进行。
例如，采用如下摩尔配比：
乙二胺：
氯乙酸：
氢氧化钠=1∶4.8∶4.8，反应温度为50℃，反应6h，再煮沸2h，反应产物用盐酸酸化即可得到EDTA结晶，收率82%～90%。
质量指标
含量≥90%铁（Fe）≤0.01%
灼烧残渣≤0.15%重金属（Pb2+）≤0.001%
在Na2CO3中溶解度合格
质量检验
（1）含量测定
采用配位滴定法。
先将乙二胺四乙酸用KOH配制成pH为12.0～13.0的试样液。
以酸性铬蓝K和萘酚绿作混合指示剂，用试样液滴定于120℃干燥过的分析纯CaCO3，当溶液由紫红色变为蓝绿色即为终点。
（2）灼烧残渣测定
按常规方法进行。
安全措施
（1）生产中使用氯乙酸、乙二胺等有毒或腐蚀性物品，生产设备应密闭，操作人员应穿戴劳保用品，车间保持良好通风状态。
（2）产品密封包装，贮于通风、干燥处，注意防潮、防晒，不宜与碱性化学物品混贮。
CASNo.：
60-00-4
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EDTA在水质监测中的应用举例
EDTA多用于水质监测中的络合滴定分析法。
由于本身可以形成多种络合物，所以可以滴定很多金属。
元素周期表里的Ⅱ，Ⅲ，镧系，锕系金属都可以用EDTA滴定。
但是最常用的是用来测定水的碱度。
以镁离子举例如下
镁的检测可以用EDTA滴定法分析。
由于镁比铝轻，因此可以作为合金在航空、航天上使用。
另外利用镁易于氧化的性质，可用于制造许多纯金属的还原剂。
也可用于闪光灯、吸气器等。
测定水的总硬度就是测定水中钙、镁离子的总含量，可用EDTA配位滴定法测定：
滴定前：
M+EBTM-EBT
（红色）
主反应：
M+YMY
终点时：
M-EBT+YMY+EBT
（红色）（蓝色）
滴定至溶液由红色变为蓝色时，即为终点。
滴定时，Fe3+、Al3+等干扰离子可用三乙醇胺予以掩蔽；Cu2+、Pb2+、Zn2+等重属离子，可用KCN、Na2S或巯基乙酸予以掩蔽。
水的硬度有多种表示方法，本实验要求以每升水中所含Ca2+、Mg2+总量（折算成CaO的质量）表示，单位mg·L-1。
器材和药品
1.器材天平（0.1g、0.1mg），容量瓶（100mL），移液管（20mL），酸式滴定管（50mL），锥形瓶（250mL）等。
2.药品HC1（1∶1），乙二胺四乙酸二钠（Na2H2Y·2H2O，A.R.），碱式碳酸镁[Mg（OH）2·4MgCO3·6H2O，基准试剂]，NH3-NH4Cl缓冲溶液（pH=10.0），三乙醇胺（1∶1），铬黑T指示剂（0.2%氨性乙醇溶液）等。
实验方法
一、Mg2+标准溶液的配制（约0.02mol·L-1）
准确称取碱式碳酸镁基准试剂0.2~0.25g，置于100mL烧杯中，用少量水润湿，盖上表面皿，慢慢滴加1∶1HC1使其溶解（约需3~4mL）。
加少量水将它稀释，定量地转移至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
其浓度计算：
二、EDTA标准溶液的配制与标定
1.EDTA标准溶液的配制（约0.02mol·L-1）
称取2.0g乙二胺四乙酸二钠（Na2H2Y·2H2O）溶于250mL蒸馏水中，转入聚乙烯塑料瓶中保存。
2.EDTA标准溶液浓度的标定
用20mL移液管移取Mg2+标准溶液于250mL锥形瓶中，加入10mL氨性缓冲溶液和3~4滴EBT指示剂，用0.02mol·L-1EDTA标准溶液滴定，至溶液由紫红色变为蓝色即为终点。
平行标定3次。
EDTA浓度计算：
，取三次测定的平均值。
三、水的总硬度测定
用20mL移液管移取水样于250mL锥形瓶中，加氨性缓冲溶液6mL，1∶1三乙醇胺溶液3mL，EBT指示剂3~4滴，用EDTA标准溶液滴定，至溶液由紫红色变为蓝色即为终点。
平行测定3次。
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十二烷基硫酸钠
第一部分：
化学品名称
化学品中文名称：
十二烷基硫酸钠
英文名称：
dodecylsulfate,sodiumsalt
简称：
SDS
技术说明书编码：
2036
CASNo.：
151-21-3
分子式：
C12H25SO4Na
分子量：
288.38
第二部分：
成分/组成信息
有害物成分CASNo.
