含量分析方法验证方案.docx
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含量分析方法验证方案
***原料含量分析方法验证方案
20**年**月
验证方案的起草与审批
验证小组成员
部门
人员
职责
验证小组组长
部门
人员
职责
负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施；督促验证人员做好记录；负责各阶段验证结果汇总及评价、组织起草验证报告；组织相关培训
方案审核
审核
签名及日期
验证委员会
方案批准
批准人
批准日期
方案实施日期：
附录1***原料含量分析方法
1.验证目的
根据法规的要求，采用药典或其它法规未收载的分析方法应进行验证，证明采用的方法适合于相应的检测要求。
这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数、可接受标准和研究步骤。
2.方法简介与确认范围
***原料含量检测方法为自行开发的液相室色谱方法。
为确保方法的准确性和可行性，为日常检测方法提供依据，现对该方法进行验证。
方法验证必须按照验证方案进行，此次验证方案提供***原料含量分析方法验证验证，包括：
专属性、精密度、线性、范围、准确度及耐用性。
3.标准品、供试品
3.1标准品
名称
批号
来源
3.2供试品
名称
批号
来源
4.风险评估
按照《质量风险管理规程》，质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评估，确定了需进行方法确认的项目。
具体见下表：
风险
因素
风险
可能影响效应
现有控制措施
S
P
D
RPN
风险级别
建议采取措施
专属性
不具有专属性
杂质和主峰不能有效分离，含量不准确
无
3
3
3
27
中
首次使用前，对专属性进行验证
精密度
精密度差
不同时间或人员测定的结果不一致
每次测试前进行系统适用性测试
3
3
3
27
中
首次使用前，对精密度进行验证
准确度
回收率低
含量结果不准确
无
3
3
3
27
中
首次使用前，对准确度进行验证
线性
线性不好
含量结果不准确
无
3
3
3
27
中
首次使用前，对线性进行验证
范围
范围窄
浓度超过范围后结果不准确
无
3
3
3
27
中
首次使用前，对范围进行验证
耐用性
耐用性差
参数微小变化对结果影响很大
无
3
3
3
27
中
首次使用前，对耐用性进行验证
风险评估人：
评估日期：
5.验证的可接受标准
项目
可接受标准
专属性
空白无干扰，主峰与相邻峰之间的分离度不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990.
线性
R≥0.999
准确度
回收率在98.0~102.0%范围内
精密度
重复性RSD%≤2.0%
中间精密度RSD%≤2.0%
精密度：
两组数据平均检测结果的相对偏差≤2.0%
范围
应至少为指标的80%~120%
耐用性
评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐pH、有机相比例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响
6.验证步骤
6.1系统适应性
标准液：
取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
取标准液连续进样5次，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%。
6.2专属性
a）溶剂空白：
取***进样，记录色谱图，溶剂对测定应无干扰。
b）标准液：
取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
进样分析，记录色谱图，主峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
c）样品液：
取样品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
进样分析，记录色谱图，主峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
d）高温破坏试验：
取在60℃加热10天的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得高温破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
e）高湿破坏实验：
取在相对湿度为90%±5%的条件下放置10天的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得高湿破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
f）强光破坏试验：
取经总照度不低于1.2×106Lux.hr,近紫外能量不低于200w.hr/m2破坏的的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得强光破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
g）酸破坏试验：
取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入0.1mol/L盐酸溶液1.00ml，25℃下放置24小时，然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液1.00ml中和，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得酸破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
h）碱破坏试验：
取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液1.00ml，25℃下放置24小时，然后用0.1mol/L盐酸溶液1.00ml中和，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得碱破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
i）氧化破坏试验：
取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入10%过氧化氢溶液1ml，25℃下放置24小时，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得氧化破坏样品溶液。
进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。
6.3线性
a）线性测试液1：
称取标准品约16mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
b）线性测试液2：
