抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒YYT17401.docx

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抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒YYT17401

抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒YYT1740.1

抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒*****.1-2021FDIS

ICS11.100C44中华人民共和国医药行业标准YY/T1740.1—2021医用质谱仪第1部分：

液相色谱-质谱联用仪Clinicalmassspectrometer—Part1:

Liquidchromatography-massspectrometer2021-03-09发布2022-10-01实施国家药品监督管理局发布—i—刖言YY/T1740《医用质谱仪》分为4部分：

——第1部分:

液相色谱-质谱联用仪；

——第2部分:

基质辅助激光解析电离飞行

本部分为YY/T1740的第1部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给岀的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。

本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本部分由国家药品监督管理局提岀。

本部分由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136）归口。

本部分起草单位：

北京市医疗器械检验所、首都医科大学附属北京同仁医院、卫生部临床检验中心、北京协和医院、广州金域医学检验集团有限公司、美康生物科技股份有限公司。

本部分主要起草人：

彭絮、李胜民、刘向祎、张天娇、程歆琦、赵蓓蓓、沈敏、邹迎曙。

医用质谱仪第1部分：

液相色谱-质谱联用仪1范围YY/T1740的本部分规定了医用液相色谱-质谱联用仪的要求、试验方法、标签、使用说明、包装、运输和贮存。

本部分适用于单四极杆和三重四极杆型液相色谱-质谱联用仪（以下简称液质联用仪），该仪器主要用于分析血液、尿液等人源样本中分子物质，例如蛋白质、代谢小分子、药物等。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T191包装储运图示标志GB4793.1测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：

通用要求GB4793.6测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第6部分：

实验室用材料加热设备的特殊要求GB4793.9测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第9部分：

实验室用分析和其他目的自动和半自动设备的特殊要求GB/T*****医用电器环境要求及试验方法GB/T*****.1测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第1部分:

通用要求GB/T*****.26测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第26部分：

特殊要求体外诊断（IVD）医疗设备）GB/T*****.3体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第3部分：

专业用体外诊断仪器YY0648测量、控制和娑验室鬲电气设备的安全要求第2-101部分:

体外诊断（IVD）医用设备的专用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1质量准确性massaccuracy质谱仪对离子质量的测量值与理论值之间的偏差。

[GB/T*****—2015,定义4.5]3.2质荷比masschargeratio.m/z离子的质量（m）与它所带电荷数B）的比值。

[GB/T*****—2015,定义4.6]3.3质量范围massrange质谱仪所能测量的质荷比下限和质荷比上限之间的范围0[GB/T*****—2015,定义4.7]3.4质量分辨率massresolution质谱仪分辨两个相邻质谱峰的质量差的能力0[GB/T*****—2015,定义4.15]3.5信噪比signaltonoiseration被测样品信号强度S与基线噪声强度N的比值，即S/No注：

该比值与噪声强度峰值的算法有关。

——信号的最大峰值与基线噪声的最大峰值之比，称峰峰比（P/P）;——信号的最大峰值与基线噪声的最大峰值/2之比，称半峰比（P/P）/2；

——信号的最大峰值与基线噪声的均方根峰值之比，称均方根比（RMS）0[GB/T*****—2015,定义4.20]3.6扫描速度scanspeed单位

[GB/T*****—2015,定义4.23]3.8保留

[GB/T*****—201二，定义7.6]3.9灵敏度sensitivity在规定的条件下，对于某个质谱峰,仪器对单位样品所产生的响应值。

[GB/T6041—2002,定义2.2]3.10携带污染carryover反应混合物中不属于它的材料的引入。

[GB/T*****.1—2013,定义A.3.8]3.11线性linearity给出与样本中被测量的值直接成比例的测得量值的能力。

[GB/T*****.1—2013,定义A.3.21]3.12精密度precision在规定条件下，对同一或相似被测对象重复测量得到测量示值或测得量值间的一致程度。

[GB/T*****.1—2013,定义A.3.29]4技术要求4.1正常条件液质联用仪在下列条件下应能正常工作：

a）电源电压:

