新冠毒核酸检测技术方案.docx

新冠毒核酸检测技术方案.docx

《新冠毒核酸检测技术方案.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《新冠毒核酸检测技术方案.docx（7页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

新冠毒核酸检测技术方案

新冠毒核酸检测技术方案

为落实《关于做好新冠疫情常态化防控工作的指导意见》和省应对新冠疫情应急指挥部要求，进一步提升全省新冠毒核酸检测能力，全面推进扩大核酸检测，使新冠核酸检测保“量”保“质”保“安全”，为做好常态化疫情防控工作提供有力技术支撑,制订此技术方案。

一、适用范围

适用于**省区域内开展新冠毒核酸检测的实验室。

二、生物安全防护要求

（一）防护用品。

医用外科口罩、N95及以上防护口罩、全面型呼吸防护器或护目镜和面屏、医用防护服、防水隔离衣、工作服、工作鞋、乳胶手套、防水靴套、医用防护帽。

（一）相关操作过程人员生物安全防护要求。

样本采集、样本核酸提取人员须三级生物安全防护：

N95口罩（必要时可在外加戴医用外科口罩）、医用防护帽、工作服、外着防护服（必要时加戴穿防水隔离衣）、工作鞋、防水靴套、双层乳胶手套、护目镜（必要时可加戴面屏）或全面型呼吸防护器。

标本运输/接收人员须二级生物安全防护：

工作服、工作鞋、防水隔离衣、医用防护帽、医用外科口罩或N95口罩、乳胶手套；特殊情况时，可升级为三级生物安全防护。

核酸扩增检测人员须一级生物安全防护：

医用外科口罩、乳胶手套、工作服、工作鞋、医用防护帽。

三、人员要求

（一）掌握实验室生物安全知识，熟悉生物安全三级实验室个人防护操作。

（二）实验室操作人员具备核酸提取和PCR扩增等分子生物学操作能力。

（三）标本采集人员接受过新冠标本采集操作培训，实验室检测人员接受过新冠核酸检测技术培训。

四、核酸检测实验室环境要求

新冠毒核酸检测实验室应至少设置三个区域：

试剂准备区、标本制备区、核酸扩增区。

各区域可以采用集中或分散设置形式，但物理空间上必须完全相互独立，各区域在使用中应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。

标本制备区应为生物安全二级实验室，宜为负压。

如为常压,应当可以通风换气，同时，必须设置缓冲区，以满足实验室个人防护装备穿脱的需求。

五、核酸检测实验设备要求

（一）试剂准备区。

超净工作台，冰箱，混匀器，移液器，离心机。

（二）标本制备区。

冰箱，混匀器，移液器，生物安全

柜，核酸提取仪，离心机。

（三）核酸扩增区。

荧光PCR扩增仪。

六、试剂耗材要求

（一）核酸提取试剂和检测试剂需具备三证，并通实验室性能验证。

（二）移液器枪头应为带滤芯枪头。

七、标本采集

（一）采集对象。

需要进行新冠毒核酸检测的个体。

（二）采集准备。

咽/鼻拭子、采样管、采样杯、三级生物安全个人防护装备。

（三）采集标本类型。

新冠核酸检测的样本类型一般包括上呼吸道的咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子，下呼吸道的深咳痰液、呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液和肺组织活检标本。

为提高呼吸道样本的新冠毒核酸呈阳检出率，兼顾采样的便捷性，首选深咳痰，其次鼻咽拭子，最后才是咽拭子，也可同时采集同一人的鼻拭子和咽拭子并放入同一病毒采样液中。

（四）标本采集方法。

1.咽拭子：

被采样人坐下，头后倾，张大嘴，并发“啊”音。

咽拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处。

先用拭子适度用力来回擦拭双侧咽扁桃体至少3次，然后再咽后壁至少3次。

取出拭子，避免触及舌头、悬垂体、口腔粘

膜和唾液。

将拭子头浸入含3nli采样液的管中。

靠近顶端处折断无菌拭子杆，尾部弃去，旋紧管盖。

2.鼻咽拭子：

被采样人头部后仰（约70。

）,保持不动。

用鼻拭子估测耳根到鼻孔距离。

自鼻孔垂直面部方向插入，深入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半。

遇到阻力后即到达后鼻咽，应停留数秒吸取分泌物（一般要求15〜30s）,应旋转拭子3〜5次。

宜轻轻旋转取出拭子，拭子头浸入装有3ml采样液中。

顶端处折断无菌拭子杆，尾部弃去，旋紧管盖。

3.深咳痰液：

用清水（勿用含消毒剂的漱口液）漱口2〜3次，有假牙者取出假牙后漱口，要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于采样杯（含3ml采样液（细胞保存液）的50ml螺口痰杯）中。

