中药制剂分析期末重点复习归纳.docx

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中药制剂分析期末重点复习归纳

考试题型及分值：

①填空题1x10

②单选题1x20

③配伍题1x5x2

④多选题2x10

⑤对下列方法的画线部分做出解释（变相问答题）3题（共20）

⑥计算题3题（共20）：

一题必为杂质限量

第一章绪论

☆中药制剂分析的主要内容（了解）：

①中药制剂的鉴别

②中药制剂的检查

③中药制剂的含量测定

★掌握中药制剂分析工作的基本程序、取样的要求和基本原则

中药制剂分析检验的程序一般可分为取样、供试品溶液的制备、供试品溶液的测定（鉴别、检查或含量测定）、书写检验报告等【1】。

取样的要求：

取样必须符合科学性、真实性和代表性的要求；

取样的基本原则：

均匀合理，所取样品具代表性；

★我国现行的质量标准是什么？

《中华人民共和国药典》和局（部）颁标准，二者军事由国家药典委员会负责制定和修订，国家食品药品监督管理局颁布实施。

★药典包括哪几个部分？

各个部分相应解释的内容是什么？

①凡例②正文③附录④索引

现行版药典为2015年版，分成四部。

一部收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂等

二部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品以及药用辅料等

三部收载生物制品四部为总则

凡例：

是解释和正确使用《中国药典》进行质量检验的基本指导原则，对一些与标准有关的、共性的、需要明确问题以及采用的计量单位、符号、术语等，用条文加以规定，以帮助理解和掌握药典正文并避免在文中重复。

正文：

为药典的主体，包括所收载的全部药材和制剂品种的质量标准。

附录：

收载本版药典的制剂通则，药材和饮片检定通用法，物理常数测定法，通用法，专项测定法，生物检定法，试药试液、缓冲液、指示剂与指示液、滴定液以及对照品与对照药材，中药质量标准分析方法验证指导原则，中药注射剂安全性检查法应用指导原则，中药生物活性测定指导原则，抑菌剂效力检查法指导原则等项内容。

★凡例中需要特殊记忆的知识点

①常温系指10-30℃，乙醇未标明浓度时，均系指95%（ML/ML）

②取样量的精确度：

称取“0.1g”系指称取量可为0.06-0.14g；

称取“2g”，系指称取量可为1.5-2.5g；

称取“2.0g”系指称取量可为1.95-2.05g；

称取“2.00g”，系指称取量可为“1.995-2.005g”.

③精密称定：

系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。

④称定：

系指称取重量应准确至所取重量的百分之一。

⑤取用量用“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的±10%

⑥恒重：

除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。

☆外国药典：

（1）美国药典（USP）

（2）英国药典（BP）（3）欧洲药典（EP）（4）日本药典（JP）

第三章中药制剂的鉴别

★中药制剂的鉴别的内容包括？

性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和生物鉴别等。

★显微鉴别的概念、所针对的鉴别对象

显微鉴别：

是指显微镜对中药制剂中含中药饮片粉末组织、细胞或内含物等生物学特征进行鉴别的一种方法。

显微鉴别的适用对象：

中药制剂中含有中药饮片粉末，成品中仍保留有原药材某些细胞、组织等显微特征，可以采用显微鉴别法进行鉴别。

★牛黄解毒丸的显微鉴别中各位药材的鉴别现象p49

【处方】牛黄、雄黄、石膏、大黄、桔梗、冰片、甘草

【制法】以上七味，粉碎，过筛，混匀。

加炼蜜与水制成水蜜丸，或加炼蜜制成小或大蜜丸

取本品，按蜜丸制片要求制样、装片，置显微镜下观察：

①纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细（黄芩纤维）；

②纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维（甘草晶纤维）；

③草酸钙簇晶大，直径60-140μm（大黄草酸钙簇晶）；

④联结乳管直径14-25μm，含淡黄色颗粒状物（桔梗乳管细胞）；

⑤不规则碎块，金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄粉末）；

⑥不规则片状结晶无色，有平直纹理（冰片结晶）。

★理化鉴别中化学反应法：

牛黄解毒片中冰片的鉴别方法p50

【处方】牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片和甘草制成。

取本品1片，研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新制成1%香草醛的硫酸溶液1~2滴，液滴边缘呈玫瑰红色。

