常用培养基及添加剂的配制.docx

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常用培养基及添加剂的配制

1．牛心脑浸汁-辅助琼脂：

（BHI-S）

BHI琼脂100mL

氯化血红素-维生素K11mL

脱纤维蛋白血（兔血）5-10mL

2．胰蛋白水解物-大豆琼脂（TS）

胰蛋白水解物（或胰蛋白胨）1.5g

大豆胨0.5g

Nacl0.5g

酵母提取物0.5g

盐酸半胱氨酸液0.4mL

琼脂2.0g

蒸馏水加至100mL

3．Gifu厌氧培养基：

（GAM）

胰蛋白胨1.0g

大豆胨0.3g

多价蛋白胨1.0g

酵母提取物0.5g

肝浸汁10mL

VPI盐溶液0.2g

牛肉浸膏5mL

盐酸半胱氨酸0.4mL

旈基乙醇酸钠0.03g

葡萄糖1.0g

琼脂1.8-2.0g

刃天青（0.1%）0.5g

蒸馏水加至100mL

4．Rogosa乳杆菌选择培养基（LS）

胰蛋白水解物（或胰蛋白胨）2.0g

酵母提取物1.0g

琼脂4g

葡萄糖4.0g（储存液）

磷酸二氢钾1.2g12g

枸橼酸三铵0.4g4g

硫酸镁（MgSo47H2O）1.0g10g

硫酸锰（MnSo44H2O）0.4g4g

硫酸亚铁（FeSo47H2O）0.08g0.8g

醋酸钠（CH3COONa3H2O）（乙酸钠）5g50g

冰乙酸（99.5%）0.264mL2.64mL

聚山梨酯-800.2g2g

DH2O200mL200mL（每100mL培养基加10mL）

5．TPY培养基

胰蛋白胨3.0g

酵母提取物0.8g

葡萄糖2.0g

磷酸二氢钾1.2g

K2HPO43H2O0.4g

NaCO30.4g

NaCl0.4g

DH2O200mL

琼脂2.5g/200mL

6．普通血琼脂培养基（BA）

牛肉浸膏（0.5-1.0）g

蛋白胨1.0g

NaCl0.5g

K2HPO42.0g

酵母提取物0.5g

葡萄糖1.0g

琼脂1.8g

蒸馏水加至100mL

7．轻唾培养基（MS）

胰蛋白胨1.0g

示胨0.5g

蔗糖3-5g（可根据需要将蔗糖量增至20g）

葡萄糖0.1g

K2HPO43H2O0.53g

琼脂2.0g

0.1%曲利本蓝7.5mL

0.1%结晶紫0.8mL

蒸馏水加至100mL

8．轻唾-杆菌肽琼脂（MSB）

MS琼脂（蔗糖含量为20%）100mL

杆菌肽溶液（200U/mL）0.1mL

灭菌MS琼脂50℃左右时加入杆菌肽溶液，混匀倒板

9．轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂（MS磺胺琼脂）

MS琼脂100mL

*磺胺二甲嘧啶（5%）1.0mL

*1%的亚碲酸钾溶液0.28mL

灭菌MS琼脂冷却至25℃时加入*

10．TYCSB琼脂

胰蛋白酶水解物1.0g

酵母提取物0.5g

盐酸半胱氨酸溶液0.4g

K2HPO43H2O0.53g

蔗糖20g

琼脂2g

DH2O100mL

灭菌后冷却至50-55℃时加入杆菌肽溶液（200U/mL）0.1mL,混匀倒板

11．Rogosa乳杆菌选择培养基（LS）

胰蛋白水解物（或胰蛋白胨）1.0g

酵母提取物0.5g

磷酸二氢钾0.6g

枸橼酸三铵0.2g

葡萄糖2.0g

硫酸镁（MgSo47H2O）0.5g

硫酸锰（MnSo44H2O）0.2g

硫酸亚铁（FeSo47H2O）0.04g

醋酸钠（CH3COONa3H2O）（乙酸钠）2.5g

冰乙酸（99.5%）0.132mL

聚山梨酯-800.1g

琼脂1.8g

DH2O100mL

LS盐溶液的组成：

MgSo47H2O5.57g

MnSo42H2O1.20g

FeSo47H2O0.34g

DH2O50mL

混合上述成分并加热使之溶解。

高压（121℃）灭菌15分钟备用。

100mL乳杆菌选择培养集中加入0.5mLLS盐溶液即可

12．放线菌分离和富集培养基：

1）Beigheor-CoIman培养基：

（FC）

BHI基础培养基100mL

聚乙烯吡咯烷酮1.0g

盐酸半胱氨酸0.4mL

琼脂1.8g

灭菌冷却至50℃左右加入无菌氟化钠溶液（25g/L）1mL,硫酸粘菌素溶液（1g/L）0.5mL，无菌马血清5mL,混匀倒板

2）明胶-甲硝唑-硫酸铬选择培养基（GMS）

营养明胶琼脂100mL

硫酸铬（CdSO48H2O）溶液（2g/l）1.0mL

甲硝唑（1g/l）1.0mL