4.支气管灌洗液：

将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集）。

5.肺泡灌洗液：

局部麻醉后将纤维支气管镜通过口或鼻经过咽部插入右肺中叶或左肺舌段的支管，将其顶端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌生理盐水，每次30〜50nli，总量100〜250ml,不应超过300ml。

送检标本管/杯外必须贴含样本编号、种类、姓名及采样日期等信息的识别条码。

在采样记录单上同时记录并张贴识别条码。

（五）标本运输。

将密闭后的标本管/杯装入密封袋，每袋限一份标本，依次装入标本盒、新冠专用标本转运箱，并保持标本直立，70%酒精消毒后封闭，并由专人转运到实验室。

转运期间不能自行打开转运箱，并保持转运箱平稳，避免剧烈震荡、颠簸。

内部转运时，应采集之后30min内运抵实验室，不宜超过2h；涉及外部标本运输的，应根据标本类型，按照A类或B类感染性物质进行三层包装。

宜冷藏条件下定时定点转运交接，转运时间不超过8h。

标本采集后应置于4°C环境保存，保存时间不超过24h。

（六）标本保存。

用于病毒核酸检测的标本应尽快进行检测，能在24小时内检测的标本可置于4°C保存；24小时内无法检测的标本则应置于-70C或以下保存（如无-70C保存条件，则于-20C冰箱暂存）。

应设立专库或专柜单独保存标本。

标本运送期间应避免反复冻融。

（七）标本接收

1.确认样本在装箱前有消毒环节，并在开箱瞬间用75%乙醇喷雾消毒。

2.核实样本信息。

八、实验室检验

（一）新冠核酸提取。

在标本制备室，须2名实验室操作人员着生物安全三级个人防护装备进行病毒RNA提取，确保生物安全。

进行核酸提取时，标本的开盖、取样或核酸的人工提取等操作都在生物安全柜内两人配合进行，检验操作过程中尽可能缩短打开样本管盖的持续时间，轻柔操作，尽可能避免产生气溶胶。

（二）新冠核酸检测。

推荐选用针对新冠毒的ORFlab、N基因区域的引物和探针。

靶标一（ORFlab）:

正向引物（F）：

CCCTGTGGGTTTTACACTTAA

反向引物（R）：

ACGATTGTGCATCAGCTGA

荧光探针（P）：

5,-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQl-3，靶标二（N）:

正向引物（F）：

GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT

反向引物（R）：

CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG

荧光探（P）：

-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3,核酸提取和实时荧光RT-PCR反应体系及反应条件参考相关厂家试剂盒说明。

结果判断：

阴性:

无Ct值或Ct导40。

呈阳:

Ct值〈37,可报告为呈阳。

灰度区：

Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct值＜40,扩增曲线有明显起峰，该样本判断为呈阳，否则为阴性。

注：

如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。

（三）呈阳结果的认定。

由卫生健康行政部门批准的确认实验室进行呈阳样本确认检测；非确认实验室的结果呈阳，须立即联系当地的疾控中心进行核酸结果的确认检测。

实验室确认呈阳病例需满足以下两个条件中的一个：

1.同一份标本中新冠毒2个靶标（ORFlab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为呈阳。

如果出现单个靶标呈阳的检测结果，则需要重新采样，重新检测。

如果仍然为单靶标呈阳，判定为呈阳。

2.两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标呈阳，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标呈阳的检测结果，可判定为呈阳。

核酸检测结果阴性不能排除新冠毒感染，需要间隔1天后再次采样检测以确认。

同时需排除可能产生假阴性的因素，包括：

样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。

（四）检验后标本及相关废弃物处理

1.需复查和上送的标本，应按规定保存和上送。

否则和其他固体废弃物一起装入红色废弃物袋内密封，转运至高压灭菌室，高压灭菌。

2.相关废液，采用化学消毒或物理消毒方式处理，并对消毒效果进行验证，确保彻底灭活。

3.消毒灭菌后的标本转运出实验室需符合生物安全原则、符合感染管理规范。

九、质量控制

卫生健康行政部门批准同意开展核酸检测的实验室要进一步制定和完善新冠毒实验室检测相关管理制度和工作程序。

严格按照国家卫生健康委《新冠毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第五版）和本技术方案，科学、规范开展样本采集、样本运输（院内和外部）、实验室检测、信息报送等各环节工作，确保工作质量。

