本科毕业设计kibra和apkc在中枢神经系统发育中的表达及意义.docx
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本科毕业设计kibra和apkc在中枢神经系统发育中的表达及意义
分类号学号200248（师资班）
学校代码10487密级
硕士学位论文
Kibra和aPKC在中枢神经系统发育中的表达及意义
学位申请人：
周金安
学科专业：
病理学
指导教师：
段亚琦副教授
答辩日期：
2013年5月
AThesisSubmittedinPartialFulfillmentofthe
RequirementsfortheDegreeofMasterofMedicine
ExpressionandsignificanceofKibraandaPKCincentralnervoussystemduringembrynicdevelopment
Candidate:
ZhouJin’an
Tutor:
Prof.DuanYaqi
Major:
Pathology
TongjiMedicalCollegeof
HuazhongUniversityofScienceandTechnology
Wuhan,Hubei430030,P.R.China
May,2013
独创性声明
本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。
尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。
对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。
学位论文作者签名：
日期：
年月日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：
学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。
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保密□，在_____年解密后适用本授权书。
本论文属于
不保密□。
（请在以上方框内打“√”）
学位论文作者签名：
指导教师签名：
日期：
年月日日期：
年月日
一、摘要
1中文摘要1
2英文摘要4
二、正文
1前言6
2材料与方法8
3结果
3.1HE染色结果11
3.2Kibra结果12
3.3aPKC结果19
4讨论26
5结论27
6参考文献28
三、综述
1综述31
2结语41
3参考文献42
四、致谢48
Kibra和aPKC在中枢神经系统发育中的表达及意义
华中科技大学同济医学院
硕士研究生周金安
导师段亚琦
中文摘要
概述
Kibra是一个含有WW结构域，表达于肾脏和脑组织的蛋白质。
通过基因组单核苷酸多态性筛选证实，Kibra参与了人类记忆认知功能。
大量研究表明，Kibra表达在记忆相关的脑组织区域；在记忆提取的过程中，Kibra等位基因会发生明显改变；Kibra与CLSTN2表达在记忆相关区域内颞叶部位参与情节记忆的形成，与阿尔默海茨病病因有关。
但是Kibra在脑组织中的表达部位以及在胚胎发育过程中Kibra表达部位和表达水平的变化与记忆形成的关系尚不明确。
PKC（蛋白激酶C）作为一个苏氨酸-丝氨酸家族蛋白，参与了机体很多的生理性和病理性过程。
如：
脑组织的发育、突触的可塑性、癫痫病、脑缺血以及神经细胞的死亡。
aPKC（非典型蛋白激酶C）为蛋白激酶C家族中的一个类型，可以分为三个亚型，PKCζ、PKCλ/ι、PKMζ。
这些亚型在突触可塑性和神经变性疾病中发挥了重要的作用。
它们介导胞外信号调节的激酶级联反应，P70S6激酶信号级联反应，参与肿瘤的发生，细胞极性的形成以及记忆的长时程增强。
大脑记忆的主要功能区域在海马，其次为颞叶和小脑，因为Kibra和PKC在胚胎发育脑组织中的具体表达部位及其意义还未阐明，如果能证实它们表达于大脑这些与记忆相关的区域，能为记忆形成的机理研究打下一定基础。
同时,最近研究发现，Kibra与PKC关系密切，可能是PKC磷酸化的底物。
本研究以大鼠不同发育时期的脑组织（不同胚胎期、新生、成年）为研究对象,通过HE染色了解脑组织的基本结构和细胞形态；阴道抽液法确定受孕日期；免疫组织化学方法检测Kibra和aPKC在不同时期脑组织中的表达，从而探讨二者在突触可塑性和记忆形成的联系。
结果显示：
1、Kibra在大脑皮层、海马、小脑的细胞核中表达；在10d、12d表达阴性，14d表达弱阳性，16d、18d、新生、成年大鼠阳性表达逐渐增强。
2、aPKC在大脑皮层、海马、小脑细胞的细胞连接处表达，且在各个时期脑组织均为阳性表达。
目的
1、掌握了解大鼠脑组织的形态结构和组织特点。
2、研究Kibra和aPKC在不同时期的大鼠脑组织中的表达。
3、初步探讨Kibra和aPKC在大脑记忆形成中的相关性。
方法
1、将雌雄成年鼠合笼，阴道抽液确定怀孕日期（检查到精子记为怀孕0.5天）。
2、收集不同时期（胚胎第10d，12d，14d，16d，18d，20d）胚胎鼠、新生鼠及成年鼠各两只，共16只，分别标记、取脑组织。
3、固定标本并切片（做冰冻切片和石蜡切片二种），HE染色、同一时期的大鼠脑组织分别用ABC三步法免疫组织化学法进行Kibra和aPKC染色。
结果