将上述成分（除甲硝唑外）混合并加热使之溶解，高压（121℃）灭菌15min,待冷却至50℃左右加入无菌甲硝唑溶液1mL,混合均匀后倾注于平板。

3）Tarozzi肉汤培养基

牛肉浸汁50mL

蛋白胨1.2g

NacL0.3g

K2HPO40.2g

混合上述成分并补充蒸馏水（加热至80℃左右）至100mL,煮沸10min,冷却后校正PH值为7.5，用罗素暗管（15mm*150mm分装，每管8mL,然后加入0.1%的硫基乙醇酸钠溶液2mL和新鲜的豚鼠或牛肝切割片（2cm1cm1cm大小并经盐水洗净）。

最后将装有上述物质的螺旋管高压（121℃）灭菌15min后备用

13．韦荣球菌选择琼脂：

（VS）

胰蛋白酶水解物0.5g

酵母提取物0.1g

硫基乙醇酸钠0.075g

50%的乳酸钠溶液（2.0-2.5）mL

聚山梨酯-800.1g

琼脂2.0g

DH2O100mL

混合上述成分并加热使之溶解，待冷却后调PH为7.8，115℃20min或121℃15min高压灭菌。

待冷却至50-55℃时，加入万古霉素溶液（7.5mg/L）1mL和脱纤维兔血或马血5mL混合均匀并倾注平板备用

说明：

1）不含万古霉素和琼脂的乳酸盐培养基可作为韦荣球菌的富集培养基

2）用新霉素（100mg/l）代替万古霉素加入乳酸盐琼脂中，组成韦荣球菌-新霉素琼脂，可用于分离韦荣球菌。

但要注意，其它两种革兰氏阴性厌氧球菌（发酵氨基酸球菌和艾氏巨球菌）均可在此培养基上生长

14．拟杆菌选择琼脂（KVB琼脂）

BHI琼脂100mL

氯化血红素-维生素K1溶液1.0mL

卡那霉素储存液1.0mL

万古霉素储存液1.0mL

无菌脱纤维动物血5mL

将BHI琼脂融化并冷却至50℃左右，加入其它几种成分混匀后倾注于平板备用

说明：

1）KVB琼脂还可用TS琼脂或布氏菌血琼脂作基础，配制方法同上

2）用冻融血代替脱纤维马血或兔血配制成卡那霉素-万古霉素溶血琼脂（KVL-BA），这种拟杆菌选择培养基也可用于普雷沃菌和卟啉单胞菌，并有利于产黑色素细菌落的形成

3）在KVBA琼脂和KVLBA琼脂上，除拟杆菌属细菌可生长外，二氧化碳噬纤维菌也可生长

15．拟杆菌胆汁七叶苷琼脂（BBE）

TS琼脂或BHI琼脂100mL

牛胆盐2g

七叶咁0.1g

*枸盐酸铁胺0.05g

*Hemein（5mg/mL）0.2mL

*庆大霉素溶液（40mg/mL）0.25mL

*消毒后冷却至50℃左右加入

16．梭杆菌培养基

1）梭杆菌选择琼脂（FS）

BHI琼脂培养基100mL

FS添加液1.0mL

将BHI琼脂100mL加热使之融化，待冷却至55℃左右加入FS添加液混匀并倾注于平板

FS添加液的配制：

35mg结晶紫溶于越40mL蒸馏水中并加热煮沸灭菌，待冷却至50℃左右加入硫酸新霉素150mg,，万古霉素25mg.混匀后置冰箱内保存

2）梭杆菌选择培养基（CVE）

胰蛋白胨1.0g

酵母提取物0.2g

NaCL0.5g

K2HPO43H2O5g

可溶性淀粉2.0g

盐酸半胱氨酸0.05g

琼脂2.0g

结晶紫溶液（5mg/mL）0.1mL

DH2O100mL

17．颊纤毛菌分离鉴定培养基

1）结晶紫红霉素琼脂（CVEA）

胰蛋白酶水解物1.0g

酵母提取物0.5g

NaCl0.5g

葡萄糖0.2g

色氨酸0.02g

琼脂1.8-2.0g

结晶紫溶液（5g/l）0.1mL

DH2O100mL

高压灭菌冷却至50-55℃，加入红霉素溶液（4g/L）0.1mL和脱纤维兔血5mL,混合后倾倒平板

2）Kasai培养基

胰蛋白胨1.0g

酵母提取物0.2g

NaCl0.5g

K2HPO43H2O5.0g

可溶性淀粉2.0g

盐酸半胱氨酸0.05g

DH2O100mL

18．WFF琼脂培养基（沃林菌属鉴别培养基）

胰蛋白酶水解物（BBL）1.5g

酵母提取物0.5g

丙酮酸钠0.2g

甲酸钠0.15g

琥珀酸钠0.01g

延胡索酸纳0.015g

NacL0.5g

琼脂2.0g

Hemein（500mg/mL）1.0mL

DH2O100mL

19．伴放线放线杆菌选择琼脂

1）TSBV琼脂

TS琼脂100mL

*马血清10mL

*杆菌肽溶液（7.5g/L）1.0mL

*万古霉素溶液（0.5g/L）1.0mL

*TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55℃左右加入杆菌肽溶液，万古霉素溶液和无菌马血清，混合均匀后倾注于平板

