人参提取物技术要求编制说明11261.docx
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人参提取物技术要求编制说明11261
人参提取物技术要求编制说明
本技术要求根据《中华人民共和国标准化法》、《中华人民共和国食品安全法》、《保健食品管理办法》、GB16740-1997保健（功能）食品通用标准及《中国药典》等法规制定，形式体例上严格遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：
标准的结构和编写》给出的规则起草。
（一）概况
人参（PanaxginsengC.A.Mey.）为五加科植物。
作为传统常用药材，具有数千年的历史，在世界各国广泛应用。
人参大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神。
2002年卫生部《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》（卫法监发【2002】51号）把人参列入可用于保健食品原料的名单，人参正式作为保健食品原料。
人参提取物在市场上有多种规格，含总皂苷10%～85%，只是生产企业根据客户需要进行生产，其生产工艺差异较大，经大孔吸附树脂纯化制得的人参提取物纯度较高，主要用于药品，而在保健食品中多数使用的是经70%乙醇提取，浓缩，干燥制得的人参提取物，因此本技术要求即以该工艺下生产的产品进行研究。
由于目前广泛应用于保健食品的人参提取物，只是生产企业根据客户需要建立的内控标准，现无法定检验标准来统一控制其内在质量。
为此，此次从安全性检查项目、有效性检测项目等方面进行研究与考察，建立保健食品原料人参提取物技术要求。
1.建立安全性检查项目：
有害元素和农药残留的测定方法和限度。
采用国标5009系列标准规定的方法测定，分别进行方法学考察、样品测定。
其限度参考相关食品及药品标准限度规定予以确定。
2.溶剂残留量检查
按照人参提取物制法，未使用大孔吸附树脂，但在调研中了解到有的生产企业为除农残，有使用大孔吸附树脂及其他溶剂的可能，因此，为确保提取物使用安全，参照《中国药典》（2005年版二部）残留溶剂测定法（附录ⅧP第二法），对大孔吸附树脂中残留物正己烷、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基苯，采用顶空气相色谱法进行检测，并进行了方法学研究。
实际测定结果，均未检出各种溶剂残留物。
因此，未在技术要求中列入溶剂残留物检测项目。
3．标志性成分检测
人参提取物中主要有效成分为人参皂苷类成分，其中人参主要皂苷为Rg1,Re,Rf,Rb1,Rc,Rb2,Rd等。
为有效控制人参提取物内在质量，确保提取物原料质量的稳定性及可控性，分别
（1）采用紫外-可见分光光度法测定人参提取物中人参总皂苷的含量；
（2）采用高效液相色谱法测定人参提取物中所含八种有效成分-人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd和人参皂苷Rf含量。
并对上述两种方法进行比较，确定第二种方法即可控制保健食品原料人参提取物的内在质量，因此，在技术要求中只采用一种方法。
此外，通过调研了解，由于人参茎叶提取物成本较人参提取物低，市场上有以人参茎叶提取物替代人参提取物的现象。
为此，我们查阅了相关文献报道，并对人参茎叶提取物和人参提取物各成分差异进行了分析，人参茎叶中人参皂苷Re含量明显高于人参，为防止以人参茎叶提取物代替人参提取物，在技术要求中对人参皂苷Re含量单独控制。
4．一般检查项目
在技术要求中设立以下检查项目：
（1）感官要求（色泽、滋气味、性状、杂质）
（2）鉴别
（3）理化指标（水分、灰分）
（4）微生物指标（菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）。
5.特征图谱研究
为减少含量测定项目（测定八种人参皂苷含量）使用对照品种类，降低检验成本，对特征图谱测定方法进行了研究。
实验结果表明，由于特征图谱受色谱柱品牌、长短、粒径等不同因素的影响，在实际操作中难以通过计算各峰相对保留时间准确判断，重复性较差，因此，未将特征图谱列入本技术要求中，仍采用HPLC法测定八种人参皂苷成分，以控制人参提取物的内在质量，以保证使用提取物的有效性与均一性。
总体看，该项研究工作设立项目较全面，所建立的技术要求可有效控制人参提取物原料内在质量，符合《食品安全法》对保健食品实行严格监管的要求。
（二）技术要求中主要技术指标的确定依据
1、名称
本品系用五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根及根茎粗粉，经70%乙醇提取，浓缩，干燥，既得，故本品名称为人参提取物。