现象：

先得白色升华物后，继得黄色升华物。

将升华物分别置显微镜下观察；白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的1%香醛硫酸溶液，渐显紫红色；黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。

★薄层色谱法是最常见最主要的一个方法

★薄层色谱法的定义，掌握影响薄层鉴别法的主要因素、掌握减少边缘效应的方法、对照物的选择具体有哪些？

薄层色谱法（TLC）：

是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，形成一均匀薄层，样品经过点样、展开后，根据薄层上样品斑点比移值（Rf值）与适宜对照物比较，对中药制剂进行鉴别的方法。

影响薄层色谱鉴别的主要因素：

（1）供试品的制备【2】

（2）薄层板的选择：

TLC常用的固定相有硅胶G.

（3）展开剂的选择：

理想的分离应使样品成分的斑点清晰地分部在Rf值0.2-0.8之间

（4）展开剂蒸气的饱和：

减少边缘效应的方法主要有三种：

①选择较小体积的层析缸

②在层析缸内壁贴上浸有展开剂的滤纸条

③将点样薄层板在层析缸内预饱和15-30min

（5）对照物的选择：

薄层色谱鉴别需要用标准物质作对照。

常用的标准物质：

中药标准对照品（中药化学对照品）、中药对照药材、中药对照提取物

（6）湿度和温度：

在相对湿度恒定的条件下，一般在环境温度很高时，斑点Rf值增大，反之，减小。

展开温度在温差±5℃，Rf值的变动一般不超过±0.02，对结果影响不大。

★阴性对照实验的目的

通常为了考察制剂中其他药味对鉴定药味薄层色谱的干扰情况，在研究色谱试验条件时，应做阴性对照。

第四章中药制剂检查

★掌握杂质的来源、杂质的种类

杂质的来源：

①原料中引入的杂质②生产过程中介入的杂质③贮藏过程中产生的杂质

杂质的种类：

（按杂质来源分）

·一般杂质：

在自然界中分布比较广泛，在多种中药原料的采集、收购、加工以及制剂的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、重金属、砷盐、铁盐、氯化物、硫酸盐等。

一般杂质的检查方法收载在药典附录中。

·特殊杂质：

是指因某一中药制剂的原料、生产和贮藏过程中可能引入的杂质，特殊杂质检查方法在药典中列入该制剂的检查项下。

（按检查方法分）

·常规物质检查：

在中药的采集、收购、加工以及制剂的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，这些杂质在自然界中分布比较广泛，如水分、氯化物、铁盐、灰分、酸败度等检查。

这些杂质虽然一般无毒，但其含量的多少可反映出药物纯度的情况，对生产工艺和生产质量控制有预警作用。

检查方法收载在药典附录中。

·有害物质检查：

中药制剂中存在的、能引起明显不良生物作用的杂质，如铬、汞、砷、黄曲霉素等检查，按来源、有害物质检查又可分为药物中本身含有的内源性杂质检查和从外界环境中引入的外源性杂质检查。

★掌握杂质限量的概念、计算方式【3】、表示方式

杂质限量：

药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几来表示。

计算公式：

×100%

允许杂质存在的最大量

杂质限量（L）=供试品量

一般以一定的标准溶液的供试品（S）进行比较，公式可以写成：

×100%

标准溶液的体积（V）*标准溶液的浓度（c）

杂质限量（L）=供试品质量（ms）

即：

L=

★常规物质检查包括哪些？

外源性有害物质检查有哪些？

常规杂质检查包括：

氯化物检查、铁盐检查、干燥失重测定法、水分测定法、炽灼残渣检查法、灰分测定法、膨胀度测定法、酸败度测定法、注射剂有关物质检查法

外源性有害物质检查：

重金属检查、砷盐检查、铅、镉、砷、汞、铜测定法、农药残留量的检查、黄曲霉毒素测定法

★重金属的概念、检查原理

重金属：

是指在规定的实验条件下，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色（生成不溶性硫化物）的金属杂质。