2）TSMB琼脂

TS琼脂100mL

*孔雀石绿溶液（8g/L）0.1mL

*杆菌肽溶液（12.8gL）1.0mL

*脱纤维羊血（或马，兔血）5.0mL

*将TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55℃左右加入孔雀石绿溶液，杆菌肽溶液和脱纤维血，混合后倾注平板

20．克林霉素-硝酸盐（CKA）

BHI琼脂100mL

KNO3溶液（200g/L）1.0mL

克林霉素溶液（50mg/L）1.0mL

Henein（500mg/L）1.0mL

注意:

将BHI琼脂加热并使之融化后立即加入KNO3溶液和氯化血红素溶液混匀，待冷却至50℃左右时加入克林霉素溶液混匀倾注于平板

21．TPY培养基（双歧杆菌分离选择培养基）

胰蛋白酶水解物1.0g

植物胨0.5g

葡萄糖0.5g

酵母提取物0.25g

聚山梨酯-800.1mL

盐酸半胱氨酸0.05g

K2HPO40.2g

MgCl26H2O0.05g

ZnSO47H2O0.025g

CaCl20.015g

Fecl3微量

琼脂1.5-1.8g

DH2O100mL

注意：

混合上述溶液高压灭菌，PH6.5，待冷却至50-55℃时加入卡那霉素，新霉素和草履虫霉素

22．改良双歧杆菌选择琼脂（BSA）

番茄汁20mL

蛋白胨1.5g

酵母浸膏0.6g

葡萄糖2.0g

可溶性淀粉0.05g

聚山梨酯-800.1g

Nacl0.5g

琼脂2.0g

DH2O80mL

注意：

混合上述溶液高压灭菌，PH6.8,待冷却至50℃时加入BS添加液5mL.（PB配方见附录培养基常用溶液。

添加液及抗生素药物溶液的配置）

23．优杆菌选择培养基：

（改良ES）

BHI琼脂100mL

ES溶液5.0mL

注意：

将已经高压灭菌的BHI琼脂加热融化，冷却至50℃左右加入ES溶液（ES配方见附录）

24．PSS培养基（消化链球菌分离培养基）

胰蛋白胨1.0g

酵母提取物1.0g

蔗糖0.1g

VPI盐溶液5..0mL

盐酸半胱氨酸溶液（0.kg/L）0.4mL

七叶咁0.1g

DH2O100mL

注意：

混合上述成分并加热使之溶解，调PH至7.6左右，115℃高压灭菌15minl冷却至50℃左右加入马血清5.0mL,A液（0.45%叠氮纳，30%谷氨酸钠，100℃20min灭菌）2mL及B液（吖啶橙0.01%,j结晶紫0.0065%，硫酸铵1.65%，用灭菌蒸馏水配置）2mL,混合后加入平板

25．沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂（SA）

葡萄糖4.0g

蛋白胨1.0g

琼脂1.8-2.0g

DH2O100mL

注意：

将SA中的葡萄糖改为麦芽糖（2%），并加入氯霉素或庆大霉素40g/L-50g/L或防线线菌酮0.5g/L可作为选择琼脂

26．Hayflick培养基（支原体选择培养基）

牛心浸出液100mL

蛋白胨1.0g

Nacl0.5g

琼脂1.5g

注意：

混合上述成分并加热使之溶解，校正PH7.8-8.0,高压灭菌，冷却至80℃左右加入小牛血清或马血清2mL,25%的鲜酵母浸出液1mL,1%的乙酸砣0.25mL,青霉素甲盐溶液（200000U/mL）0.05mL及20%的葡萄糖溶液0.5mL（注意无菌操作），混合均匀后倾注于平板

说明：

Hayflick不加琼脂即可配成液体培养基，如加入酚红水溶液（0.002%）可指示支原体是否生长，支原体利用葡萄糖产酸，其培养液变黄

27．PYG液体培养基

（主要用于细菌代谢酸产物分析，也可作为增菌的富集培养基）

胰蛋白胨1.0g

酵母提取物1.0g

葡萄糖1.0g

VPI盐溶液4.0mL

DH2O100mL

注意：

如用于厌氧菌培养物需加入盐酸半胱氨酸溶液（0.5kg/L）0.1mL和0.1%刃天青溶液0.25mL