植物组织培养实习报告.docx
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植物组织培养实习报告
植物组织培养实习报告
篇一：
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告
一、实验目的
1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；
2．通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；
4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理
（一）植物组织培养
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
（二）植物细胞的全能性
植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（三）组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材
高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻
璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料
豌豆种子
五、实验药品
药品、70%酒精、%升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、84消毒液、蔗糖、琼脂等。
六、实验步骤
（一）培养基母液的配制
表培养基个成分的含量（单位：
mg/L）
表培养基所需母液以及扩大倍数
名称大量元素微量元素Ca盐Mg盐Fe盐有机肌醇激素
扩大倍数5050505050100100100
定容体积（ml）
50050050050050020020050
吸取毫升数/L
202020202010105
（注：
吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）
表3.配制母液所需的药品及称取量
（注：
根据表1与表2计算各物质的称取量）
药品名称NH4NO3KNO3KH2PO4
称取量（mg）
41250475004250
药品名称KI
Na2MnO4?
2H2OCuSO4?
5H2O
称取量（mg）
CaCl2?
2H2O11000CoCl2?
6H2OMgSO4?
7H2O9250肌醇2000FeSO4?
4H2O695甘氨酸40Na-EDTA盐酸硫胺素8MnSO4?
7H2O盐酸吡哆醇10ZnSO4?
7H2O215烟酸10H3BO3155
（1）MS大量元素母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。
名称
重量（mg）
名称
重量（mg）
NH4NO3KNO3
4125047500
KH2PO4CaCl2·2H2O
425011000
（2）MS微量元素母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。
名称KIH3BO3MnSO4·7H2OZnSO4·7H2O
重量（mg）155215
名称Na2MoO4·2H2OCuSO4·5H2OCoCl2·6H2O
重量（mg）
（3）MS有机母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至200ML存放于冰箱中备用。
名称肌醇烟酸盐酸吡哆醇
重量（mg）
名称盐酸硫胺素甘氨酸
重量（mg）
20001010
840
（4）MS铁盐母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。
名称EDTA二钠
重量（mg）
名称FeSO4·4H2O
重量（mg）
695
（5）MS钙盐母液的配制
参考表3称取11000mg的CaCl2?
2H2O用蒸馏水溶解定容至500ML，保存于冰箱备用。
（6）MS镁盐母液的配制参考表3称取9250mg的MgSO4?
7H2O用蒸馏水溶解定容至500ML，保存于冰箱备用。
（7）MS肌醇母液的配制参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ML，保存于冰箱备用。
（8）MS激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。
一般取100mg配成100ml母液。
（二）培养基的配制
以配制1L的MS培养基为例进行如下操作：
（1）取1L的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；
（2）分别取
（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌；
（3）称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；
（4）称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解；（5）定容至1L，加入激素母液，用NaOH调左右；
（6）将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧；
（7）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；
（8）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。
（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法
具体操作步骤：
（1）高压锅放水至平把架；
（2）把包扎好的培养基装入高压锅；
（3）盖上热压锅盖,上紧螺帽（注意对角拧紧螺帽）关上气阀和安全阀；（4）然后接通电源；
（5）压力计升至时，打开放气阀,排除冷空气（此步很重要）；
（6）排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：
当压力锅指针升至时，关闭电源，待指针下降至时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟；
（7）灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀（注意要逐渐放气）待
篇二：
植物组织培养教学实习项目总结
植物组织培养教学实习项目总结
作物生产技术101班姓名：
马一良
一：
目的意义
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
运用植物组织培养技术的意义：
1、快速繁殖优良种苗。
2、无病毒苗的培养。
3、在育种上的应用4、工厂化育苗。
5：
保存种质资源。
6：
基因工程的运用二：
工作内容
1：
学习组培相关知识
2：
了解相关的实验室及其设备
3：
试管苗快速繁衍技术
4：
植物脱毒技术
5：
植物组织培养技术的一般培养方法
6：
种质立体培养
7：
MS培养基的制备
8：
灭菌技术
9：
无菌操作技术
10：
试管苗的炼苗与移栽培养步骤
第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。
把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。