重金属检查的原理：

在弱酸性（pH3~3.5）条件下，硫代乙酰胺发生水解，产生硫化氢，可与重金属离子生成有黑色硫化物的均匀混悬液。

在碱性条件下，硫化钠直接与重金属离子作用，生成不溶性的有色硫化物。

Pb2++S2-————→PbS↓（黑色）

与一定量标准铅溶液在相同条件下处理后产生的颜色进行比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定。

★掌握重金属检查的两种方法、反应条件、供试液有颜色时的处理方法、炽灼法进行有机破坏的原因

（1）第一法硫代乙酰胺法

CH2CSNH2+H2O——→CH3CONH2+H2S↑

适用对象：

（ppt）溶于水、稀酸和乙醇的药物。

（课本）供试品可不经有机破坏，在酸性溶液中显色的药物中重金属限量检查

·在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺作为显色剂。

·硫代乙酰胺在弱酸性条件下（PH3~3.5的醋酸缓冲液）水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较。

·硫化钠试液，在酸性溶液中易分解析出硫，引起浑浊而影响比色。

（2）第二法炽灼后硫代乙酰胺法

适用对象：

（ppt）含芳环或杂环的有机药物。

（课本）供试品需炽灼破坏，在酸性溶液中显色的药物中重金属限量检查。

·中药及中药制剂多含有机成分，若含芳环或杂环，则中药材及中药制剂中的重金属常与有机物结合存在，不能用直接取样检查。

·需先行炽灼破坏、消化、分解后，使与有机物分子结合的重金属游离，再用硫代乙酰胺在弱酸性条件下进行检查。

·注意：

炽灼的温度控制在500~600℃，使完全灰化，避免重金属损失。

温度愈高，重金属损失愈多。

·为了使有机物分解破坏完全，炽灼的残渣需加硝酸加热处理，但必须蒸干除净氢化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。

（3）反应条件：

硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH是3.5，故配置乙酸盐缓冲液（pH3.5）时，要用pH计调节。

硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2min。

（4）供试液有颜色时的处理方法：

可在甲管与丙管中滴加少量的稀焦糖溶液（取蔗糖或葡萄糖约5g，置瓷蒸发皿或瓷坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈成棕黄色糊状，放冷，用水溶解成约25mL，贮于滴瓶中备用。

）或其他无干扰的有色溶液（如酸酯指示剂），使之均与乙管一致；再在甲乙丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2min，同置白色背景上，自上向下透视比较颜色深浅。

（5）炽灼法进行有机破坏的原因：

因中药制剂中的重金属可能与其他芳环或杂环成分形成较牢固的共价键，故供试品需先行炽灼破坏，使重金属游离。

★砷盐检查掌握古蔡法的原理，加入碘化钾、氯化亚锡、醋酸铅棉花的作用

（1）古蔡氏法原理：

·本法系利用锌和酸作用产生新生态的氢，与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，遇溴化汞和氯化汞试纸作用生成黄色至棕黄色的砷斑。

·与一定量标准砷溶液在同一条件下所显砷斑的颜色的深浅比较，以判断供试品的含砷盐的限量。

反应式如下：

Zn+2Hcl——→Zncl2+H2↑

AsO33-+3Zn+9H+——→AsH3↑+3Zn2++3H2O

AsO43-+4Zn+11H+——→AsH3↑+4Zn2++4H2O

产生的砷化氢与溴化汞试纸作用

AsH3+3HgBr2——→3HBr+As（HgBr）3（黄色）

2As（HgBr）3+AsH3——→3AsH（HgBr）2（棕色）

As（HgBr）3+AsH3——→3HBr+As2Hg3（黑色）

五价砷在酸性溶液中也能被还原为砷化氢，但生成砷化氢三价砷慢，影响结果的准确性。

故在反应液中加入碘化钾、酸性氯化亚锡还原剂，将五价砷还原为三价砷。

AsO43-+2I-+2H+——→AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+——→AsO33-+Sn4++H2O

