动物源细菌耐药性监测任务承担单位及监测数量汇总表模板.docx

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动物源细菌耐药性监测任务承担单位及监测数量汇总表模板

附件1

2018年动物源细菌耐药性监测任务承担单位及监测数量汇总表

检测单位

样品来源

养殖场要求

采样部位

细菌种类与数量要求

中国兽医药品监察所

安徽、广西

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠

沙门氏菌≥50株，弯曲杆菌≥50株

辽宁兽药饲料畜产品质量安全检测中心

辽宁、内蒙

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

上海兽药饲料检测所

上海、江苏

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

四川省兽药监察所

四川、云南

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

广东省农产品质量安全中心

广东、海南

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

中国动物卫生与流行病学中心

黑龙江、吉林

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌≥50株，金葡菌≥50株，弯曲杆菌≥50株

中国动物疫病预防控制中心

天津、青海

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株，弯曲杆菌≥50株

河南省兽药饲料监察所

河南、甘肃

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

湖南省兽药饲料监察所

湖南、贵州

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

陕西省兽药监测所

陕西、宁夏

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株，沙门氏菌或金葡菌≥50株

山东省农业科学院

山东、山西

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、鸭、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

沙门氏菌或金葡菌≥100株，弯曲杆菌≥100株

浙江省农业科学院

浙江、福建

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、鸭、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