置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。
易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严
重时特别有用。
洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。
洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。
当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。
要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。
用70%酒精浸10～30秒。
由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。
处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。
第三步是用灭菌剂处理。
表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。
第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：
①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。
②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。
③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。
④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。
⑤在消毒液中加入浓度为—%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面张力，达到更好的消毒效
配制培养基
（1）愈伤组织诱导培养基：
MS培养基（蔗糖含量为10g/L，2,4–D含量为2mg/L，琼脂10g/L）。
（2）试验培养基：
在MS培养基中加入IAA和6–BA。
吲哚乙酸（IAA）先用少量mol/LNaOH溶解，6-苄基氨基腺嘌呤先用少量mol/LHCl溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。
仪器设备
培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL），
烧杯，量筒，组培瓶，组培盖或封口膜，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸
培养基灭菌
将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH，趁热分装于100mL组培瓶中，每瓶约20mL。
待培养基冷却凝固后，盖上组培盖，或盖上封口膜并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中121℃（1kg/cm2）下灭菌20min。
取出组培瓶放在台子上，冷却后备用。
接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。
三：
体会
植物组织培养的特点：
1、占用空间小，不受地区、季节限制。
2、培养脱毒作物。
3、培养周期短。
4、可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品。
5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物。
6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽。
7、解决有些植物产种子少或无的难题。
8、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征。
9、投资少，经济效益高。
10、繁殖方式多，试用品种多
11、培养条件可以人为控制。
植物组织培养技术的前景与发展：
世界上一些先进国家园艺植物组织培养技术的迅速发展从60年代就巳经开始，并随着生长、分化规律性探索逐步深化，到了70年代仅花卉业就已在兰花、百合、、矮牵牛等二十几种花卉幼苗生产上建立起大规模试管苗商品化生产，到1984年世界花卉幼苗产业的生产总值已达二十亿美元，其中美国花卉幼苗市场总值为六亿多美元。
由于组织培养技术的应用，加快了花卉新品种的推广。
以前靠常规方法推广一个新品种要几年甚至十多年，而现在快的只要l～2年就可在世界范围内达到普及和应用。
我国采用快速繁殖技术，也使优良品种达到迅速的推广和应用。
如广东切花菊“黄秀风”的应用，使菊花变大，长势加强，花色鲜艳，抗病力增强，打开了进入香港市场的渠道，使三十多种观叶植物的推广很快遍及全国，丰富了人们的生活；并将自然界的几百个野生金钱莲品种繁种驯化，培养了一批园林垂直绿化的材料，促进了园林业的发展。
植物组织培养也存有一定的困难，首先是繁殖效率与商品需要量的矛盾，有些作
物由于繁殖方法尚未解决，因而无法满足生产的需要，其次是在培养过程中如何减少变异株的发生。
更重要的是应降低组培苗工厂化生产的成本，只有降低成本，才能更好的投产应用。
总之，随着组织培养这一技术的发展及各种培养方法的广泛应用，使这一技术在遗传育种、品种繁育等方面表现出了巨大的潜力，特别是生物工程和工厂化育苗实施以后，它将以新兴产业的面目在技术革命中发挥重大作用。
篇三：
植物组织培养总结
1绪论
植物组织培养的一般概念
?
广义的组织培养，不仅包括在无菌条件下利用人工培养基对植物组织的培养，而且包括对原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养。
?
Gamborg曾根据所培养的植物材料的不同，把组织培养分为悬浮细胞培养、器官培养（胚、花药、子房、根和茎的培养等）、茎尖分生组织培养和原生质体培养。
其中愈伤组织培养是一种最常见的培养形式。
?
则指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
?
培养以外，其他几种培养形式最终也都要经历愈伤组织才能产生再生植株，此外，愈伤组织还常常是悬浮培养的细胞和原生质体的来源。
?
在组织培养中，当我们把分化组织中的不分裂的静止细胞，放在一种能促进细胞增殖的
培养基上以后，细胞内就会发生某些变化，从而使细胞进入分裂状态。
一个成熟细胞转变为分生状态的过程叫做脱分化。
?
体。
?
一个成熟的植物细胞经历了脱分化后之所以还能再分化而形成完整的植株，是因为这些
细胞具有全能性。
所谓全能性，就是说，任何具有完整的细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。
对已分化的细胞的全能性的实验研究表明，至少在某些情况下，发育和分化过程并不导致细胞中遗传信息的丢失或不可逆的钝化，所涉及的只是这些遗传信息表达调控机制的改变。
?
有关全能性的肯定实验证据是Steward等人（1958）在以胡萝卜根组织为外植体的组织培
养实验中得到的。
当他们把栽培胡萝卜次生韧皮部薄片培养在一种含有椰子汁的固体培养基上时，产生了由简单的薄壁细胞组成的愈伤组织。
把这些愈伤组织转入到成分相同的液体培养基中并不断振荡，又产生了由单个细胞和小细胞团组成的悬浮液。
?