I2+SnCl2+2HCl——→2HI+SnCl4

溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成络合物，使生成砷化氢的反应不断进行。

4I-+Zn2+——→ZnI42-

氯化亚锡与碘化钾存在，还可抑制锑化氢生成。

100μg锑存在不致干扰测定。

同时氯化亚锡又可与锌作用。

在锌粒表面形成锌锡齐（锌锡的合金）。

Sn2++Zn——→Sn+Zn2+

1锌粒

·金属锌和酸作用产生新生态的氢，与药品中微量砷盐化合物反应，生成具挥发性的砷化氢。

·所用锌粒应无砷，以能通过一号筛的锌粒为宜，如使用的锌粒较大时，用量得酌情增加，反应时间应增长至1小时。

2碘化钾：

A．可将五价砷还原为三价砷

B．碘化钾被氧化成I2，又可以被氯化亚锡还原为碘离子，使反应液中维持有碘化钾存在。

C．溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成络合物，使生成砷化氢的反应不断进行。

D．碘化钾存在，还可抑制锑化氢的生成，因为锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。

3酸性氯化亚锡

A.可将五价砷还原为三价砷

B.碘化钾被氧化成I2，又可以被氯化亚锡还原为碘离子，使反应液中维持有碘化钾还原剂存在。

C.溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成络合物，使生成砷化氢的反应不断进行。

D.氯化亚锡的存在，还可抑制锑化氢的生成，因为锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。

E.氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐（锌锡的合金）起去极化作用，使锌粒与盐酸作用缓和，放出氢气均匀，使产生的砷化氢气体连续均匀。

有利于砷斑的形成。

4醋酸铅棉花：

·试剂或锌粒中若含有S2-或供试品中若含有S2-、SO42-、S2O32-等离子时，在酸性条件下可生成硫化氢，也能使溴化汞试纸染色（硫化汞），干扰试验结果。

·用醋酸铅棉花，使硫化氢生成硫化铅除去。

H2S+Pb（CH3COO）2——→PbS↓+2CH3COOH

a.应控制醋酸铅棉花的松紧度，既可以使砷化氢气体以适宜的速度通过，又能吸收硫化氢气体，应成均匀成疏松状。

b.在砷管内置干燥醋酸铅棉花时，应先将棉花撕成疏松薄片状，每次小量以细玻璃棒轻轻塞入测砷管，装置高度约60~80mm，上端距管口至少3cm，勿塞入测砷管得近上端，避免醋酸铅棉花吸水。

