美国药典USP31 71 无菌检查法中文版.docx

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美国药典USP3171无菌检查法中文版

美国药典USP31-NF26无菌检查法《71》.doc

71STERILITYTESTS无菌检查法

此通则的各部分已经与欧洲药典和/或日本药典的对应部分做了协调。

不一致的部分用符号（）来标明。

下面这些步骤适用于测定是否某个用于无菌用途的药品是否符合其具体的各论中关于无菌检查的要求。

只要其性质许可，这些药品将使用供试产品无菌检查法项下的膜过滤法来检测。

如果膜过滤技术是不适合的，则使用在供试产品无菌检查法项下的培养基直接接种法。

除了具有标记为无菌通道的设备之外，所有的设备均须使用培养基直接接种法进行检测。

在结果的观测与理解项下包含了复验的规定。

由于无菌检查法是一个非常精确的程序，在此过程中程序的无菌状态必须得到确保以实现对结果的正确理解，因此人员经过适当的培训并取得资质是非常重要的。

无菌检查在无菌条件下进行。

为了实现这样的条件，试验环境必须调整到适合进行无菌检查的方式。

为避免污染而采取的特定预防措施应不会对任何试图在检查中发现的微生物产生影响。

通过在工作区域作适当取样并进行适当控制，来定期监测进行此试验的工作条件。

这些药典规定程序自身的设计不能确保一批产品无菌或已经灭菌。

这主要是通过灭菌工艺或者无菌操作程序的验证来完成。

当通过适当的药典方法获得了某物品中微生物污染的证据，这样获得的结果是该物品未能达到无菌检验要求的结论性证据，即便使用替代程序得到了不同的结果也无法否定此结果。

如要获得关于无菌检验的其他信息，见药品的灭菌和无菌保证<1211>

按照下面描述的方法配制实验用培养基；或者使用脱水培养基，只要根据其制造商或者分销商说明进行恢复之后，其能够符合好氧菌、厌氧菌、霉菌生长促进试验的要求即可。

使用经过验证的工艺对培养基进行灭菌操作。

下面的培养基已经被证实适合进行无菌检查。

巯基醋酸盐液体培养基主要用于厌氧菌的培养。

但其也用于检测好氧菌。

大豆酪蛋白消化物培养基适合于培养霉菌和好氧菌。

FluidThioglycollateMedium巯基醋酸盐液体培养基

L-CystineL-胱氨酸

0.5g

SodiumChloride氯化钠

2.5g

Dextrose（C6H12O6·H2O）葡萄糖

5.5/5.0g

Agar,granulated（moisturecontentnot

exceeding15%）

琼脂，呈颗粒状（水分含量不超过15%）

0.75g

YeastExtract（water-soluble）

酵母提取物（水溶性）

5.0g

PancreaticDigestofCasein

酪蛋白胰酶消化物

15.0g

SodiumThioglycollate巯基乙酸钠

0.5g

orThioglycolicAcid或者巯基乙酸

0.3mL

ResazurinSodiumSolution（1in1000）,

freshlyprepared

刃天青钠溶液（1比1000），新配制

1.0mL

PurifiedWater纯净水

1000mL

将L-胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物、酪蛋白胰酶消化物与纯净水混合，并加热至实现溶解。

将巯基乙酸钠或者巯基乙酸溶解于该溶液，如果需要可再加入1N氢氧化钠，以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。

如需要则过滤，再次加热该溶液但不得煮沸，并趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。

加入刃天青钠溶液，混匀，并将该培养基置于适当容器中，该容器应为培养基提供特定的面积－深度比，以使在培养期末表明氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。