沙门氏菌或金葡菌≥100株，弯曲杆菌≥100株

中国农业大学

至少包括北京和山西，其它不限

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为肉鸡和猪源样品。

动物肠道或拭子

魏氏梭菌≥200株

华南农业大学

至少包括所在地和邻近一个省份，其它不限

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为肉鸡和猪源样品。

动物肠道或拭子

魏氏梭菌≥200株

华中农业大学

至少包括湖北和邻近一个省份，其它不限

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为肉鸡和猪源样品。

动物肠道或拭子，鼻拭子

魏氏梭菌≥100株，副猪嗜血杆菌≥30株

西北农林科技大学

至少包括青海、宁夏，其它不限

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为羊源样品。

动物肠道或拭子、体表淋巴结

大肠杆菌≥100株，伪结核棒状杆菌≥100株，魏氏梭菌≥100株

**市兽药监察所

北京

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株

江西省兽药饲料监察所

江西

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株

江苏省畜产品质量检验测试中心

江苏

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株

江苏省家禽科学研究所

江苏

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

弯曲杆菌≥100株

河北省兽药监察所

河北

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株

**市兽药监察所

重庆

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株

新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所

新疆

养殖场或屠宰厂共10-20个

屠宰厂为鸡、猪源样品。

泄殖腔拭子或动物盲肠，牛奶

大肠杆菌≥200株，肠球菌≥200株

注：

采样时，大、中小型养殖场各半；主要采育成动物、鲜牛奶；分离大肠杆菌或肠球菌每个养殖场采样30~50份，分离其他细菌根据分离率来确定样品数量。

屠宰厂采样时，应采集动物的直肠或盲肠样品。

附件2

2018年动物源细菌耐药性监测采样

和监测技术要点

一、采样安排

（一）采样地点选择

各监测任务承担单位按照《监测计划》进行选场、采样和分离细菌。

同时，负责对本辖区内设立的全国定点监测场（见下表）长期跟踪监测大肠杆菌和肠球菌耐药性变化趋势，每年采样2次，分上半年和下半年进行。

全国长期定点跟踪监测养殖场名录

地区

养殖场

上海

**市**区慧岛养猪场、**市**区瀛跃种禽场、**市**区太平洋家禽育种有限公司

辽宁

**市世福种猪有限公司，锦州双八乳业宋家沟奶站

广东

江门盈康猪场，江门春茂畜牧有限公司（鸡场），广东陈召坤鸡场

四川

成都巨星农牧科技有限公司（猪场），**市金绿农牧科技有限公司（猪场）、巨星崇州种鸡场（鸡）、四川新希望奶牛养殖有限公司

江西

江西南昌国泰养猪场，江西南昌明泰养鸡场（蛋鸡场）

湖南

湖南新五丰股份有限公司永安分公司、湖南湘佳牧业股份有限公司，宁乡广东温氏畜禽有限公司、湖南省金健乳第一牧场

山东

山东银宝养猪场，山东中慧养鸡场，益客养鸭场，维多利亚奶牛场

陕西

陕西省**县海燕羊场，陕西省**县晨辰奶牛养殖厂，陕西省**市**区东大南强养猪场，陕西省**市**区东大北强养鸡场

河南

河南益生源农牧发展有限公司（鸡），富源养殖专业有限公司（猪），洋江奶牛养殖专业合作社（牛）

北京

北京华都峪口禽业有限公司，北京顺鑫农业小店畜禽良种场

江苏

江苏**市永康农牧猪场、江苏**市红旗养鸡场、江苏**市龙盛养鸡场

河北

石家庄旭晨养殖合作社（肉鸡），石家庄宝丰种鸡养殖场（蛋鸡），石家庄顺达养猪场（猪）

重庆

重庆鑫伟旭生态农业发展有限公司（鸡场），**市六九畜牧科技股份有限公司（猪场）

浙江

浙江宝仔农业发展有限公司（猪场）、浙江嘉兴三园鸡专业合作社（鸡场）、浙江绍兴董家竹山鸡场（鸡场）、杭州海青养殖有限公司（鸭场）、**市三弟兄农业开发有限公司（鸡、鸭、猪屠宰场）

新疆

新疆天康种猪场，新疆**市泰昆养殖有限公司（鸡场），新疆呼图壁种牛场有限公司畜牧二场（牛）

天津

**市精武种猪场（猪场），天津广源畜禽养殖有限公司第一分公司（蛋鸡），**市**区昭君肉鸡养殖专业合作社（肉鸡）

湖北

**市神康生态牧业有限公司（猪），**市天利养鸡专业合作社（鸡）

海南

海南传味文昌鸡产业股份有限公司（鸡场），海南丽康农业综合开发有限公司三江种猪场（猪场），海南艾森牧业有限公司（奶牛场）

安徽

嘉吉动物蛋白（安徽）有限公司，安徽禹王养殖有限公司

内蒙

新农村奶牛养殖合作社（牛），**市农研院鸡猪服务部（鸡、猪）

黑龙江

齐齐**市鑫兴养殖场（猪），齐齐**市宏伟养殖场（肉鸡），

齐齐**市新未来奶牛养殖场（牛）

云南

云南**市龙源农牧科技发展有限公司（猪），昆明石林县骏杰养殖场（蛋鸡），**市石林县龙井山养鸡专业合作社（肉鸡）

福建

南阳实业有限公司（猪场）、周**县生态林养殖专业合作社（鸡场）

山西

山西**市荣璋猪业科技公司，山西张振国养殖场（鸡场），山西太原旺禅源牧业公司

青海

**市**县录明养殖专业合作社（蛋鸡场），**市**区达佑养殖有限公司（肉鸡场），**市**区金阳富硒良种猪有限公司（猪场）

宁夏

宁夏**市汇聚融农牧专业合作社、宁夏**市**县立岗养猪场（猪）、宁夏**市**县荣鑫蛋鸡养殖场（鸡）、宁夏**市华兴禽养殖有限公司

贵州

贵州都匀黔隆果菜基地开发有限公司、贵州息烽特驱家禽养殖有限公司、贵州都匀开发区天羽蛋鸡养殖场（鸡）

广西

南宁诚兴科技有限公司（蛋鸡），南宁隆安凤鸣农牧有限公司（肉鸡），广西雄桂种猪有限公司（猪）

吉林

同济牧业有限公司（猪）、龙潭万福养殖场（肉鸡）、

吉林春光牧工商集团公司（牛）

（二）采样类型

病死动物采集临床病料；健康动物采集泄殖腔或盲肠拭子作大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌和弯曲杆菌分离；采集新鲜牛奶作金黄色葡萄球菌分离，根据养殖场规模，每个场采样30~50份。

（三）监测的细菌种类

包括大肠杆菌、肠球菌（分为屎肠球菌和粪肠球菌）、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌（分为空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌）等。

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌可根据各地分离情况进行监测。

二、调查和记录

各监测任务承担单位要认真做好饲料和饲料药物添加剂来源与种类调查、采样前动物使用抗菌药物情况调查（预防用药和治疗用药）和采集样品的统计，据实填写采样记录表。

三、细菌分离与鉴定

采用选择性培养基，定向做大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲杆菌分离，用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定。

本年度分离监测的细菌种类与数量要求见《监测计划》。

分离到的菌株在-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或用其它合适方法自行保存，沙门氏菌和弯曲杆菌送中监所进行血清型鉴定后保存。