220V士22V,50Hz士1Hz；

b）环境温度：

15°C〜25°C；

c）相对湿度：

不大于75%。

注：

4.1a）〜C）中的条件与制造商标称的条件不一致时，以产品规定的条件为准。

4.2外观外观应满足如下要求：

a）外观应整洁，铭牌和标志应清晰；

b）紧固件连接应牢固可靠，不得有松动，旋钮、按键及开关应工作正常。

4.3质量范围一级质量分析器（MS1）、二级质量分析器（MS2X适用时）可测定的质荷比犿狕范围需达到制造商声称的质量范围。

4.4质量准确性与质量分辨率应分别满足如下要求：

a）质量准确性：

与理论质荷比的误差在士0.2卩范围内；

b）质量分辨率:

半峰宽（FWHM）可调节小于0.84.5扫描速度仪器扫描速度不低于1000m/s04.6输液泵流速准确度设定流速为0.5mL/min时，实测流速输出误差在士2%范围内。

4.7自动进样器与色谱柱恒温箱准确度应分别满足如下要求：

a）自动进样器：

实测温度在设定温度士2.0°C范围内；

b）色谱柱恒温箱：

实测温度在设定温度士2.0°C范围内4.8自动进样器线性自动进样器线性回归系数r应大于0.990。

4.9灵敏度用正离子模式和负离子模式分别测定，正离子大于0.4/pg,负离子大于0.8/pg。

4.10精密度应满足如下要求：

a）峰面积的变异系数CV应不大于8.0%;b）保留

4.11线性制造商应明确用利血平测定时的线性范围，线性范围应不小于3个数量级（如10-1000）,线性回归系数广应大于0.990。

4.12携带污染率携带污染率应不大于0.05%。

4.13软件应满足如下要求：

a）能控制质谱仪各模块、校准仪器、采集数据、批处理数据；

b）支持保存/打开谱图数据、方法文件；

c）将采集到的谱图进行平滑、自动积分面积、手动积分面积等处理；

d）用户访问控制：

用户身份鉴别方法（用户名和密码），权限（管理员用户具有全部权限，管理员用户可动态分配其他用户权限）;e）根据用户需要，可定制模板，自动给岀定量结果；

f）仪器具有声音、光及屏显对各种异常情况进行报警的功能。

4.14环境试验应符合GB/T*****中适用条款的要求。

4.15电气安全应符合GB4793.1^B47p*＞、GB4793.9,YY0648中适用条款的要求。

4.16电磁兼容应符合GB/T*****.1.GB/T*****.26中适用条款的规定。

5试验方法5.1正常工作条件液质联用仪在4.1规定的条件下可以正常运行。

5.2外观以正常或矫正视力观察以及手动检查，结果应符合4.2的要求。

5.3质量范围液质联用仪按照操作运行，在全质量范围扫描模式下采集数据，得到质量范围谱图，在质谱图中得到的质荷比的最大值与最小值区间为质量范围，结果应符合4.3的要求。

45.4质量准确性与质量分辨率液质联用仪按照操作说明运行，待稳定后使用仪器配套溶液对仪器进行质量校准后，采集数据并获得质谱图，重复测试3次。

在全质量扫描范围内高、中、低端各选取至少1个质荷比的质谱峰，分别计算各自实测数值的3次平均值，按照式

（1）计算，选取计算结果绝对值最大的数值作为质量准确性（保留正负符号及2位有效数字），结果应符合4.4a）的要求。

在全质量扫描范围内高、中、低端各选取至少1个质荷比的质谱峰，得到半峰宽（FWHM）,所得结果均应满足4.4b）的要求。

Da,=Mt—M0,

（1）式中：

Da.——第z个质谱峰的质量准确性，单位为原子质量单位（u）;M,——第z个质谱峰3次测量的平均值，单位为原子质量单位（u）;Mo.——第z个质谱峰的理论值，理论值采用物质组成元素计算数值,单位为原子质量单位（u）注:

除特殊说明外，均采用电喷雾电离源（ESI）正离子模式进行测试。

5.5扫描速度在不进样的条件下，设定质荷比m/z扫描范围100〜600,扫描速度设定到最大值，连续扫描5mm,根据式

（2）计算实测扫描速度，结果应符合4.5的要求。

M°XNV0=

（2）式中：

Vo扫描速度，单位为原子质量单位每秒（u/s）；

M一扫描范围，单位为原子质量单位（u）；

N——扫描次数；

T扫描

5.6输液泵流速准确度可使用下列方法之一进冇吩证，标准大气压下不同温度时纯水密度参见附录B,结果应符合4.6的要求：

a）以纯水为流动相，将数字温战卄探#入流动相内，测量此时流动相的温度；

设定输液泵流速为0.5mL/min.充分灌注冲洗流路g,在,饌相岀口处用事先称重过的5mL洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集10miR冒出的?