各检测机构实验室需做好新冠核酸检测的日常室内质控（包括不限于定期使用阴性、呈阳和弱呈阳质控品；仪器比对；人员比对；试剂比对等）；并常态化接受国家或省级质量控制中心的检测技术和质量控制指导。

新冠病毒核酸检测的实施方案

一、总体要求

保持预防为主，将加快提升核酸检测能力、尽力扩展核酸检测范围作为常态化防控落实"四早”措施的首要举措。

按照依法依规、分类指导、因地制宜的原则，做好对重点人群重点行业的应检尽检工作,全力排查风险隐患。

落实加快提升检测能力所必须的人员、设备和资金，压实属地、部门、单位和个人责任，完善工作机制,强化组织管理，做到及早发现、精准防控，为加快推动生产生活秩序全面恢复创造条件。

二、积极扩展检测范围，全力排查风险隐患各地可依据疫情防控工作必须要和检测能力，确定并动态调整检测策略和人群范围。

〔一〕重点人群“应检尽检“。

1.密切接触者；2.境外入境人员；3.发热门诊患者；4.新住院患者及陪护人员；5.医疗机构工作人员；6.口岸检疫和边防检查人员；7.监所工作人员；

8.社会福利养老机构工作人员。

〔二〕其他人群“愿检尽检“。

各地可依据本地实际确定和动态调整优先检测人群。

［三〕强化公众监测预警。

疾控机构定期对一般人群进行抽样监测和流行病学调查，做好信息收集、分析研判和监测预警工作。

各地依据疫情发展变化动态调整常态化防控措施和动态推动应检尽检。

三.加快提升检测能力，全力满足检测必须求

〔一〕强化实验室建设。

各地要强化三级医院、传染病专科医院、县〔区级及以上疾控机构、海关及有条件的县医院实验室建设，使其具备展开新冠病毒检测能力。

对医疗资源相对缺乏、检测能力相对薄弱、疫情防控压力较大的陆路边境口岸城市，要又寸疾控机构、海关和1家综合实力较强的医疗机构予以重点支持，必要时可采纳移动方舱实验室。

同步强化其他二级以上医院、专科医院、妇幼保健院实验室建设，使其逐步达到新冠病毒核酸检测条件。

㈡强化质量控制和生物安全。

强化实验室能力建设标准体系认证和实验室室内质控,常态化接受国家级或省级临床检验质量控制。

各省级卫生健康行政

部门组织辖区内检测机构分批参加室间质评，确保每家机构每年至少参加1次室间质评。

检测机构强化生物安全管理，严格操作流程，妥善处置剩余生物样本，做好样本使用、储存、上送与销毁工作。

〔三〕强化人员规范培训。

制定培训计划，省市级疾控机构、临检中心、海关全面强化对检验检测人员的技术培训和指导，确保实验室人员数量质量必须求。

做到采样人员熟练掌握鼻咽拭子、咽拭子等规范采集方法,实验室检测人员熟练掌握标本处理、相关试剂使用和检测方法，减少技术操作问题对检测结果准确性、可靠性的影响，实现标本采集、储存、运输、实验室检测等各个环节全流程规范化操作。

［四〕加快设备产能提升。

强化检测设备、检测方法和检测试剂以及移动方舱实验室等方面研究、审牝侨口市场转化，抓紧增加更简便、更高效准确的检测设备生产，特别是核酸快速检测设备的生产扩能，扩展商业化应用，积极组织提升移动方舱实验室等新型检测设备产能应用规模。