2．感官指标
根据产品的生产要求，结合产品的实际情况进行描述，能直观得体现产品的外在质量。
经对23批人参提取物样品实际观察，样品多为淡棕色至棕色细粉状，无肉眼可见的杂质具有本品特有的气味，味微苦。
3．理化指标
3.1薄层色谱鉴别
人参所含主要有效成分为皂苷类成分，含人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1以及人参皂苷Rf等。
根据皂苷类成分理化性质及溶解性能，对人参提取物以人参皂苷成分为对照进行薄层色谱鉴别方法研究，经对不同展开条件进行选择。
结果显示，以《中国药典》（2010年版一部）人参项下的薄层鉴别方法操作，各斑点清晰、分离良好，供试品在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，故将此薄层鉴别列入本技术要求，该方法省时、简便、直观。
12345678910
图1人参提取物薄层色谱鉴别图
1～6-产品1～6,7-人参对照药材，8-人参皂苷Rg1，9-人参皂苷Re，10-人参皂苷Rb1
3.2水分
按照GB5009.3-2010食品中水分的测定方法，对产品进行测定及制定限值。
采用直接干燥法，限值≤10.0%。
23批样品均符合规定。
3.3灰分
食品经灼烧后残留的无机物质为灰分，多为遗留的金属氧化物等杂质。
人参药用部位为根及根茎，带有泥土，如清洗不净，易带入产品中，应予以控制。
按GB5009.4-2010食品中灰分的测定方法，对产品进行测定及制定限值。
取样量2g，限值≤7.0%。
3.4重金属及有害元素
中药中残留的重金属及有害元素问题，已是中药行业十分关注的问题之一。
对于人参提取物这种广泛用于补益类保健食品中的原料，若重金属及有害元素超标，长期服用势必会产生重金属及有害元素的蓄积，危害身体健康。
因此，对重金属及有害元素的控制是十分必要的。
实验采用微波消解前处理方法，参照国标5009系列标准规定的方法测定，对4种元素（铅、砷、汞、镉）分别进行方法学考察、样品测定。
部分样品采用GB5009.12-2010食品中铅的测定方法和GB/T5009.15-2003食品中镉的测定方法第一法与中国药典2010年版一部附录ⅨB铅、镉测定法相比较，其方法不同处为消解液中加入30%过氧化氢2~3ml。
由于本品为提取物均能消解完全，且测出结果基本一致。
因此，可采用中国药典2010年版一部附录ⅨB铅、镉测定法，或GB5009.12-2010食品中铅的测定方法和GB/T5009.15-2003食品中镉的测定方法第一法，对人参提取物进行铅、镉检查。
采用GB/T5009.11食品中总砷及无机砷的测定及GB/T5009.17食品中总汞及有机汞的测定方法，对人参提取物进行砷、汞检查。
选择铅、砷、汞、镉4种重金属及有害元素进行控制，其限量值的参考依据，主要有：
（1）《食品中污染物限量》（中华人民共和国国家标准GB2762-2005）；
（2）《保健（功能）食品通用卫生标准卫监发〖1996〗38号》；
（3）绿色食品人参和西洋参（NY/T1043-2006）（农业行业标准）；
（4）地理标志产品吉林长白山人参（GB/T19506-2009）；
（5）原产地域产品吉林长白山人参（GB19504-2004）；
（6）《中国药典》2010年版人参总皂苷和人参茎叶总皂苷
（7）GB2762食品安全国家标准食品中污染物限量（征求意见稿）
表1保健食品原料人参提取物中重金属及有害元素限值比较表
单位：
mg/kg
铅
砷
汞
镉
原产地域产品吉林长白山人参（GB19504-2004）
5.0
2.0
0.1
0.5
地理标志产品吉林长白山人参（GB/T19506-2009）
5.0
2.0
0.1
0.5
中国药典2010年版人参总皂苷
3.0
2.0
0.2
0.2
中国药典2010年版人参茎叶总皂苷
2.0
2.0
0.2
0.2
食品中污染物限量
（GB2762-2005）
0.2（禽畜肉类）
无机砷：
0.05（禽畜肉类）
总汞：
0.05肉、蛋（去壳）
0.1（禽畜肉类）
食品安全国家标准食品中污染物限量（征求意见稿）（GB2762）
0.2（肉类）
0.5（肉制品）
总砷：
0.05（肉及肉制品）
总汞：
0.05（肉及肉制品）
0.1（肉及肉制品）
绿色食品人参和西洋参
（NY/T1043-2006）
0.5
0.5
0.06
0.2
保健食品通用卫生标准
卫监发〖1996〗38号
一般0.5；一般胶囊产品1.5；以藻类和茶类为原料的固体饮料和胶囊产品2.0
一般0.3；以藻类和茶类为原料的固体饮料和所有胶囊产品1.0
一般产品未规定；以藻类和茶类为原料的固体饮料和所有胶囊产品1.0
/
拟定限值
2.0
0.3
0.1
0.1
样品实测值范围
未检出～0.1
0.03～0.08
0.005～0.01
未检出
3.5溶剂残留量的检测