称取标准品约18mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
c）线性测试液3：
称取标准品约20mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
d）线性测试液4：
称取标准品约22mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
e）线性测试液5：
称取标准品约24mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
取上述线性测试液1~5分别进样，记录色谱图，以标准品浓度（mg/ml）为横坐标，以主峰面积为纵坐标进行线性回归计算，得出线性回归方程及线性度。
线性范围为标准液浓度的80%~120%，相关系数R应不小于0.999，Y轴截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的相对标准偏差应不大于2.0%。
6.4准确度
a）标准液：
称取标准品约20mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
b）准确度测试液1：
称取标准品约16mg，精密称定,置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。
c）准确度测试液2：
称取标准品约20mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
d）准确度测试液3：
称取标准品约24mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
取上述标准液连续进样5次，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%；取准确度测试液1、准确度测试液2、准确度测试液3分别连续进样3次，记录色谱图，以外标法计算*****的量，并计算回收率。
每一个回收率及平均回收率均应在98.0%~102.0%范围内，各回收率的相对标准偏差应不大于2.0%。
6.5精密度
a）重复性：
取一批样品，同法连续测定6次，含量测定结果的相对标准偏差应不大于2.0%。
b）中间精密度：
不同仪器（Agilent1200高效液相色谱仪，VWD检测器）、不同检验人员（另一位化验员）、新配制的流动相，与重复性测试测定同一批样品的含量，样品含量测定结果的相对标准偏差应不大于2.0%。
c）精密度测试结果：
不同检验人员、不同时间测定结果的平均值的相对偏差应不大于20%。
6.6范围
根据线性、精密度和准确度确定方法的范围，在该浓度范围内，方法具有良好的精密度、线性和准确度。
范围至少在指标的80~120%范围内。
6.7耐用性
a）色谱条件的改变：
在其他条件不变情况下，单独改变柱温、流速、色谱柱、缓冲液pH值、有机相比例、流动相比例的其中一个色谱条件，取标准液分别进样，主峰与相邻杂质峰的分离度R应不小于1.5。
改变项目
柱温
流速（ml/分钟）
色谱柱
缓冲液pH值
甲醇、乙腈比例
缓冲液与有机相比例
设定值
20℃
30℃
0.85
1.05
另一支
5.80
6.20
60:
50
50:
60
50:
50
40:
60
b）溶液稳定性：
按本方法配制标准溶液和供试品溶液，供试品溶液分别放置0h，4h，8h，24h，48h，36h后进样测定，计算放置一段时间后供试品溶液和标准品溶液的峰面积的回收率，如果回收率结果在98.0~102.0%范围内，则表明溶液在这段时间内稳定，否则说明溶液不稳定，需根据稳定性结果考虑配制和进样时间。
6.8样品测定
应用本方法，对3批样品进行测定，样品含量均应能够符合规定。
7.偏差
验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报，并且采取适当的措施进行处理，并及时记录。
如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响，应确定原因并采取必要措施后重新进行验证。
8.风险的接收与评审
经分析，对上一步判断的风险采取的控制措施，若经检查确认符合要求，则其相应的风险可降至为可接受风险。
否则，需采取进一步的措施降低风险。
9.再验证
发生下列情形之一时，需进行再验证。
（1）生产工艺发生改变。
（2）检查方法发生改变。
10.确认结果评审和结论
验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告，报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，确认再验证周期。
对验证结果的评审应包括：
确认试验是否有遗漏？
确认试验过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准？
确认记录是否完整？
确认试验结果是否符合标准要求？
偏差及对偏差说明是否合理？
是否需要进一步补充试验？
11.更改历史
版本号
生效日期
主要变更描述
第1版
本文档为新订
12.附录
附录1***原料含量分析方法
附录1***原料含量分析方法
1仪器：
岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外检测器。
2标准品及试剂
*****标准品来源：
公司自制
甲酸铵分析纯
甲酸或氨水分析纯
乙腈色谱纯
甲醇色谱纯
水超纯水
3色谱条件
色谱柱填料为L1（****柱），4.6mm×250mm，5μm；检测波长为230nm；进样量为10μl；柱温为25℃。
流速：
1.0ml/min；
缓冲液：
1.6g甲酸铵溶于900ml水中，用0.4%甲酸溶液（或1%氨水溶液）调节pH为6.0，然后加水稀释至1000ml。
流动相：
乙腈-甲醇-缓冲液（275:
275:
450）。
4溶液制备
空白溶液：
乙腈
标准液：
取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
样品液：
取样品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
程序控制溶液：
同标准液。
5测定
取空白溶液进样，记录色谱图，空白无干扰；取标准液连续进样5次，记录色谱图，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%。
每隔12针及序列的最后进样1针程序控制溶液，要求程序控制溶液和连续5针标准液主峰面积的相对标准偏差应不大于1.5%。
取样品液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量应为****（以无水物计）。
含量（%）=（Au/Mu）×（Ms/As）×P；
式中：
Au为样品液主峰面积；As为标准液主峰面积；Ms为标准品称重，mg；Mu为样品称重，mg；P为标准品含量，μg/mg。
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