人教版选修1 微生物的实验室培养 第2课时 教案4.docx

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人教版选修1微生物的实验室培养第2课时教案4

微生物的实验室培养

一、课题目标

（一）知识与技能

了解有关培养基的基础知识;掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术

（二）过程与方法

分析实验思路的确定和形成的原因,分析实验流程,对比前面的实验设计,归纳共性,分析差异,增加印象

（三）情感、态度与价值观

形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神

二、学情分析

学生对微生物的培养的了解几乎为零。

三、重点难点

【课题重点】

无菌技术的操作

【课题难点】

无菌技术的操作

四、教学过程

活动1【导入】复习引入

【复习引入】

【师】前两节课,我们学习了微生物的实验室培养的基础知识,今天这节课我们学习实验操作,翻到P16。

首先,复习知识:

·微生物鉴定的重要依据是_________

·培养基的四大营养液成分是_________、_________、_____________、___________

·培养基除了为微生物提供营养物质外,还需满足微生物生长对_______、_________、________的需求

·获得纯净培养物的关键是__________

【生】回答

【师】实验操作部分包括量大内容:

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;纯化大肠杆菌

【投影】大肠杆菌图片

【生】了解

活动2【讲授】教学内容

【

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基】

【师】首先学习第一部分的内容:

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

制作培养基,得知道培养基成分,及培养基配方

【投影】配方（1000ml）

【师】该培养基由4个组分构成,拿到配方后,我们应如何进行配置呢?

分为哪几个步骤?

请大家找到并勾划

【生】计算;称重;溶化;灭菌;倒平板

【师】课本上给出的步骤不够全面,下面我们的分析过程与之稍有不同,请大家认真注意听讲

【分析】

计算

根据所需要培养基数量,计算所需要的体积;由体积,根据配反比例,计算所需用量。

如需要100ml培养基,根据配方数据,各组分缩小10倍,即得各组的用量（牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,nacl0.5g;琼脂2g）

称重

制备100ml培养基,各组分用量都比较少,需准确称取各种成分

实验室常用的精确度较高的称量仪器是电子天平,它的精确度可达0.0001g,即0.1mg（小数点后四位）

各组分中,蛋白胨为粉末状,nacl、琼脂都容易称量,但牛肉膏比较粘稠,可用玻棒或药匙挑取,放在称量纸上称量（图片）

注意:

称取牛肉膏和蛋白胨时,动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖,为什么?

【生】防止牛肉膏和蛋白胨吸收空气中的水分

3、溶化

注意溶化药品的顺序,否则有些培养基容易产生沉淀;

加水加热溶化牛肉膏:

称量时用称量纸称取,现在直接将称量纸一同放入烧杯中,溶化后取出称量纸丢弃

加入蛋白胨和nacl,玻棒搅棒溶解

加入琼脂,继续加热使其溶化,并用玻棒搅棒,为什么?

【生】防止琼脂糊底,导致烧杯破裂

最后,用蒸馏水定容至100ml

调pH

①用1mol/l的naoh溶液调节ph至ph7.6左右

②调节ph常用ph试纸或者ph测定仪

5、灭菌

①将烧杯中的培养基转移至三角锥形瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌15-30min

②将培养皿用报纸包紧,放入干热灭菌箱内灭菌2h

③灭菌结束,取出培养基、培养皿,放在干净的位置待用

6、倒平板

待培养基冷却到50℃,在酒精灯火焰附近倒平板

【思考】你用什么方法估计温度?

【生】用手摸

【师】用手触摸锥形瓶,感觉温度刚好不烫手

下面我们学习如何倒平板

【倒平板操作】

【师】看P17图文解说,首先,大家气度一遍步骤

【生】读书

【分析】

①将灭菌培养基放在火焰旁边的桌上,右手拿着装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞

②右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰

【思考】为什么要拖过酒精灯火焰?

③用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶内的培养基倒出10-20ml,左手立即盖上皿盖

④等待平板冷却凝固,约5-10min,将平板倒置

【思考】为什么要倒置?

【分析】平板冷凝后,皿盖上会结出水珠,凝固后的培养基表面温度比较高,将平板倒置,可以防止水珠落入培养基,又可以避免培养基中水分过快地挥发

【讨论4】在到平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来继续培养微生物吗?

【生】不能

【师】因为空气中的微生物可能会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,造成污染

【生】笔记

【师】倒平板之后,配置培养基的操作还没有结束,我们需要进行下一步:

7、无菌检查

将培养基放置在37℃的恒温箱中培养24-48h,没有长出细菌,即可进行下面的操作

【生】笔记

二、纯化大肠杆菌

【师】纯化大肠杆菌需要用到微生物的分离与纯化技术,即:

从混杂菌种中获得只含一种或一株微生物的过程

可利用固体培养基,将混杂的细菌分散或稀释成单个细胞,使其生长繁殖成单个菌落

首先,请大家阅读课本,找到微生物的接种技术有哪几种?