属地政府组织有关部门科学评估当地检测必须求和设备、试剂和耗材生产能力，制定供求计划。

工业和信息化部门协调生产企业，依据必须求尽快扩展设备、试剂和耗材等产能。

发展改革部门做好检测所必须物资统一调配。

〔五〕确保信息安全畅通。

强化信息安全管理,通过信息化手段，确保受检对象的信息准确、检测结果的规范管理和隐私保护。

检测机构向受检对象提供检测证实并做好信息登记工作，发现检测结果阳性要严格履行报告责任。

各地要及时将检测结果信息共享到“健康码”数据库，并依托全国一体化政务服务平台推动各地区核酸检测相关信息互认共享,在全国一体化平台“防疫健康信息码“及入境人员版统一标注。

对伪造、窜改新冠病毒检测结果等行为依法依规严厉打击。

四、健全完善工作机制，全力提升检测效率

〔一〕落实相关部门责任。

卫生健康部门公布具有检测资质的机构名单,指定医疗机构、疾控机构、海关、社会检测机构为“应检尽检“人群提供检测服务，指定医疗机构、社会检测机构为“愿检尽检,人群提供检测服务。

进行较大规模人群检测时，可采纳将5至10份标本混检进行初筛的方法，提升检测效率,降低检测成本。

要强化对实验室质量控制和生物安全的监管，将检测工作纳进医疗卫生机构业务考核内容，收集检测相关信息并上报上级卫生健康部门。

卫生健康部门负责组织密切接触者、发热门诊患者、新住院患者及陪护人员、医疗机构工作人员的检测工作，民政部门协调组织养老机构、儿童福利机构、未成人救助保护机构工作人员和城乡社区工作者的检测工作，公安、司法行政部门负责组织监所工作人员和新收被监管人员检测工作，海关负责组织境外入境人员、口岸检疫人员检测工作，移民管理部门负责组织边防检查人员检测工作。

教育、交通运输、人力资源社会确保、商务等部门依据各地实际，优先组织、有序引导做好学校〔幼儿园〕工作人员、来自疫情重点地区复学同学、公共交通工具和客运场站服务人员、复工复产单位新到岗〔返岗〕人员检测工作。

〔二〕发挥社区单位作用。

社区要强化对重点人群的管理，主动强化信息沟通，加大健康教育力度，引导社区群众协助、配合政府部门组织展开检测工作，依法接受样本采集、检测、隔离、治疗等防控措施。

各机关企事业单位、学校、社会团体和其他组织在复工复产复学过程中，要建立健全核酸检测的管理制度,切实履行主体责任,主动联系卫生健康部门，有序组织展开检测工作。

（三）完善检测后续工作。

检测机构及时将检测结果通知到检测对象。

对检测结果阳性者按规定进行网络直报、流行病学调查、疫情处置等,社会检测机构要及时将核酸检测结果阳性者信息报告所在县〔区〕疾控机构。

确诊患者马上按规定转运至定点医疗机构,无症状感染者按规定对其实施集中隔离医学观察,观察期间如出现临床表现应及时转运至定点医疗机构,确诊后及时订正。

各地以县〔区〕为单位，合理设置隔离点，做到应隔尽隔、应收尽收。

五、强化组织管理，加大确保力度

（一）强化组织领导。

地方各级党委和政府要将强化检测工作作为当前常态化疫情防控工作的重要内容，强化领导，精心组织。

各级联防联控机制〔领导小组、指挥部〕要制定工作方案，落实部门使命，定期召开协调会议，研究解决扩展核酸检测工作的重点难点问题，做好舆情评估和风险应对，并及时依据疫情防控形势作动态调整。

［二〕强化政策扶持。

各地党委政府要研究制订快速提升核酸检测能力的相关政策措施，调动社会检测服务机构展开核酸检测工作的积极性。

省级医保部门及时按程序将核酸检测项目及相关耗材纳进本省医疗确保诊疗项目目录。

省级物价部门制定本省域内统一执行的收费标准。

［三］加大经费确保。

各级政府强化资金统筹安排,对疾控机构、医疗机构、海关实验室建设和检测设备的配备予以经费支持,特别要加大对人群相对密集、流动性较大地区和边境口岸等重点地区支持力度。

具备条件的地区将检测试齐厢耗材纳进省级集中采购平台采购范围并简化招标采购程序。

“应检尽检“所必须费用由各地政府承当一、愿检尽检“所必须费用由企事业单位或个人承当。

〔四］加大宣扬倡导。

各地宣扬部门与卫生健康部门共同强化新冠肺炎防控知识的科普宣扬工作，利用多种媒体广泛传播防控知识，提升群众主动参加核酸检测的意识，促进愿检尽检。