四、药物敏感性测定

用经中监所质量认定的药敏试验板进行药物敏感性检测，目前已进行质量认定的药敏板生产企业有：

**市金章科技发展有限公司和上海星百生物技术有限公司。

检测用质控菌株由中监所统一供应。

附件3

采样记录表

采样地：

养殖场：

采样时间：

联系人姓名、电话：

样品来源

□猪日龄____

□鸡日龄____

□牛日龄____

其他________日龄____

□消化道□呼吸道□泌尿生殖道

□肝胆□脑□淋巴结

□关节□奶样□皮肤

□粪便其他______________

采样动物健康状况养殖量

□健康□发病及症状：

。

采样养殖场使用抗菌药情况

饲料来源、添加抗菌药种类

治疗用抗菌药种类与使用方式

生产厂名称

饲料添加的药物名称

剂量

使用时间

药物名称

使用方式

剂量单个动物剂量

饮水添加剂量

饲料添加剂量

用药天数

样品分离菌株

□大肠杆菌

□金黄色葡萄球菌

□肠球菌

□沙门氏菌

□空肠弯曲杆菌

其他__________________

菌株编号：

注：

菌株编号按照“菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号”的格式进行。

如EB-L0701-0001，其中：

E（大肠杆菌）B（牛）L（鲁）07（年）01（月）-0001（菌株编号）。

菌种简写建议为：

E（大肠杆菌）、S（沙门氏菌）、SA（金黄色葡萄球菌）、ECi（肠球菌）、CJ（空肠弯曲杆菌）、CC（结肠弯曲杆菌）

动物简写建议为：

B（牛）、P（猪）、C（鸡）、D（鸭）

注：

a为喂奶猪或保温鸡，b为保育猪或生长鸡，c为育成猪或鸡，d为种母猪或产蛋鸡。

附件4

动物源细菌分离和鉴定方法

一、动物源大肠杆菌的分离与鉴定方法

1范围

本方法规定了用于动物源大肠杆菌分离与鉴定的方法。

本方法适用于各种动物中大肠杆菌的分离与鉴定。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下。

2.1冰箱：

2℃～4℃和-20℃。

2.2恒温培养箱：

36℃±1℃。

2.3电子天平：

感量0.1g。

2.4显微镜：

10×～100×。

2.5生物安全柜。

2.6生化鉴定卡或商品化试纸条。

2.7采样管或商品化采样棉拭子。

2.8微量加样器：

1μL～1000μL。

2.9吸头（与微量加样器匹配）。

3培养基和试剂

3.1运送培养基。

3.2麦康凯琼脂。

3.3大肠杆菌阳性血清。

4大肠杆菌分离与鉴定程序

图1：

大肠杆菌分离与鉴定程序

5操作步骤

5.1采样

选择养殖场或屠宰场，灭菌棉拭子采集动物肛门或泄殖腔样品，置入运送培养基中，保存时间不超过48小时。

5.2大肠杆菌的分离

5.2.1拭子接种于麦康凯琼脂平板，36±1℃培养18～24h。

5.2.2挑取粉红色、边缘光滑的可疑菌落，麦康凯琼脂纯化一代。

5.2.3纯化后可疑菌落接种营养琼脂平板纯化，36±1℃培养16～18h，待进一步细菌鉴定。

5.3大肠杆菌的鉴定

对于已纯化的菌落，可使用微生物生化鉴定系统或者生化拭条进行生化鉴定。

必要时，采用大肠杆菌标准血清进行血清型鉴定。

二、动物源沙门氏菌的分离与鉴定方法

1范围

本方法规定了用于动物源沙门氏菌分离与鉴定的方法。

本方法适用于各种动物中沙门氏菌的分离与鉴定。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下。

2.1冰箱：

2℃～4℃和-20℃。

2.2恒温培养箱：

36℃±1℃和42℃±1℃。

2.3电子天平：

感量0.1g。

2.4显微镜：

10×～100×。

2.5生物安全柜。

2.6恒温水浴锅：

37℃～100℃。

2.7PCR仪。

2.8电泳仪。

2.9电泳凝胶成像分析系统（或紫外透射仪）。

2.10冷冻离心机。

2.11采样管或商品化采样拭子。

2.12小型离心管。

2.13微量加样器：

1μL～1000μL。

2.14吸头（与微量加样器匹配）。

2.15漩涡仪。

2.16微波炉。

3培养基和试剂

3.1标准菌株：

沙门氏菌CVCC541。

3.2DNAMaker。

3.3TaqDNA聚合酶。

3.4dNTP。

3.5琼脂糖。

3.65×TBE缓冲液。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）54.0g

硼酸27.5g

0.5MEDTA（pH8.0）20mL

加纯净水至1000mL

3.750×TAE buffer。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）       242g