使用经过验证的工艺进行灭菌。

如果需要储存该培养基，将其置于无菌、气密容器中，在2至25之间储藏。

如果超过上部三分之一的培养基已经呈粉色，可以用以下方法恢复该培养基一次：

在水浴锅中或者自由流动蒸气中加热该容器，直至粉色消失，并迅速放凉，须小心防止非无菌空气进入到容器中。

巯基醋酸盐液体培养基将在32.5±2.5条件下进行培养。

AlternativeThioglycollateMedium替代巯基醋酸盐培养基

配制与巯基醋酸盐液体培养基成分相同，但省略了琼脂和刃天青钠溶液的混合物，按上述方法灭菌，并在使用前静置至凉。

灭菌后pH值为7.1±0.2。

在厌氧条件下培养，培养时间同培养期。

替代性巯基醋酸盐培养基将在32.5±2.5条件下进行培养。

Soybean–CaseinDigestMedium大豆-酪蛋白消化物培养基

PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物

17.0g

PapaicDigestofSoybeanMeal大豆粉木瓜蛋白酶消化物

3.0g

SodiumChloride氯化钠

5.0g

DibasicPotassiumPhosphate磷酸氢二钾

2.5g

Dextrose（C6H12O6·H2O）葡萄糖

2.5/2.3g

PurifiedWater纯净水

1000mL

将固体物质溶解于纯净水，轻微加热以实现溶解。

放凉溶液至室温，并用1N氢氧化钠调整pH值，以便在灭菌后其pH值呈7.3±0.2。

过滤，如需要则使之澄清，分装入适合的容器，并用经过验证的程序消毒。

如果不立刻使用，则在2到25之间以无菌且密闭良好的容器保存。

.

大豆-酪蛋白消化物培养基将在22.5±2.5条件下培养。

MediaforPenicillinsorCephalosporins用于青霉素和头孢菌素的培养基

当无菌检查培养基用于供试产品无菌检查项下的培养基直接接种法时，按如下内容变更巯基醋酸盐液体培养基和大豆-酪蛋白消化物培养基的制备方法。

向每一种培养基的容器中，以无菌操作转移足够灭活供试样品中所存在抗生素的-内酰胺酶。

使用此前已经对其青霉素或头孢菌素灭活能力进行了测定的-内酰胺酶配制品，来测定灭活该抗生素所必需的-内酰胺酶数量。

[注意：

补充的-内酰胺酶培养基也可以用于膜过滤试验]

或者（在与无菌试验所用场所彻底隔离的区域中），按照验证试验项下的任意一种方法，使用少于100个菌落（cfu）的金黄色葡萄球菌（见表1）作为验证菌，来确认适当数量的-内酰胺酶已经被整合到该培养基中。

必须观测到接种后培养物中出现典型微生物生长，才能确认-内酰胺酶浓度是适当的。

表1适合用于生长促进试验和验证试验中的试验微生物的菌株

Aerobicbacteria好氧菌

Staphylococcusaureus1

金黄色葡萄球菌

ATCC6538,CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518

Bacillussubtilis枯草芽孢杆菌

ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054

Pseudomonasaeruginosa2

绿脓杆菌

ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118

Anaerobicbacterium厌氧菌

Clostridiumsporogenes3

产芽胞梭状芽胞杆菌

ATCC19404,CIP79.3,NCTC532orATCC11437

Fungi霉菌

Candidaalbicans白色念珠菌

ATCC10231,IP48.72,NCPF3179

Aspergillusniger黑曲霉

ATCC16404,IP1431.83,IMI149007

1 AnalternativetoStaphylococcusaureusisBacillussubtilis（ATCC6633）.可替代金黄色葡萄球菌的是枯草杆菌（ATCC6633）

2 AnalternativemicroorganismisMicrococcusluteus（Kocuriarhizophila）,ATCC9341.替代微生物是藤黄微球菌（Kocuriarhizophila），ATCC9341。

3 AnalternativetoClostridiumsporogenes,whenanonspore-formingmicroorganismisdesired,isBacetroidesvulgatus（ATCC8482）.当需要不形成芽孢微生物时，产芽胞梭状芽胞杆菌的替代微生物是Bacetroidesvulgatus

[NOTE—Seed-lotculturemaintenancetechniques（seed-lotsystems）areusedsothattheviablemicroorganismsusedforinoculationarenotmorethanfivepassagesremovedfromtheoriginalmasterseedlot.][注意：

采用适宜的菌种保藏技术，以确保用于接种的微生物的传代次数不超过5代]

SuitabilityTests适合性试验.