c.醋酸铅棉花应保持干燥状态，如果打湿，重新操作。

★农药残留量的检查：

有机氯类和有机磷类用什么方法检查、检测器

①有机氯类农药残留量检查：

采用气相色谱法测定，用电子捕获检测器（ECD）

②有机磷类农药残留量检查：

采用气相色谱法测定，用火焰光度检测器（FPD），氮磷检测器（NPD）或质谱检测器（MSD）

第5章★中药制剂含量测定

★紫外-可见分光光度法测定方法的概念和优缺点，吸光度范围，计算。

一般供试品溶液的吸光读数，以在0.3~0.7之间的误差较小。

①对照品比较法【4】：

在同样条件下配制对照品溶液和供试品溶液，在规定波长下测定二者的吸光度，则可计算出供试品中被测成分的浓度或含量。

②吸收系数法：

该法是测定供试品溶液在规定波长处的吸光度A，根据被测成分的吸收系数（E1%1cm）计算其含量。

本法优点是无需对照品，方法简便，但使用时吸收系数通常应大于100，并应注意仪器的校正和检定。

③标准曲线法：

先配置一系列不同浓度的对照品溶液，在相同条件下分别测定吸收度，绘制A-C曲线或求出其回归直线方程，即得标准曲线。

在相同条件下测定供试品溶液的吸光度即可求得供试品中被测成分的浓度或含量。

使用时应注意：

1.标准系列一般要求5-7个点

2.回归直线方程的相关系数（r）不得小于0.999

3.供试品溶液的吸光度应在标准曲线的线性范围

★薄层色谱扫描法测定方法，采用随行标准法的目的。

测定方法有内标法和外标法，以外标法最常用，包括外标一点法和外标二点法。

采用随行标准法的目的：

为了克服薄层板间差异较大的问题

考察标准曲线是否过原点，以便采用外标一点法和外标二点法定量，通过原点的用外标一点法，不通过原点的则用外标二点法。

★外标二点法的计算

至少需要点二种不同浓度或一种浓度两点样量的对照品溶液，与供试液同板展开，分别测定峰面积积分值A，用对照品求出直线方程：

A=Km+B

★气相色谱适用范围、组成、系统的适用性试验（必考）指标和具体要求

主要用于测定制剂中挥发油及其他挥发性组分的含量

组成：

由载气源、进样系统、色谱柱、柱温箱、检测器和温度控制系统及数据处理系统或色谱工作站组成。

系统适用性试验：

①色谱柱的理论塔板数

②分离度：

R≥1.5

③重复性：

RSD≤2.0%

④拖尾因子：

T：

0.95-1.05

★内标法的计算p117

★高效液相色普法液相仪器的组成、流动相的洗脱方式、固定相的极性、检测器的使用范围

仪器构造：

储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

流动相的洗脱方式有：

等度洗脱和梯度洗脱

正相色谱柱：

硅胶吸附色谱柱

反向色谱柱：

固定相：

常用非极性十八烷基键合硅胶（ODS），流动相：

水

固定相极性<流动相极性

检测器：

①紫外检测器（UV或UVD）：

是应用最普遍的检测器，灵敏度高，噪声低

②荧光检测器（FD）：

只适用于能产生荧光或其衍生物能发生荧光的物质

③蒸发光散射检测器（ELSD）：

可用于检测挥发性低于流动相的任何样品组分，但主要用于检测糖类、高分子化合物、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、三酰甘油及甾体等各类化合物。

对有紫外吸收的样品组分检测灵敏度比UVD低，且要求流动相具有挥发性，不能含缓冲盐。

④电化学检测器（ECD）：

用于检测能氧化、还原的有机物质

⑤示差折光检测器（BID）：

检测器对多数物质灵敏度低，尤其适合于糖类的检测。

★方法学验证中专属性、精密度的概念，其中精密度包括哪些？

专属性：

系指在其他成分可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测成分的特性。

精密度：

系指用于相同方法对同一供试品进行多次测定，各测量值彼此接近的程度。

精密度包括：

重复性、中间精密度和重现性

★准确度的概念，准确度用回收率表示，回收率的要求？

准确度：

系指测定结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

中药制剂含量测定的回收率一般要求在95%-105%，回收率的RSD一般应该3%以内。

★掌握线性与范围概念、检测限和定量限的概念

线性：

系指在设计的范围内，测定结果与供试品中待测组分浓度或质量呈正比关系的程度。

线性范围：

系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用高低限浓度或高低量的区间。

范围应为限度的±20%

检测限：

系指供试品中被测物质成分能被检出的最低量。

定量限：

指供试品中待测成分能被定量测定的最低量。

★耐用性的概念、不同色谱法中典型变动因素

耐用性：

系指在测定条件下有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。

典型变动因素有：

被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。

液相色谱法中典型变动因素有：

流动相的组成比例或pH、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速及检测波长等。

气相色谱法变动因素有：

不同厂牌或不同批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。

薄层色谱的变动因素有：

不同厂牌的薄层板、点样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化等。

第7章中药制剂中各类化学成分分析

★生物碱类成分分析中理化性质中的溶解性、碱性、特殊沉淀反应

（1）溶解性：

一般来讲游离态生物碱极性较小，易溶于三氯甲烷、乙醚、丙酮及乙醇等有机溶剂，难溶于水；当生物碱与酸结合成盐时水溶性增加，且生物碱盐的水溶度与结合的酸有关；含有羧基、酚羟基的两性生物碱或含有酯键的生物碱还可溶于苛性碱溶液；季铵碱类等亲水性生物碱可溶于水、醇类溶剂中。

