抗菌药物最小抑菌浓度的测定.docx

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抗菌药物最小抑菌浓度的测定

一、概念：

最小抑菌浓度（minimuminhibitoryconcentmtion,MIC）:

在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。

二、实验目的：

通过采用常量稀释法，检测几种抗菌药物对一一菌株的最小抑菌浓度（MIC）,对临床诊断用药有指导作用。

三、仪器和试剂:

MH液体培养基

无菌试管

分光光度计

0.5麦氏标准比浊管

MH琼脂

微量加样器

蒸ts水

吸头

O.lmol磷酸缓冲

液（PH6.0）

接种环

无菌生理盐水

无菌平板

无菌滤膜0.22

无菌针筒

金黄色葡萄球菌、

大肠埃希菌、铜绿

假单胞菌

抗菌药物

四、检验方法：

液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（Etest）液体稀释法操作步骤：

抗菌药物原液

配置

OOOOOOOOOOOOO

N1H液体试管中抗菌药物梯度稀释

1..抗菌药物原液制备

抗菌药物贮存液浓度不应低于1000pg/ml（如1280昭/ml）或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

例如：

需配制100ml浓度为1280yg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750Mg/mgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6mg。

根据公式计算所需稀释剂用量为：

（182.6mgX750pg/ml）/1280pg/ml=107.0ml,然后将182.6mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。

制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。

配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-2（TC环境，并注意抗菌药物的保存期限。

表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法

药物浓度

取药液量

加稀释剂

药物稀释浓

琼脂或肉汤中最后含药浓度

（ug/ml）

（ml）

量

（ml）

度

（ug/ml）

药物：

琼脂（或肉汤）=1：

5120

512

5120

2560

256

5120

1280

128

1280

640

1280

320

1280

160

0.5

2.5

0.25

2.5

1.25

0.125

2.5

0.6

0.06

2.5

0.3

0.03

2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

3.培养基NCCLS推荐便用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。

需氧菌与兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。

在测试葡萄球菌对苯醴西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。

嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

4•接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，359孵育2-6h。

增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含l~2X108CFU/mlo二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌与甲氧西林咐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18〜24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。

用MH肉汤将上述菌悬液进行1:

100稀释后备用。

注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检査接种物纯度。

5.稀释抗菌药物的制备与菌液接种取无菌试管（13X100mm）13支，排成一排，除第1管加入肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液（如1280pg/ml）0.4ml混匀，然后吸取lml至第2管，混匀后再吸取lml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取lml弃去，第12管为不含药物的生长对照。

此时各管药物浓度依次为256、12&64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25Mg/mlo然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5X105CFU/mlo第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125pg/mlo另外设对照3支，别为肉汤对照、质控菌对照和待测菌生长对照。

6•孵育将接种好的稀释管塞好塞子，置359普通空气孵箱中孵育16~20h;嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h;对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。

7.结果判断与解释在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检査生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检査接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。

以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MICo甲氧节胺喀噪或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断,与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。

【MIC參考范围】

表2稀释法质控标准菌株MIC预期值范围（ug/ml）

抗

菌

药

物

金黄色葡萄球菌

（ATCC29213）

粪肠球菌

（ATCC29212）

大肠埃希菌

（ATCC25922）

铜绿假单胞菌

（ATCC27853）

青

0.25〜1.0

1.0〜4.0

霉

0.12〜0.5

素

0.5〜2.0

2.0〜8.0

苯

1.0〜4.0

0.12〜0.5

4.0〜16

西

0.25〜1.0

1.0〜4.0

林

2.0〜8.0

一

0.06〜0.5

1.0〜4.0

甲

0.03〜0.12

16〜64

氧

0.06〜0.25

2.0〜8.0

西

0.12〜1.0

0.25〜1.0

1.0〜4.0

林

0.5〜4.0

2.0〜8.0

0.06〜0.25

氨

0.12〜0.5

1.0〜4.0

一

节

0.5〜2.0

1.0〜4.0

西

0.12〜0.5

0.25〜2.0

0.004〜0.015

0.25〜1.0

林

哌

拉

西

林

头

袍吩头

孑包

头

抱

咲

辛

头

孑包

他

噪

头

袍

氨

曲

南

庆

大

霉

素

阿

米

卡星

克

林

霉

素

红

素

万

古

霉

素

环

丙

沙

星

常用抗菌药物稀释和配制方法

注血

函輸1有比

N.S

一丹

頷菜丙林

N.S

一次

鼠竿西林氟氯

N.S

―次

鼠菜贾林舒巴

N.S

—次

RpTMW林氯氯

N.S

—汰

阿倉丙林舒巴

―汰

阿草两林克曲

N.S

一次

秦夫芮林

N.S

—次

阿落面林

5%GNS.5-10%GS

f链a牛田1Oml射田7k溶鯉

羊落而林

5%GNS.5-10%GS

一丹

羊落西林舒巴

NS5%GNS・5-10%G.S

i*.先甲活倩泮射甲?