经过对这些细胞和大小不同的细胞团的显微镜检确定，细胞团是那些从愈伤组织上散落
下来的单个细胞发生分裂后但子细胞没有分离的产物。
若不继代，由于这些细胞团在培养基中继续生长，结果就会在上面出现根原基。
当把长了根的细胞团转到固体培养基表面上以后，随着茎芽的出现形成了一个完整的小植株，从而证实了细胞的全能性。
?
只是一种可能性，由以上的介绍我们可以看到，满足两个条件：
一是要把这些细胞从植物体其余部分的抑制性影响下解脱出来，也就是?
一个已分化的细胞要表现它的全能性，必须经历上面所说的两个过程，即首先要经历脱
分化过程，然后再经历再分化过程。
?
生状态的过程。
?
再分化是指在植物组织培养过程中，分生状态的细胞在激素的作用下分化转变为成熟组织或器官的过程。
?
芽和根是在愈伤组织的不同部位分别独立形成的，形成的时间可能也不一致，它们为单极性结构，里面各有维管束与愈伤组织相连，但在不定芽和不定根之间并没有共同的维管束把二者连在一起，另一种是胚胎发生方式，即在愈伤组织表面或内部形成很多胚状体，或称体细胞胚，它们经历的发育阶段与合子胚相似，成熟胚状体的结构也与合子胚相同。
胚状体是双极性的，有共同的维管束贯穿两极，可脱离愈伤组织在无激素培养基上独立萌发。
?
一般认为，愈伤组织中的不定芽起源于一个以上的细胞，而体细胞胚只起源于一个细胞，
因此由体细胞胚长成的植株各部分的遗传组成应当是一致的，不存在嵌合现象，不过也有些作者在这类再生植株中同样发现了嵌合现象，因此认为体细胞胚也起源于一个以上的细胞。
?
的单细胞来源的培养物。
我们称之为胚状体。
?
在很多植物中，胚状体的结构都是相当典型的，但在有些植物如小麦中，幼龄胚状体的
盾片往往变大变绿，形成通常所描述的“叶状结构”，并且常常出观早熟萌发的现象。
?
①最根本的特征是具有两极性，在发育的早期阶段，从其方向相反的两端分化出茎端和根端，而不定芽或不定根都为单向极性。
②胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系，而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系。
③胚状体的维管组织的分布是独立的“v”字形，而不定芽的维管组织无此现象。
?
?
通过胚状体途径产生再生植株有3个显著的优点，
状体数目往往比不定芽的数目多（例如在一个离体培养的烟草花药上可以产生200个以上的胚状体）;其次，胚状体形成的速度快，第三，胚状体结构完整，一旦形成，一般都可直接萌发形成小植株，因此成苗率较高。
1．2植物组织培养的发展简史
?
虽然组织培养技术的蓬勃发展只是近五十年来的事，但它的整个历史可以追溯到十九世
纪末和二十世纪初。
?
从那时起到现在，组织培养的发展过程大致可以分为三个阶段：
1．2．1探索阶段（二十世纪初至30年代中）
?
本世纪初，在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说的推动下，家Haberlandt提出了高等植物的器官和组织可以不断分割，直至分到单个细胞的观点。
为了论证这一观点，他在加入了蔗糖的Knop溶液中培养单个离体细胞，所选用的材料是小野芝麻和凤眼兰的栅栏组织和虎眼万年青属植物的表皮细胞等。
遗憾的是，虽然在栅栏细胞中他明显看到了细胞的生长、细胞壁的加厚和淀粉的形成等，但没有一个细胞在培养中能够发生分裂。
?
是已经高度分化了的细胞，第二，所用的培养基过于简单，特别是培养基中没有包含诱导成熟细胞分裂所必需的生长激素，这是因为生长激素在当时还没有发现。
然而，做为植物组织培养的先驱者，Haberlandt的贡献不仅在于首次进行了离体细胞培养的实验，而且在其1902年发表的“植物离体细胞培养实验”的报告中，还提出了胚囊液在组织培养中的作用和看护培养法等科学的预见。
?
自Haberlandt的实验之后，直到1934年White培养番茄离体根尖的成功，在其间的32年
时间里，植物组织培养技术几乎没有什么进展，只是在以下两个方面进行了一些初步的探索。
?