【生】平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种法、穿刺接种法

【师】下面我们重点学习平板划线法、稀释涂布平板法

首先,学习平板划线法

【平板划线法】

【师】请大家气度步骤

【生】读书

【分析】点燃酒精灯,后面所有操作都在酒精灯火焰附近进行

①操作的第一步,必须首先将接种环在酒精灯火焰上灼烧,直接烧至红

②在火焰附近冷却接种环,并打开盛有菌液的试管棉塞

③将试管口通过酒精灯的火焰

④将已经冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液

⑤将试管口通过酒精灯的火焰,并塞上棉塞

⑥左手将培养皿打开一条缝隙,右手将沾有菌液的接种环迅速伸入平板内,划线三至五条

注意:

用力不能过大,不能将培养基划破

⑦灼烧接种环,冷却,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线,重复以上操作,在第三、第四、第五区域内划线

注意:

不要将最后一个区域的划线与第一区域相连

【生】理解过程

【师】课件演示划线操作

【生】观看操作

【师】最后,划线结束后,要将接种环在酒精灯火焰上灼烧,杀死细菌,将平板倒置,放置培养箱中培养

【视频】平板划线法

【生】观看,加深记忆理解

【师】培养几天之后,我们就会得到长着细菌的培养基

【投影】图片

【

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基】

【师】首先学习第一部分的内容:

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

制作培养基,得知道培养基成分,及培养基配方

【投影】配方（1000ml）

【师】该培养基由4个组分构成,拿到配方后,我们应如何进行配置呢?

分为哪几个步骤?

请大家找到并勾划

【生】计算;称重;溶化;灭菌;倒平板

【师】课本上给出的步骤不够全面,下面我们的分析过程与之稍有不同,请大家认真注意听讲

【分析】

计算

根据所需要培养基数量,计算所需要的体积;由体积,根据配反比例,计算所需用量。

如需要100ml培养基,根据配方数据,各组分缩小10倍,即得各组的用量（牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,nacl0.5g;琼脂2g）

称重

制备100ml培养基,各组分用量都比较少,需准确称取各种成分

实验室常用的精确度较高的称量仪器是电子天平,它的精确度可达0.0001g,即0.1mg（小数点后四位）

各组分中,蛋白胨为粉末状,nacl、琼脂都容易称量,但牛肉膏比较粘稠,可用玻棒或药匙挑取,放在称量纸上称量（图片）

注意:

称取牛肉膏和蛋白胨时,动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖,为什么?

【生】防止牛肉膏和蛋白胨吸收空气中的水分

3、溶化

注意溶化药品的顺序,否则有些培养基容易产生沉淀;

加水加热溶化牛肉膏:

称量时用称量纸称取,现在直接将称量纸一同放入烧杯中,溶化后取出称量纸丢弃

加入蛋白胨和nacl,玻棒搅棒溶解

加入琼脂,继续加热使其溶化,并用玻棒搅棒,为什么?

【生】防止琼脂糊底,导致烧杯破裂

最后,用蒸馏水定容至100ml

调pH

①用1mol/l的naoh溶液调节ph至ph7.6左右

②调节ph常用ph试纸或者ph测定仪

5、灭菌

①将烧杯中的培养基转移至三角锥形瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌15-30min

②将培养皿用报纸包紧,放入干热灭菌箱内灭菌2h

③灭菌结束,取出培养基、培养皿,放在干净的位置待用

6、倒平板

待培养基冷却到50℃,在酒精灯火焰附近倒平板

【思考】你用什么方法估计温度?

【生】用手摸

【师】用手触摸锥形瓶,感觉温度刚好不烫手

下面我们学习如何倒平板

【倒平板操作】

【师】看P17图文解说,首先,大家气度一遍步骤

【生】读书

【分析】

①将灭菌培养基放在火焰旁边的桌上,右手拿着装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞

②右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰

【思考】为什么要拖过酒精灯火焰?

③用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶内的培养基倒出10-20ml,左手立即盖上皿盖

④等待平板冷却凝固,约5-10min,将平板倒置

【思考】为什么要倒置?

【分析】平板冷凝后,皿盖上会结出水珠,凝固后的培养基表面温度比较高,将平板倒置,可以防止水珠落入培养基,又可以避免培养基中水分过快地挥发

【讨论4】在到平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来继续培养微生物吗?

【生】不能

【师】因为空气中的微生物可能会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,造成污染

【生】笔记

【师】倒平板之后,配置培养基的操作还没有结束,我们需要进行下一步:

7、无菌检查

将培养基放置在37℃的恒温箱中培养24-48h,没有长出细菌,即可进行下面的操作

【生】笔记

二、纯化大肠杆菌

【师】纯化大肠杆菌需要用到微生物的分离与纯化技术,即:

从混杂菌种中获得只含一种或一株微生物的过程

可利用固体培养基,将混杂的细菌分散或稀释成单个细胞,使其生长繁殖成单个菌落

首先,请大家阅读课本,找到微生物的接种技术有哪几种?

【生】平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种法、穿刺接种法

【师】下面我们重点学习平板划线法、稀释涂布平板法

首先,学习平板划线法

【平板划线法】

【师】请大家气度步骤

【生】读书

【分析】点燃酒精灯,后面所有操作都在酒精灯火焰附近进行

①操作的第一步,必须首先将接种环在酒精灯火焰上灼烧,直接烧至红

②在火焰附近冷却接种环,并打开盛有菌液的试管棉塞

③将试管口通过酒精灯的火焰

④将已经冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液

⑤将试管口通过酒精灯的火焰,并塞上棉塞

⑥左手将培养皿打开一条缝隙,右手将沾有菌液的接种环迅速伸入平板内,划线三至五条

注意:

用力不能过大,不能将培养基划破

⑦灼烧接种环,冷却,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线,重复以上操作,在第三、第四、第五区域内划线

注意:

不要将最后一个区域的划线与第一区域相连

【生】理解过程

【师】课件演示划线操作

【生】观看操作

【师】最后,划线结束后,要将接种环在酒精灯火焰上灼烧,杀死细菌,将平板倒置,放置培养箱中培养

【视频】平板划线法

【生】观看,加深记忆理解

【师】培养几天之后,我们就会得到长着细菌的培养基

【投影】图片