十二烷基硫酸钠151-21-3
第三部分：
危险性概述
危险性类别：
侵入途径：
健康危害：
对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。
可引起呼吸系统过敏性反应。
环境危害：
燃爆危险：
本品可燃，具刺激性，具致敏性。
第四部分：
急救措施
皮肤接触：
脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗。
眼睛接触：
提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。
就医。
吸入：
脱离现场至空气新鲜处。
如呼吸困难，给输氧。
就医。
食入：
饮足量温水，催吐。
就医。
第五部分：
消防措施
危险特性：
遇明火、高热可燃。
受高热分解放出有毒的气体。
有害燃烧产物：
一氧化碳、二氧化碳、硫化物、氧化钠。
灭火方法：
消防人员须佩戴防毒面具、穿全身消防服，在上风向灭火。
灭火剂：
雾状水、泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。
第六部分：
泄漏应急处理
应急处理：
隔离泄漏污染区，限制出入。
切断火源。
建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。
避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。
若大量泄漏，用塑料布、帆布覆盖。
收集回收或运至废物处理场所处置。
第七部分：
操作处置与储存
操作注意事项：
密闭操作，加强通风。
操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。
建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘口罩，戴化学安全防护眼镜，穿防毒物渗透工作服，戴橡胶手套。
远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。
使用防爆型的通风系统和设备。
避免产生粉尘。
避免与氧化剂接触。
搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。
配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。
倒空的容器可能残留有害物。
储存注意事项：
储存于阴凉、通风的库房。
远离火种、热源。
应与氧化剂分开存放，切忌混储。
配备相应品种和数量的消防器材。
储区应备有合适的材料收容泄漏物。
第八部分：
接触控制/个体防护
职业接触限值
中国MAC（mg/m3）：
未制定标准
前苏联MAC（mg/m3）：
未制定标准
TLVTN：
未制订标准
TLVWN：
未制订标准
监测方法：
工程控制：
生产过程密闭，加强通风。
呼吸系统防护：
空气中粉尘浓度超标时，必须佩戴自吸过滤式防尘口罩。
紧急事态抢救或撤离时，应该佩戴空气呼吸器。
眼睛防护：
戴化学安全防护眼镜。
身体防护：
穿防毒物渗透工作服。
手防护：
戴橡胶手套。
其他防护：
及时换洗工作服。
保持良好的卫生习惯。
第九部分：
理化特性
主要成分：
纯品
外观与性状：
白色粉末。
pH：
熔点（℃）：
204-207
沸点（℃）：
无资料
相对密度（水=1）：
1.09
相对蒸气密度（空气=1）：
无资料
饱和蒸气压（kPa）：
无资料
燃烧热（kJ/mol）：
无资料
临界温度（℃）：
无资料
临界压力（MPa）：
无资料
辛醇/水分配系数的对数值：
无资料
闪点（℃）：
无资料
引燃温度（℃）：
无资料
爆炸上限%（V/V）：
无资料
爆炸下限%（V/V）：
无资料
溶解性：
溶于水，微溶于醇，不溶于氯仿、醚。
主要用途：
用作洗涤剂原料、印染工业的匀染剂、矿物的浮选剂。
其它理化性质：
第十部分：
稳定性和反应活性
稳定性：
禁配物：
强氧化剂。
避免接触的条件：
聚合危害：
分解产物：
第十一部分：
毒理学资料
急性毒性：
LD50：
2000mg/kg（小鼠经口）；1288mg/kg（大鼠经口）
LC50：
无资料
亚急性和慢性毒性：
刺激性：
致敏性：
致突变性：
致畸性：
致癌性：
第十二部分：
生态学资料
生态毒理毒性：
生物降解性：
非生物降解性：
生物富集或生物积累性：
其它有害作用：
无资料。
第十三部分：
废弃处置
废弃物性质：
废弃处置方法：
处置前应参阅国家和地方有关法规。
建议用焚烧法处置。
焚烧炉排出的硫氧化物通过洗涤器除去。
废弃注意事项：
第十四部分：
运输信息
危险货物编号：
无资料
UN编号：
无资料
包装标志：
包装类别：
Z01
包装方法：
无资料。
运输注意事项：
起运时包装要完整，装载应稳妥。
运输过程中要确保容器不泄漏、不倒塌、不坠落、不损坏。
严禁与氧化剂、食用化学品等混装混运。
运输途中应防曝晒、雨淋，防高温。
车辆运输完毕应进行彻底清扫。
第十五部分：
法规信息
法规信息化学危险物品安全管理条例（1987年2月17日国务院发布），化学危险物品安全管理条例实施细则（化劳发[1992]677号），工作场所安全使用化学品规定（[1996]劳部发423号）等法规，针对化学危险品的安全使用、生产、储存、运输、装卸等方面均作了相应规定。
第十六部分：
主要用途
SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。
它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸：
蛋白复合物。
在乳液聚合反应中，可充当两相溶液的乳化剂。
RNase
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Rnase：
即RNA水解酶
包括几种，RNaseA和RNaseH
RNaseH是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。
该酶不能消化单链或双链DNA。
RNaseA是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶.RNaseA对RNA有水解作用，但对DNA则不起作用。
RNaseA在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5'-磷酸二酯键的裂开，形成具有2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。
可以用来去除DNA制品中的污染RNA。
它们的合成目前资料还比较少。
LB培养基
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950ml去离子水中加入:
胰化蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.
LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨（Tryptone）10g/L
酵母提取物（Yeastextract）5g/L
氯化钠（NaCl）10g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长）
微量离心管
一种小型的离心管，又称为EP（eppendorf）管，与微型离心机配套使用，用于微量试剂的分离离心。
1963年，全世界第一只eppendorf微型离心管诞生于德国eppendorf公司，为分子生物学微量操作实验提供了一种新的工具。
今天eppendorf管已经成为实验室不可缺少的小管子的专用代称。
限制酶
限制酶（RestrictionEnzymes）全称限制性核酸内切酶
细菌反击
细菌容易被噬菌体感染，如已经在每月推荐分子中看到的phix174噬菌体。
许多细菌用切割外来DNA的方法进行自我保护，如切割感染性噬菌体的DNA。
这些细菌产生一种能切割DNA的核酸内切酶，一旦发现外来DNA便将其切割，因此它们有效地限制了噬菌体对细菌的感染，故这种核酸内切酶被称为限制酶。
分子剪刀
每种限制酶特异识别专一DNA序列，并在切割位点将其准确切割。
例如，EcoR1切割GAATTC序列，切割位点在G与A之间。
细菌将自身的DNA甲基化修饰，防止了被自身核酸内切酶降解。
这些甲基化基团被装到DNA大沟的腺嘌呤或胞嘧啶上（依细菌种类而定），使限制酶不能与DNA序列结合，但又不影响这些DNA序列上遗传信息的正常识别与表达。
噬菌体DNA没有这些保护性的甲基化基团，所以会被降解。
每种细菌都有一种或几种用来切割特异DNA序列的限制酶，还有与限制酶配对的甲基转移酶，用来防止限制酶降解细菌基因中的相应序列。
EcoRⅠ
限制性内切酶，由大肠杆菌产生，识别位点是：
GAATTC切割后的片段具有黏性
它属于限制性内切酶Ⅱ类。
HindⅢ
限制性内切酶，由流感嗜血杆菌Rd产生.
识别位点是：
AAGCTT
切割后的片段具有黏性
它属于限制性内切酶Ⅱ类。
微量加样器（移液器）的具体操作方法
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94发布时间：
2009-8-88:
43:
16
微量加样器（移液器）的具体操作方法
（一）设定容量值
PipetmanP加样器容量计读数由三位数字组成（显示所转移液体容量），读数精确到个
位数。
EppendorfResearch加样器容量计读数则由四位数字组成，读数精确到小数后一位，从上（最大有效数字）到下（最小有效数字）读取。
利用底部刻度可将容量调节到更精确的分度。
PipetmanP根据型号不同，数字可能是黑色或红色的。
Eppendorf Research加样器的数字不同型号均为白色。
转动加样器的黑色调节环或按钮的白色调节旋钮均可设定容量。
用白色调节旋钮设定容量比较方便和快速，尤其是穿戴手套时。
使用黑色调节环可较准确调节到设定值。
（二）吸液
首先选择一支合适的吸头安放在加样器套筒上。
使用P5000及P10ML时，装吸头前必在套筒上加插一过滤芯。
稍加扭转压紧吸头使之与套筒间无空气间隙。
未装吸头的加样器绝不可用来吸取任何液体。
标准吸液步骤如下：
1．把按钮压至第一停点。
2．垂直握持加样器，使吸头浸入液样中，浸入液体深度视型号而定。
3．缓慢、平稳地松开按钮，吸液样。
等1s，然后将吸头提离液面。
用药用吸纸抹去吸嘴外面可能附着的液滴。
小心勿触及吸头
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