NA2EDTA.2H2O 37.2g

醋酸57.1ml

加纯净水至1000mL

3.8invA基因引物。

上游为5′-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3′

下游为5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′

3.9运送培养基。

3.11沙门氏菌显色琼脂。

3.12沙门氏菌阳性血清。

3.13亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）。

3.14四硫磺酸盐增菌液（TTB）。

3.15核酸染料。

3.16氯化钠。

4沙门氏菌分离与鉴定程序

图2沙门氏菌的分离和鉴定程序

5操作步骤

5.1采样

选择养殖场或屠宰场，用灭菌棉拭子采集动物肠道或泄殖腔（肛门）样品，置入运送培养基中，保存时间不超过48小时。

5.2沙门氏菌的分离

5.2.1将拭子置于SC增菌液，36℃±1℃培养18～24h或TTB增菌液，42℃±1℃培养22～24h。

5.2.2将菌液混匀，接种沙门氏菌显色培养基，36℃±1℃培养22～24h。

5.2.3挑取沙门氏菌显色培养基上紫色可疑菌落，接种营养琼脂平板，36℃±1℃培养16～24h，待进一步细菌鉴定。

5.3沙门氏菌的鉴定

5.3.1生化鉴定

对于已纯化的菌落，可使用微生物生化鉴定系统或者生化拭条进行生化鉴定，或者通过5.3.2的方法进行分子生物学（PCR）鉴定。

必要时，用沙门氏菌标准血清进行血清型鉴定。

5.3.2PCR法鉴定

5.3.2.1PCR模板的制备

用接种环从营养琼脂上挑选16～24h的纯培养物，置于0.5mL灭菌生理盐水中，12000r/min离心2min，弃上清。

再加0.5mL灭菌水，悬浮并涡旋混匀，100℃沸水中煮沸10min后，移至冰上，冷却后以12000r/min离心2min，取上清液为PCR模板。

5.3.2.2PCR反应体系的配制

根据不同厂家PCR试剂用量，配制PCR反应体系，扩增片段长度约284bp。

5.3.2.3PCR反应条件

95℃预变性5min，94℃变性30s,64℃退火30s，72℃延伸30s,30个循环，最后72℃延伸10min，同时设立阴性和阳性对照。

5.3.2.4电泳

5.3.2.4.11.2%琼脂糖凝胶板的制备

称取1.2g琼脂糖，加入100mL0.5×TBE（或1×TAE）缓冲液中，加入核酸染料，依据样品数选用适宜的梳子，琼脂糖溶化后混匀倒入在水平台面上的凝胶盘中，胶板厚5mm左右。

待凝胶冷却凝固后拔出梳子，取出胶块放入电泳槽中，加0.5×TBE（或1×TAE）缓冲液淹没胶面。

5.3.2.4.2加样

取10µLPCR扩增产物和3µL上样缓冲液混匀后加入加样孔，每次电泳时，各做一个阳性对照和阴性对照。

5.3.2.4.3电泳条件

电压110V，电泳时间30min。

5.3.2.5结果判定

电泳结束后，取出胶块置于紫外投射仪上打开紫外灯观察或用凝胶成像仪进行成像分析。

如果某一待检样品扩增产物的条带与沙门氏菌阳性对照的条带在一条直线上，即条带与加样孔的距离相同，而阴性对照无此条带，则该样品分离到的菌株可初步判定为沙门氏菌，必要时可通过测序来进一步确证。

三、动物源金黄色葡萄球菌的分离与鉴定方法

1范围

本标准规定了用于耐药性测定的动物源金黄色葡萄球菌的分离和鉴定方法。

本标准适用于牛奶、动物组织和上呼吸道中金黄色葡萄球菌的分离和鉴定。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1冰箱：