（2）碱性：

生物碱的碱性大小通常用PKa的大小来表示，PKa越大，碱性越强。

生物碱分子中碱性基团的pKa值大小顺序一般是：

季铵碱＞N-烷杂环＞脂肪胺＞芳香胺≈N-芳杂环＞酰胺≈吡咯

生物碱碱性大小与生物碱分子结构的氮原子的杂化方式、电子云密度、空间效应及分子内氢键形成等有关。

（3）沉淀反应：

是生物碱在酸性水溶液或酸性稀醇液溶液中与生物碱沉淀试剂生成不溶于水的复盐或络合物。

常用的生物碱沉淀试剂有：

碘-碘化钾、碘化铋钾、碘化汞钾、磷钼酸、磷钨酸、

苦味酸（三硝基间苯三酚）、硫氰酸铬酸（雷氏铵盐）

利用生物碱沉淀反应鉴别生物碱时，应注意假阴性和假阳性反应的干扰。

麻黄碱与生物碱沉淀试剂反应呈阴性；

蛋白质、粘液质、鞣质等水溶性杂质成分，与生物碱沉淀试剂反应呈假阳性

★定性鉴别的常用方法、主要方法

常用定性鉴别方法有沉淀法、薄层色谱法、气相色谱法及高效液相色普法。

其中沉淀法和薄层色谱法为《中国药典》目前收载的主要方法。

★色谱法中用到的硅胶吸附剂、拖尾现象如何改进、显色剂、特殊显色剂

吸附剂：

由于硅胶显弱酸性，强碱性生物碱在硅胶色谱板上形成盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。

改进措施：

在展开剂中加入少量碱性试剂，如氨水、乙二胺等；制硅胶板时加入稀碱水溶液，配CMC-Na时，用NaOH水溶液代替水。

（在硅胶吸附薄层色谱中，常用碱性展开系统或在碱性环境下进行）

显色剂：

常用改良碘化铋钾试剂，大多数生物碱显色后呈橘红色。

有时喷碘化铋钾试剂后再喷硝酸钠试剂，可使供试品斑点颜色更明显易于观察。

某些生物碱有特殊颜色反应，也可用于鉴别，如麻黄碱是与茚三酮试剂反应呈红色

★含量测定方法的分类、掌握酸性染料比色法的原理及关键、掌握高效液相色普法克服游离硅醇基影响的措施

（1）含量测定方法的分类：

①总生物碱：

化学分析法（包括重量分析法和滴定分析法）

分光光度法：

直接测定法、

离子对萃取比色法（酸性染料比色法、雷氏盐比色法、苦味酸盐比色法、异羟肟铁比色法）

②单体生物碱：

薄层扫描法、高效液相色谱法（液-液分配色谱法、液-固吸附色谱法及离子交换色谱法）、气相色谱法

（2）酸性染料比色法的原理及关键：

酸性染料比色法原理：

在适当的PH介质中，生物碱B可与氢离子（H+）结合成盐，成为阳离子BH+，而酸性染料在此条件下解离为阴离子In-,生物碱盐的阳离子与染料阴离子定量地结合成有色的络合物（即离子对）

影响因素：

关键在于介质的PH、酸性染料的种类和有机溶剂的选择，其中尤以PH的选择更重要。

一般一元生物碱与溴麝香草酚蓝形成1:

1的离子对，此时pH最好在5.2~6.4之间；

二元碱则行测1:

2的离子对，此时pH最好较低一些，在3.0~5.8之间较宜。

（3）高效液相色谱法克服游离硅醇基影响的措施：

1.改进流动相：

①在流动相中加入硅醇基抑制剂（或称改性剂），竞争或部分阻断硅醇基的影响

最常用的硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA）等。

②在合适的pH下，流动相中加入低浓度离子对试剂，可通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团，

使之不会与固定相表面的硅醇基作用

常用离子对试剂：

辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠，系统偏酸性。

③在流动相中加入季铵盐试剂，能在较短的保留时间内得到很好的分离，色谱峰重现性好，也不拖尾，而且

水-甲醇比例的改变以及pH的变化都不影响峰的对称性。

④在流动相中加入一定浓度的电解质缓冲盐，通过改变流动相离子强度，稳定pH及促进离子对相互作用，而

起到改善峰形及分离效果的作用。

2.改进固定相：

封尾技术可以使填料的键合更彻底。

一般是在键合反应结束后，用三甲基氯硅烷（TMCS）等进行后续处理，尽量减少参与羟基，增加单体覆盖度。

1.黄铜类成分分析中的溶解度、酸碱性、显色

（1）溶解性：

游离黄铜一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。

分