1、Kibra在大脑皮层、海马、小脑的细胞质中表达；在胚胎10d、12d表达阴性；胚胎第14d在大脑皮层表达弱阳性，胚胎第18d在大脑皮层表达阳性，海马区表达弱阳性；新生鼠在大脑皮层、海马、小脑的浦肯野细胞中表达阳性。
随着胚胎的发育，表达逐渐增强。
2、aPKC自胚胎第10d在大脑皮层、海马、小脑细胞的细胞连接处表达阳性且均在各个脑组织时期表达阳性，随着胚胎发育，表达有逐渐增强的趋势。
结论
1、Kibra较aPKC晚表达于脑组织中，Kibra在脑组织中的表达随胚胎发育逐渐增强，表达区域逐渐扩大。
2、aPKC在自胚胎早期即表达于脑组织，说明是脑组织发育不可缺少的成分。
3、Kibra和aPKC自新生后均在脑组织海马、大脑皮层和小脑中表达，提示了二者可能存在潜在的相互作用和联系，参与了记忆的形成。
关键词：
记忆形成；脑组织；Kibra；aPKC;免疫组化；HE染色
ExpressionandsignificanceofKibraandaPKCincentralnervoussystemduringembrynicdevelopment
Candidate:
ZhouJin’an
Supervisor:
Prof.DuanYaqi
TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology
ABSTRACT
Summarize
TheKibrageneencodesacytoplasmaticprotein,amemberofthesignaltransductionproteinfamily,expressedmainlyinthebrain.RecentstudieshaveimplicatedtheinvolvementofageneticvariationintheKIBRAgene（Tallele）inhumanmemoryinnormalsubjectsandintheriskofdevelopingAlzheimer'sdisease（AD）.PROTEINKINASEC（PKC）isanintegralpartinthecellsignalingmachinery.Biochemicalandmolecularcloninganalysishasrevealedthat,likemostothersignalingproteins,theenzymecomprisesalargefamilywithmultipleisoformsexhibitingindividualcharacteristicsanddistinctpatternsoftissuedistribution.Thebiologicalsignificanceofthisheterogeneityhasnotbeenfullyclarified,butthefunctionofeachPKCisoformforcellularregulationisbeinginvestigatedextensively.Presently,thepossibilitymaynotberuledoutthatsomeisoformsrepresentsimplyaredundancy,butplausibleevidencesuggeststhatthemembersofthisenzymefamilyareactivatedinspecificintracellularcompartmentsindifferentways,dependingonvariousmembranelipidmetabolites,andplaydistinctrolesforthecontrolofmajorcellularfunctions.
Objective
Theaimofourstudywastoinvestigatethemorphologicalstructureandfeaturesoforganizationinbraintissues.TheexpressionofKibraandaPACinbraintissuesweredetectedaswell.
Methods
Thefemaleandmaleratswerematedanddatesofpregnantwereconfirmedbyvaginalfluid.Thebraintissuesoffetusesrats（10d,12d,14d,16d,18d,20d）,neonatalratsandadultratsatdifferentstageswerecollected.Routinelyprocessed4%formamint-fixed,frozensectionsandparaffin-embeddedblockswerearchived.KibraandaPKCwerestainingbyHEandABCimmunohistochemicalmethods.
Results
Kibrawasexpressedinthenucleiofcerebralcortex,hippocampusandepencephalon.TheexpressionlevelsofKibrawerenegativeonday10,12,weaklypositiveonday14.Theexpressionlevelwasgradual
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