0℃～4℃和-20℃。

2.2恒温培养箱：

36℃±1℃和42℃。

2.3显微镜：

10×～100×。

2.4商品化或自制采样管。

2.5无菌离心管。

2.6离心机。

2.8商品化拭条或微生物鉴定仪。

3培养基和试剂

3.1标准菌株：

金黄色葡萄球菌ATCC29213。

3.2显色培养基。

3.37.5%氯化钠肉汤10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤。

3.4营养肉汤或BHI肉汤。

3.5营养琼脂。

3.6新鲜兔血浆或商品用凝固酶试验兔血浆。

3.70.3%过氧化氢液。

3.80.85%无菌生理盐水。

4金黄色葡萄球菌分离和鉴定程序

图3金黄色葡萄球菌分离和鉴定程序

5操作步骤

5.1采样

5.1.1牛奶样品：

到已选定的奶牛养殖场，现场采牛奶置入灭菌试管中，0℃～4℃保存，不超过48h。

5.1.2扁桃体、发病动物组织和上呼吸道拭子：

无菌操作取发病动物组织和上呼吸道拭子，上呼吸道拭子置入灭菌试管中，0℃～4℃保存不超过48h。

5.1.3吸取1mL牛奶样品或将上呼吸道拭子至盛有10mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤中，振荡混匀。

5.2增菌和分离培养

5.2.1将上述样品匀液于36℃±1℃培养18～24h。

金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。

5.2.2将上述培养物，分别划线接种到显色培养基平板上，无菌操作将发病动物组织直接划线，36℃±1℃培养24～48h。

5.2.3挑取可疑菌落。

用营养琼脂纯化一代，待进一步细菌鉴定。

5.3金黄色葡萄球菌的鉴定

5.3.1生化鉴定将在营养琼脂上培养24小时以内的待鉴定细菌，首先进行触酶试验，应为阳性。

将新鲜纯化、经触酶试验阳性待检细菌单个菌落，悬浮于5mL灭菌生理盐水，按照生化鉴定试条使用说明书操作，37℃培养18～24h后判读结果。

5.3.2血浆凝固酶试验法挑取显色平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂平板，36℃±1℃培养18～24h。

将在营养琼脂上培养24h以内的待鉴定细菌，首先进行触酶试验，应为阳性。

新鲜兔血浆制备：

称取柠檬酸钠3.8g，加蒸馏水100mL,溶解后过滤，装瓶，121℃高压灭菌15min。

取3.8%柠檬酸钠溶液一份，加兔全血四份，混好静置（或以3000r/min离心30min），使血液细胞下降，即可得血浆。

取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2～0.3mL，振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。

同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。

也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。

四、动物源弯曲杆菌的分离与鉴定方法

1范围

本标准规定了动物源空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离鉴定方法。

本标准适用于粪便拭子和盲肠内容物中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离与鉴定。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌与培养设备外，其他设备和材料如下。

2.1采样管。

2.2采样棉拭子。

2.3生物安全柜。

2.4恒温培养箱:

25℃±1℃，36℃±1℃，42℃±1℃。

2.5恒温水浴锅：

37℃～100℃。

2.6微需氧条件：

5%氧气+10%二氧化碳+85%氮气，或商品化微需氧包。

2.7显微镜：

10×～100×。

2.8微生物生化鉴定系统或者生化鉴定拭条。

2.9高速冷冻离心机：

≥12000r/min。

2.10小型离心管：

1.5mL。

2.11微量加样器：

1μL～1000μL。

2.12吸头（与微量加样器相匹配）。

2.13PCR仪。

2.14微波炉。

2.15电泳仪。

2.16电泳凝胶成像分析系统（或紫外透射仪）。

3培养基和试剂

3.1质控菌株：

空肠弯曲杆菌标准菌株（ATCC33560）。

3.2DNAMarker。

3.3引物及扩增片段长度。

3.3.1引物

空肠弯曲菌：

上游5’CATCTTCCCTAGTCAAGCCT3’，下游5’AAGATATGGCACTAGCAAGAC3’，扩增片段长度为773bp。

结肠弯曲杆菌：

上游：

AGGCAAGGGAGCCTTTAATC，下游：

TATCCCTATCTACAAATTCGCTATCCCTATCTACAAATTCGC，扩增片段长度为364bp。

3.4运送培养基。

3.5弯曲菌选择性（CCD）培养基。

3.6哥伦比亚血琼脂培养基。

3.7生理盐水。

3.810×PCR缓冲溶液Ⅱ。

3.9氯化镁溶液（25mM）。

3.10Taq