所使用的培养基须符合下列试验，这些试验应在检验供试产品之前或者同时进行。

STERILITY无菌状态

通过在指定培养温度下将一部分培养基培养14天，来确认每一批已灭菌培养基的无菌状态。

不得出现微生物生长。

GROWTHPROMOTIONTESTOFAEROBES,ANAEROBES,andFUNGI

好氧菌、厌氧菌、霉菌的生长促进试验

检查每一批已经配制好的培养基和每一批用脱水培养基或配料制备的培养基1。

适当微生物菌株见表1。

在部分巯基醋酸盐液体培养基上接种少量（不超过100cfu）下列微生物，每一种微生物均使用单独一部分培养基：

产芽胞梭状芽胞杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌。

在部分替代巯基醋酸盐液体培养基上接种少量（不超过100cfu）产芽胞梭状芽胞杆菌。

在部分大豆-酪蛋白消化物培养基上接种少量（不超过100cfu）下列微生物，每一种微生物均使用单独一部分的培养基：

黑曲霉、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌。

细菌培养时间不超过3天，霉菌培养时间不超过5天。

如果出现清晰可见的微生物生长，则该培养基是适合的。

STORAGE保存

如果配制好的培养基保存于未密闭的容器中，只要在使用时间的2周内对其进行了生长促进试验并且符合颜色指示剂的要求，它们就可以使用1个月。

如果保存在密闭的容器中，只要在使用时间的3个月内对其进行了生长促进试验并且符合颜色指示剂的要求，则该培养基可以使用1年。

用于膜过滤的稀释和冲洗液

FluidA液体A

PREPARATION配制品

将1g动物组织胃蛋白酶消化物溶于1L水中，如果需要则通过滤或离心使其澄清，再调节pH值至7.1±0.2。

分装入容器中，并用经过验证的工艺灭菌。

PREPARATIONFORPENICILLINSORCEPHALOSPORINS

用于青霉素或头孢菌素的配制品

在供试样品溶液已经过滤（见用于青霉素或头孢菌素的培养基）之后，如果需要，向上述配制品中，以无菌操作加入数量足够灭活滤膜上残余抗生素活性的-内酰胺酶。

FluidD液体D

向每升液体A中，加入1mL聚山梨酯80，调节pH值至7.1±0.2，分装入容器中，并使用经过验证的工艺灭菌。

此液体用于含有卵磷脂或油脂的物品，或用于标为“无菌通道”的设备。

FluidK液体K

将5.0g动物组织胃蛋白酶消化物、3.0g牛肉提取物、10.0g聚山梨酯80溶解于1L水中。

调节pH值，以便使pH值在灭菌后呈6.9±0.2。

分装入容器中，并使用经过验证的工艺灭菌。

VALIDATIONTEST验证试验

按照下面供试产品无菌检查项下的描述，使用除了下面变更之外完全相同的方法，进行试验。

MembraneFiltration膜过滤.

在将一个或多个供试容器中的内容物转移到滤膜之后，在最后一次的冲洗液中加入少量（不超过100cfu）试验菌.