按照人参提取物制法，未使用大孔吸附树脂，但在调研中了解到有的生产企业为除农残，有使用大孔吸附树脂的可能，因此，为确保人参提取物使用安全，参照《中国药典》（2005年版二部）残留溶剂测定法（附录ⅧP第二法），对大孔吸附树脂中残留物正己烷、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基苯，采用顶空气相色谱法进行检测，并进行了方法学研究。
包括
（1）柱的选择、柱温的选择：
采用确定的程序升温方法进行实验，各色谱峰均能良好分离，且保留时间较短。
（2）提取溶剂的考察：
以40%的二甲基甲酰胺溶液既可使样品在其中良好溶解，又可完全溶解待测残留溶剂，并可提高方法灵敏度。
（3）专属性：
为进一步考察试验的合理性，精密吸取淀粉或糊精0.5g，精密加入40%的二甲基甲酰胺溶液5ml，以确定方法进行检测，结果，无与对照品保留时间相同的色谱峰检出。
（4）检测限和定量限：
逐级稀释对照品溶液，在上述色谱条件下测定各溶剂峰的信噪比，最低检测限（S/N=3）（μg/ml）和最低定量限（S/N=10）（μg/ml），见下表。
表2最低检测限和最低定量限
溶剂
正己烷
丙酮
苯
甲苯
二甲苯
苯乙烯
检出限（μg/ml）
0.26
0.66
0.37
0.70
2.60
8.75
定量限（μg/ml）
0.77
1.97
1.12
2.33
7.80
29.15
（5）线性关系：
以待测物浓度为横坐标，待测物峰面积为纵坐标，分别计算回归方程。
结果表明，7种待测组分在相应的线性范围内线性关系良好。
（6）精密度试验、稳定性试验、重复性试验、回收率试验：
结果表明，确定的方法可行。
样品测定结果及限度：
依确定的方法测定样品，均未检出各种溶剂残留物，结果表明，按照人参提取物生产工艺，未使用上述溶剂，因此，未在技术要求中列入溶剂残留物检测项目。
3.6有机氯农药残留量农药的使用大大减少了食物中存在的昆虫，真菌和霉菌，药用植物中的农药残留是在耕作过程中喷洒农药，改良土壤，在贮藏过程中使用薰蒸剂而积聚起来的。
有机氯类农药是一类高效广谱杀虫剂，广泛用于杀灭农业害虫，曾是各国杀虫剂中使用最广泛的一大类。
由于其残留量高，毒性大，我国已对粮食、果蔬等食品制定了残留限量标准，而有关中药材农药残留的限量标准较少。
由于许多植物性来源的保健食品原料需要长期使用，为了确保使用安全，参照GB/T5009.19-2008食品中有机氯农药多组分残留量的测定及中国药典2010年版一部附录ⅨQ有机氯类农药残留量测定法等相关的要求，对人参提取物有机氯类农药残留限量检查，并进行定量限及随行回收率试验，制定限值。
选择六六六、滴滴涕、五氯硝基苯进行控制，其限量值的参考依据，主要有：
（1）《食品中污染物限量》（中华人民共和国国家标准GB2762-2005）；
（2）《保健（功能）食品通用卫生标准卫监发〖1996〗38号》；
（3）绿色食品人参和西洋参（NY/T1043-2006）（农业行业标准）；
（4）地理标志产品吉林长白山人参（GB/T19506-2009）；
（5）原产地域产品吉林长白山人参（GB19504-2004）；
（6）《中国药典》2010年版人参总皂苷和人参茎叶总皂苷
表3保健食品原料人参提取物中农药残留限量比较表（单位：
mg/kg）
六六六
（mg/kg）
滴滴涕
（mg/kg）
五氯硝基苯
（mg/kg）
原产地域产品吉林长白山人参
（GB19504-2004）
≤0.1
≤0.1
≤0.1
地理标志产品吉林长白山人参
（GB/T19506-2009）
≤0.1
≤0.1
≤0.1
中国药典2010年版
人参总皂苷
≤0.1
≤1.0
≤1.0
中国药典2010年版
人参茎叶总皂苷
≤0.1
≤1.0
≤0.1
食品中农药最大残留量
（GB2763-2005）
0.05～0.2
0.05～0.2
0.01～0.2
绿色食品人参和西洋参
（NY/T1043-2006）
不得检出
（≤0.002）
不得检出
（≤0.01）
不得检出
（≤0.01）
保健食品通用卫生标准
卫监发〖1996〗38号
/
/
/
拟定限值
≤0.05
≤0.05
≤0.1
实际测得结果
0.004～0.015
未检出～0.055
0.001～0.016
3.7微生物指标检验
方法：
GB4789.2-2010食品微生物学检验菌落总数测定
GB4789.3-2010食品微生物学检验大肠菌群计数
GB4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验
GB/T4789.5-2003食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验
GB4789.10-2010食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