應ft相，在分析天平上称重，分别测定3次，按照式（3）、式（4）计算输液泵流速准确度。

F—F、Ss=―Z1C#；

3“（3）FsF,=■＇/100%•……（4）pt式中：

Fm——同一设定流量3次测量的平均值，单位为毫升每分（mL/min）;Fs流量设定值，单位为毫升每分（mL/min）；

八——流量实测值，单位为毫升每分（mL/min）；

W2容量瓶+流动相重量，单位为克（g）;Wi容量瓶重量，单位为克（g）;P——试验温度下流动相密度，单位为克每毫升（g/mL）；

t收集流动相的

b）以纯水为流动相，设定输液泵流速为0.5mL/min，充分灌注冲洗流路后，使用流量计对输液泵流速进行监测，每隔一定

F.—FSS=—vX100%（5）Fv式中：

Ssi流量输出误差,%；

F——第i次流量实测值，单位为毫升每分（mL/mm）；

Fv流量设定值，单位为毫升每分（mL/min）。

5.7自动进样器和色谱柱恒温箱的温度准确度设置自动进样器温度为10.0°C，色谱柱恒温箱温度为40.0°C，将数字温度计探头分别放置于自动进样器和色谱柱恒温箱合适位置，待温度显示值稳定后，每隔5mm记录1次温度计测定值，共7次，按式（6）计算测定值与设定值之差，为该温度下的设定值误差，选取测试结果中最大值作为最终结果，应符合4.7的要求。

ATS=T.—Te（6）式中：

——温度设定值误差，单位为摄氏度（°C）；

T.——第，次测定值，单位为摄氏度（笆）；

To——温度设定值，单位为摄氏度（°C）。

5.8自动进样器线性使用利血平溶液（例如1ng/mL）,在满足制造商声称的最大进样体积条件下选择有代表性的至少5个进样体积进样，将备样本分别重复测定3次，记录测量结果。

将测定的色谱峰面积结果平均值与进样体积用最小二乘法进行线性拟合，得到线性回归方程，并计算线性回归的相关系数广，结果应符合4.8的要求。

5.9灵敏度a）采用正离子模式，前处理方法参见附录A,注入适当浓度（例如1pg/ML）的他克莫司样本一定体积，采集离子821-768；

采用负离子模式，注入适当浓度（例如1pg/gL）的雌三醇样本一定体积，采集离子287-145,得到质量色谱图，根据式（7）、式（8）计算灵敏度，结果符合4.9的要求。

b）釆用正离子模式，前处理方法参见附录A,注入适当浓度（例如1pg/卩1扌鬲祂克莫司样本一定体积，采用多反应监测模式，采集离子821；

采用负离子模式，注入适当浓度（例如1pg/ML）的雌三醇样本一定体积，采集离子287,得到质量色谱图，根据式（7）、式（8）计算灵敏度，结果符合4.9的要求。

S/N==（7）H噪声式中：

S/N——信噪比；

Hm/z——子离子积分后的峰高；

H噪声——基线噪声，需在他克莫司（雌三醇）峰后的0.5min〜1.0min范围内选择。

灵敏度（8）式中：

C——样本浓度；

V——进样体积。

注:

信噪比应在50〜100。

5.10精密度取灵敏度指标中各项目溶液，同一次前处理后连续进样20次，进样量与灵敏度指标中一致，采用MRM（或SRM）采集模式，采集质量色谱图，按质量色谱峰进行面积积分，计算色谱峰的峰面积的CV和保留

5.11线性将接近线性区间上限的高浓度的样本（利血平溶液）按照一定比例稀释为至少5个浓度，其中低浓度样本接近线性区间的下限，将各浓度的样本分别重复测定3次,记录测量结果。

将测定结果的平均值与理论浓度或稀释比例用最小二乘法进行线性拟合，得到线性回归方程，并计算线性回归的相关系数广，结果应符合4.11的要求。

5.12携带污染率以线性高浓度样本和蒸f留水作为待测样本，按照高浓度样本、高浓度样本、高浓度样本、零浓度样本、零浓度样本、零浓度样本的顺序为1组，在仪器上进行测定，共进行5组测定。

每1组中第3个样本的测定值为A”，z为该测定组序号；

第4个样本的测定值为A,’，第6个样本的测定值为A!