DirectInoculation直接接种

在将一个或多个供试容器（对于兽医的肠线和其他外科缝合用线：

若干股线）中的内容物转移至培养基之后，将少量试验菌（不超过100cfu）加入至培养基中。

 在这两种情况中，均按照上述好氧菌、厌氧菌、霉菌生长促进试验项下的描述，使用同样的微生物。

进行一个生长促进试验作为阳性对照。

培养所有含有培养基的容器，培养时间不超过5天。

如果在培养后得到清晰可见的微生物生长，看起来与没有产品的对照容器中的生长类似，则该产品在此试验条件下没有任何抗微生物活性，或者此活性已经被令人满意地消除了。

然后，无菌试验可以进行，而无需进一步的变更。

如果用肉眼与没有产品的对照容器比较，无法在存在供试产品的情况下得到清晰可见的生长，则该产品在试验条件下所具有的抗微生物活性尚未令人满意地消除。

变更条件以便消除抗微生物活性，并重复验证试验。

当（a）一个新产品必须进行无菌试验时，和（b）无论何时该试验的试验条件发生改变时，则需进行此验证试验。

该验证可以与供试产品的无菌试验同时进行。

TESTFORSTERILITYOFTHEPRODUCTTOBEEXAMINED

供试产品的无菌检查

NumberofArticlestoBeTested供试物品数量

除非在此章节的其他位置或在具体的各论中另有规定，供试物品的数量遵照表3中的规定。

如果每个物品的内容物有足够数量（见表2），可以将其分成若干等份，将适当的等份加入到每个指定的培养基。

[注意：

使用两个或更多指定培养基，来进行无菌试验。

]如果每个物品内容物的数量不够每个培养基的用量，使用表3中所规定物品数量的2倍。

Table2.MinimumQuantitytobeUsedforEachMedium

表2：

用于每个培养基的最小数量

QuantityperContainer

每个容器中的数量

MinimumQuantitytobeUsed

（unlessotherwisejustifiedandauthorized）

最小使用数量（除非另有依据和授权）

Liquids（otherthananitbiotics）

液体（除了抗生素）

Lessthan1mL

少于1mL

Thewholecontentsofeachcontainer

每个容器的总内容物

1–40mL

Halfthecontentsofeachcontainer,butnotlessthan1mL

每个容器中内容物的一半，但不得少于1mL

Greaterthan40mL,andnotgreaterthan100mL

大于40mL，但不大于100mL

20mL

Greaterthan100mL

大于100mL

10%ofthecontentsofthecontainer,butnotlessthan20mL

该容器内容物的10%，但不得少于20mL

Antibioticliquids

抗生素液体

1mL

Otherpreparationssolubleinwaterorinisopropylmyristate

溶于水或豆蔻酸异丙酯的其他配制品

Thewholecontentsofeachcontainertoprovidenotlessthan200mg

每个容器的全部内容物，以提供不少于200mg

Insolublepreparations,creams,andointmentstobesuspendedoremulsified

待悬浮或乳化的不溶性配制品、乳膏、油膏

Usethecontentsofeachcontainertoprovidenotlessthan200mg

使用每个容器的内容物，以提供不少于200mg

Solids固体

Lessthan50mg

少于50mg

Thewholecontentsofeachcontainer

每个容器的全部内容物

50mgormore,butlessthan300mg

50mg或者更多，但少于300mg

Halfthecontentsofeachcontainer,butnotlessthan50mg

每个容器内容物的一半，但不少于50mg

300mg–5g

150mg

Greaterthan5g多于5g

500mg

Devices设备

Catgutandothersurgicalsuturesforveterinaryuse

兽医用肠线和其他外科缝合线

3sectionsofastrand（each30-cmlong）

一股线的3部分（每个30cm长）

Surgicaldressing/cotton/gauze（inpackages）

外科敷料/棉花/纱布（在包装中）

100mgperpackage

100mg每包装

Suturesandotherindividuallypackagedsingle-usematerial

缝合线合其他单个包装的一次性使用物料

Thewholedevice

整个设备

Othermedicaldevices

其他医用设备

Thewholedevice,cutintopiecesordisassembled

整个设备，切成片或拆开

Table3.MinimumNumberofArticlestobeTestedinRelationtotheNumberofArticlesintheBatch表3：

与物品批量相关的最小供试物品数量

NumberofItemsintheBatch

该批物品的数量

MinimumNumberofItemstobeTestedforEachMedium

（unlessotherwisejustifiedandauthorized）*

每个培养基中的最小供试物品数量（除非另有依据或授权）

Parenteralpreparations

注射用药的配制品

Notmorethan100containers

不多于100个容器

10%or4containers,whicheveristhegreater

10%或4个容器，选较多者

Morethan100butnotmorethan500containers

多于100个但不多于500个容器

10containers

10个容器

Morethan500containers

多于500个容器

2%or20containers,whicheverisless

2%或者20容器，选较少者

Forlarge-volumeparenterals

对于大体积注射用药制剂

2%or10containers,whicheverisless

2%或者10容器，选较少者

Antibioticsolids固体抗生物

Pharmacybulkpackages（<5g）

药房散装（<5g）

20containers

20个容器

Pharmacybulkpackages（5g）

药房散装（5g）

6containers

6个容器

Bulksandblends

散装并混合

SeeBulksolidproducts

见散装固体产品

Ophthalmicandothernoninjectablepreparations

眼科和其他非注射配制品

Notmorethan200containers

不多于200个容器

5%or2containers,whicheveristhegreater

5%或者2个容器，选较多者

Morethan200containers

多于200个容器

10containers

10个容器

Iftheproductispresentedintheformofsingle-dosecontainers,apply

theschemeshownaboveforpreparationsforparenteraluse.

如果该产品存在于单一剂量容器中，应用上述用于注射用药配制品的方案

Devices设备

Catgutandothersurgicalsuturesforveterinaryuse

兽医用肠线和其他外科缝合线

2%or5packages,whicheveristhegreater,

uptoamaximumtotalof20packages

2%或5个包装，选较多者，最多可达20个包装

Notmorethan100articles

不多于100个物品

10%or4articles,whicheverisgreater

10%或4个物品，选较多者

Morethan100,butnotmorethan500articles

多于100但不多于500个物品

10articles

10个物品

Morethan500articles

多于500个物品

2%or20articles,whicheverisless

2%或20个物品，选较少者

Bulksolidproducts

散装固体产品

Upto4containers

最多4个容器

Eachcontainer

每个容器

Morethan4containers,butnotmorethan50containers

多于4个容器，但不多于50个容器

20%or4containers,whicheverisgreater

20%或4个容器，选较多者

Morethan50containers

超过50个容器

2%or10containers,whicheverisgreater

2%或者10个容器，选较多者

* Ifthecontentsofonecontainerareenoughtoinoculatethetwomedia,thiscolumngivesthenumberofcontainersneededforboththemediatogether.

如果一个容器的内容物足够接种2个培养基，则此表格给出的容器数量为用于全部2个培养基的数量。