kQ半理赴?

k溶鯉

麴竿两林

5%G.S

一次

松*面林市曲

B%GS

-汰.牛田1Oml射田7k谊鯉

哌卅面林

―汰

哌卅两林仙，口坐

5%G.S・NS

—次

哌卅两林舒巴

5%GSNS

—W

茶他面林

NS.GS

一汰

从潮坐瞅

NS.GS

f先田注射田？

k濬鯉

石永弘怖吨瞅

NS.5%GS

f先田注射田？

k濬鯉

決袍殆睐

N.S

―次

头術噪盼

NS5%G.S

1*.先4p甲20ml注射甲水濬鯉

从狗咲立

芳

—汰

从祠羊他

NS.GS

―汰

注币松咅

NSGS

―汰

头術替口坐

NSG.S

—次

弘袍尼面

NS5-10%G.S

—次

#-7ftWT

N.S.5-10%GS

―汰

从祠壬龛

NS.B%G-S

一汰

头術佈京

NS5%G.S

―次

決術曲松

NS5%G.S

1*.牛甲注射甲7k、N.S、G-S配战0-lp/ml

弘祠哌酮

GNS

—终液底为S-9SmQ/m1

从祠哌酮鋅戸

NS5%GS

f1a—7k溶啓煮冒4ml.再田同一滋膛滋

头禎哌酮仙膛

NS5%G・S

-次.先甲泮射甲7k、N.S5-10ml溶解

姑慕头術

NS5%G.S

—W

注币来诺

NS.5-10%GS

一汰

从祠卩坐睛

NS10%GS

―*

从怖怖嗟

NS林槁.S%GS

—汰

決術甲盼

NSG.S

―次

淇袍兀勝

NSG.S

—次

NSGS

—汰

NS.GS

―汰

而勝博由丙m

NSG.S

—Vk

羊野博南

NS5-10%G.S

-次.可先甲合活满体配制

^ftttlrdki

MQU1CO/sCQ

1、X1crZEB9Z^/I>2仆1圧姑田rk険皈农祕？

F&2

阿奇霉素

N.S,5%G.S

二次.先用注射用水稀释成0.1mg/ml,再稀

依巷来昆

NS5%G.S

一次

ns:

E%as

—W牝田叶射田永bV甘仙滋满瑶弼缶

市林髯耒

=Jr.

—次

7f古龜寿

NS5%G.S

f先田1CHT11注射田7k溶鯉.再协入互/卜

去甲万古霉素

N.S,5%G.S

二次.先用注射用水溶解，再用至少200ml液

替考拉宁

N.S,5%G.S

二次.先用注射用水溶解，双手滚动小瓶至药

5%GS

―汰

m%Gs

―汰

落羊沁呈

NS5%GS

1〉兄牝田3ml注射田7k谊鯉

左氧氟沁星

NSG.S

—次

协替沁星

NS5%G.S

一次.终浓修为2m£?

/ml

依诺沁呈

5%GS

一汰

N.S

―*

禾||福髯素

5%G.S

—次

銅席□坐

赤

―次

两性霉素B

5%G.S（用NS有沉淀）

二次.5ml注射用水溶解25mg药物，终浓度

阿昔洛韦

N.S,5%G.S

二次.每O.lg用10ml注射用水溶解成50g/lo

更昔洛韦

N.S,5%G.S

先用N.S或注射用水溶解，再用大瓶稀释成

期号落丰

NS5%GS

―汰

瞇田醪軸

一汰.注音永伐（9ST./dk市话占田狗1尿希L

阿婕晦甘

=Jr.

―*汰.口需ll冒v1Om0/key

病黑卩坐

NS5%G・S

―次.1mff/ml.4#滴

NS5%G.S

牛甲注射申水濬解c，1昌滴1-2小时C

总结：

1.N.S溶解：

靑無素、氨节西林类、阿莫西林类、奈夬西林、头砲硫眯、帕珠沙星

（阿青安怕牛来）

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