GB/T4789.11-2003食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验
GBT4789.15-2010食品微生物学检验霉菌和酵母
限度确定依据：
根据《保健食品通用卫生要求》（1996年7月18日卫监发〖1996〗38号发布）确定人参提取物微生物指标。
表4微生物指标（《保健食品通用卫生要求》）
食 品 种 类
指 标
菌落总数
（cfu/g.mL）
大肠菌群
MPN（100g.mL）
霉菌
（cfu/g.mL）
酵母
（cfu/g.mL）
致病菌
液态食品
蛋白质含量≥1.0%
蛋白质含量＜1.0%
≤1000
≤100
≤40
≤6
≤10
≤10
≤10
≤10
不得检出
不得检出
固体或半固体食品
蛋白质含量≥4.0%
≤30000
≤90
≤25
≤25
不得检出
蛋白质含量＜4.0%
≤1000
≤40
≤25
≤25
不得检出
罐头食品
符合罐头食品商业无菌要求
限度：
菌落总数（cfu/g）≤1000
大肠菌群（MPN/100g）≤40
霉菌（cfu/g）≤25
酵母（cfu/g）≤25
致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）不得检出。
4标志性成分
人参含有多种生理活性成分，主要含皂苷类成分，也是生理活性最显著的物质。
对保健食品原料人参提取物标志性成分的测定方法的研究，采用紫外-可见分光光度法测定人参提取物中人参总皂苷的含量、高效液相色谱法测定人参提取物中所含八种有效成分-人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd和人参皂苷Rf含量。
4.1总皂苷紫外-可见分光光度法的含量测定研究
人参提取物中主要有效成分为人参皂苷类成分，采用紫外-可见分光光度法测定人参提取物中人参总皂苷的含量，试验结果如下：
实验研究
4.1.1仪器、试剂与标准物质
仪器：
VARIAN50BIO紫外分光光度计；
试剂均为分析纯；
人参皂苷Re（中国药品生物制品检定所提供，批号：
110754-200822，供含量测定用，纯度为88.8%）。
4.1.2方法考察与结果
4.1.2.1提取方法
取本品约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理（250w，50kHz）20分钟，放置室温，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml溶解，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液40ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25ml容量瓶中，摇匀，即得。
4.1.2.2显色剂选择
参考
（1）《中华人民共和国国家标准》GB/T119506-2009，加8%香草醛无水乙醇溶液、72%硫酸溶液显色，测定波长为544nm；
（2）《中国药典》2010年版一部人参总皂苷，加1%香草醛高氯酸试液、77%硫酸溶液显色，测定波长为540nm；
（3）《吉林省药品标准》-活力宝胶囊，加5%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸、冰醋酸显色，测定波长为560nm。
比较结果显示：
同一样品溶液，以香草醛、硫酸显色，《中国药典》方法吸收度值高于GB/T119506-2009，更加灵敏。
但实验中加入72~77%硫酸溶液后，产生气泡，影响测定结果，且由于硫酸溶液的粘性，比色皿中易挂壁，影响下一样品的测定。
采用%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸、冰醋酸方法，显色灵敏，显色后测定值稳定，故确定采用此方法测定人参提取物中总皂苷的含量。
4.1.2.3回收率试验：
结果显示,人参总皂苷平均回收率为93.15%，RSD=1.74%（n=6）。
4.1.2.4重复性试验：
6份样品测得总皂苷的含量平均值为10.21%，RSD＝5.48％，n＝6。
试验结果表明，本法的重现性较好。
4.1.2.5线性关系与范围结果表明：
人参皂苷Re在38.93～194.65µg范围内，与吸收度值呈良好的线性关系。
表5标准曲线结果
人参皂苷Re（µg）
38.93
77.86
116.79
155.72
194.65
吸收度值
0.117
0.278
0.425
0.596
0.755
回归方程
Y＝0.0046X-0.0008，γ＝0.9996
93.8438
93.8438
4.1.2.5样品测定及限度确定实验结果显示，人参提取物中人参总皂苷含量在9.56%～13.85%之间，根据实际测得结果，确定本品含总皂苷（以人参皂苷Re计）应为8.0%～15.0%。