6。

按照式（9）计算每组的携带污染率，取其中携带污染率最大值作为结果，应符合4.12的要求。

100%（9）式中：

K,——第I组的携带污染,率5.13软件通过检查，予以验证,应符合4.13的要求。

’5.14环境试验要求按照GB/T*****中适用条款的要求进行检测，应符合4.14的要求。

5.15电气安全要求按照GB4793.1,GB4793.6、GB4793.9、YY0648中适用条款的要求进行检测，应符合4.15的要求。

5.16电磁兼容性要求按照GB/T*****.1和GB/T*****.26适用条款的要求进行检测，应符合4.16的要求。

6标签和使用说明应符合GB/T*****.3的规定。

7包装、运输和贮存质谱仪的包装、贮运图示标志应符合GB/T191的规定。

7.1包装包装应符合下列要求：

a）包装所使用的图示标志应符合GB/T191的规定；

b）包装应能保证分析仪免受自然和机械性损坏；

c）包装箱内应附有使用说明书。

7.2运输按照制造商规定的要求进行运输。

7.3贮存按照制造商规定的要求进行贮存。

附录A（资料性附录）样液配制及处理方法A1溶液配制自动进样器线性、灵敏度、精密度、线性、携带污染率检测方法中所用溶液配制见表A.1。

表A.1配制和稀释用溶剂溶剂溶剂体系溶剂170:

30（体积比）的乙腈:

水混合溶剂，含甲酸0.1%（体积比）溶剂2甲醇溶剂3乙醇利血平溶液用溶剂1配制和稀释他克莫司溶液用溶剂2配制和稀释雌三醇溶液用溶剂3配制和稀释注1：

制备溶液的物质均指100%含量，若不足，应按照纯度进行换算。

注2：

贮存在4°C〜8笆，密封以避免溶剂挥发。

A.2基质样本前处理方法A.2.1他克莫司在950gL全血样.本『加入20ng/mL他克莫司溶液50/L,室温下混匀8h后（摇床），取50gL样本加入1000/L含25mmol/L硫酸锌的50%甲醇水进行蛋白沉淀，混合均匀后，在4°C条件下静置5min.14000g离心5min辰里上璽監上机（上机液澄清透明）。

仪器检测条件：

色谱柱采用Ci,柱，流动相A为含2mmol/L乙酸铉的0.1%甲酸甲醇；

流动相B为含2mmol/L乙酸俊的0.1%甲酸水；

离子对为821-768（单四级杆采集离子821）0A.2.2雌三醇在950/L空白血清样本中加入20ng/mL雌三醇溶液50/L后，涡旋混合5min,在室温下平衡30min后，取200ML样本加入1mL正己烷/乙酸乙酯（1：

1,体戒〔比）:

灣售混匀，在振荡器上振荡混合10min后放入离心机以13OOOg离心10min,用移液器取上清液800至试管中，于45°C氮气流下吹干，用800甲醇/水（50:

50,体积比）复溶后上机。

仪器检测条件釆用色谱柱：

C®柱，流动相B为纯甲醇（有机相）；

流动相A为0.2taml.l/L氟化铉水溶液（水相）；

离子对为287—145（单四级杆采集离子287）。

附录B（资料性附录）纯水的密度标准大气压下不同温度时纯水的密度见表B.l0表B.1标准大气压下不同温度时纯水的密度密度/（kg/m3）密度/（kg/m3）4999.972997.5375999.9644997.2957999.9405997.0438999.9016996.7829999.8487996.51110999.7818996.23111999.6999995.94312999.605995.645013999.4971995.339999.377995.024999.244994.700999.099998.943998.595993.681998.404993.325998.203992.962997.991992.591997.769992.21223994.029