表6人参提取物样品测定结果
序号
批号
总皂苷含量（%）
1
090401
12.39
2
090402
12.84
3
090403
12.39
4
090404
11.91
5
090405
12.14
6
090406
10.14
7
090407
10.31
8
090408
10.20
9
090409
10.33
10
090410
12.38
11
090601
9.96
12
090602
9.56
13
低残090419
13.85
14
低残090301
12.39
15
低残100602
13.49
4.2人参皂苷HPLC含量测定方法研究
为确保人参提取物原料质量的稳定性、专属性及可控性，采用高效液相色谱法对人参提取物中所含有效成分-人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rf进行含量测定方法研究。
方法学研究结果显示，该方法灵敏，精密度高，重现性好，结果准确，专属性强，可作为该品种的内在质量控制方法。
试验结果如下：
4.2.1仪器、试剂与标准物质
Agilent1100高效液相色谱仪；VWD紫外检测器；MILLI-PROA纯水处理器。
乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。
人参皂苷Rg1（中国药品生物制品检定所，纯度为97.7%）；
人参皂苷Re（中国药品生物制品检定所，纯度为88.8%）；
人参皂苷Rb1（中国药品生物制品检定所，纯度为92.6%）；
人参皂苷Rb2（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；
人参皂苷Rb3（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；
人参皂苷Rc（四川省维克奇生物科技有限公司，供含量测定用）；
人参皂苷Rd（四川省维克奇生物科技有限公司，供含量测定用）；
人参皂苷Rf（中国药品生物制品检定所，供鉴别用）；经归一化法测定此对照品的纯度为93.58%。
4.2.2方法选择及方法学研究
参考《中国药典》2010年版一部人参茎叶总皂苷和人参中多种人参皂甙含量的测定液相色谱-紫外检测法（GB/T22996-2008），采用高效液相色谱法进行测定。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水为流动相，梯度洗脱；检测波长为203nm。
进样量5μl，柱温40℃，流速0.8ml/min。
色谱参考条件：
检测波长：
203nm；柱温：
35℃。
（1）色谱柱：
C18，2.6μm,50mm×4.6mm。
流动相：
乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；
时间（分钟）
流动相（A%）
流动相（B%）
0～15
15～20
20～35
35～40
17→19
19→30
30→33
33→17
83→81
81→70
70→67
67→83
（2）色谱柱：
C18，5μm，250mm×4.6mm。
流动相：
乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；
时间（分钟）
流动相（A%）
流动相（B%）
0～40
40～50
50～70
70～100
100～110
18→18
18→22
22→28
28→38
38→18
82→82
82→78
78→72
72→62
62→82
4.2.3提取方法
取本品约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理（250w，50kHz）30分钟，放置室温，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml溶解，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液40ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25ml容量瓶中，摇匀，即得。
4.2.4耐用性试验：
分别试验三个不同品牌的C18色谱柱进样，测定。
结果显示，均能将样品中各成分很好分离，以色谱柱Kinetex-C18（2.6μm,4.6mm×50mm））且出峰时间短，故选择此色谱柱进行方法学研究实验。
4.2.5回收率试验：
实验结果表明，本方法准确性良好。
表7回收率试验结果
成分
回收率%
RSD%（n=6）
人参皂苷Rg1
99.15
0.75
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