养基上培养至成熟，从而证明了胚培养在植物远缘杂交中利用的可能性；
1．2．2奠基阶段（30年代中至50年代末）
?
到了30生素对植物生长的重要意义，二是发现了生长素是一种天然的生长调节物质。
?
导致这两个发现的主要是White和Gautheret的实验。
1934年，White由番茄根建立了第
一个活跃生长的无性系，使根的离体培养实验首次获得了真正的成功。
起初，他在实验中使用的培养基包含无机盐、酵母浸出液和蔗糖。
后来（1937），他用3种B族维生素，即吡哆醇，硫胺素和烟酸，取代酵母浸出液获得成功。
?
在这个以后被称为White培养基的合成培养基上，他把某些于1934年建立起来的根培养
物一直保存到1968年他逝世前不久。
与此同时，Gautheret（1934）在山毛柳和黑杨等形成层组织的培养中发现，虽然在含有葡萄糖和盐酸半胱氨酸的Knop溶液中，这些组织也可以不断增殖几个月，但只有在培养基中加入了B族维生素和IAA以后，山毛柳形成层组织的生长才能显著增加。
?
由于这些实验揭示了B族维生素和生长素的重要意义，又直接导致了1939年Gautheret
连续培养胡萝卜根形成层获得首次成功。
同年，White由烟草种间杂种的瘤组织，
Nobecourt由胡萝卜，也建立了类似的连续生长的组织培养物。
?
40年代和50年代初期，活跃在植物组织培养领域里的研究者以Skoog为代表，研究的主
要内容是利用嘌呤类物质处理烟草髓愈伤组织以控制组织的生长和芽的形成。
Skoog（1944）以及Skoog和崔澂等（1951）发现，腺嘌呤或腺苷不但可以促进愈伤组织的生长，而且还能解除培养基中生长素（IAA）对芽形成的抑制作用，诱导芽的形成，从而确定了腺嘌呤与生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一。
?
这些实验结果导致了激动素的发现和以后利用激动素和生长素在组织培养中控制器官
分化工作的开展。
?
在40年代，组织培养技术的另一项发展是引入到培养基中，使曼陀罗的心形期幼胚能够离体培养至成熟。
到50年代初，由于Steward等在胡萝卜组织培养中也使用了这一物质，从而使椰子汁在组织培养的各个领域中都得到了广泛应用。
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50年代开始以后，植物组织培养的研究日趋繁荣，10年当中引入注目的进展就有以下6
项：
1952年，Morel和Martin首次证实，通过茎尖分生组织的离体培养，可以由已受病毒侵染的大丽花中获得无毒植株。
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1953～1954年，Muir进行单细胞培养获得初步成功。
方法是把万寿菊（Tageteserecta）
和烟草的愈伤组织转移到液体培养基中，放在摇床上振荡，使组织破碎，形成由单细胞和细胞聚集体组成的细胞悬浮液，然后通过继代培养进行繁殖。
Muir等还用机械方法由细胞悬浮液和容易散碎的愈伤组织中分离得到单细胞，把它们置于一张铺在愈伤组织上面的滤纸上培养，使细胞发生了分裂。
这种“看护培养”技术揭示了实现Haberlandt培养单细胞这一设想的可能性。
?
1955年，Milier等由鲱鱼精子DNA中分离出一种首次为人所知的细胞分裂素，并把它定
名为激动素（kinetin）。
现在，具有和激动素类似活性的合成的或天然的化合物已有多种，它们总称为细胞分裂素（cytokinin）。
应用这类物质，我们就有可能诱导已经成熟和高度分化的组织（如叶肉和干种子胚乳）的细胞进行分裂。
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培养中，根和茎的分化是生长素对细胞分裂素比率的函数，
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促进生根，低时促进茎芽的分化，二者浓度相等时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。
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1958年，Wickson和Thimann指出，应用外源细胞分裂素可促成在顶芽存在的。
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后来，类植物到花卉和果树的快速繁殖上。
?
胚。
这是一种不同于通过芽和根的分化而形成植株的再生方式。
现在知道有很多物种都能形成体细胞胚。
在有些植物如胡萝卜和毛茛中，事实上由植物体的任何部分都可以得到体细胞胚。
1．2．3迅速发展阶段（60年代至现在）
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60年代以来组织培养技术所以得到了迅速发展，
?
一方面是由于有了前60年建立的理论和技术基础，
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种、良种繁育和遗传工程技术相结合，在植物改良中发挥了重要的作用，并且在若干方面已经取得了可观的经济效益。
60年代以来组织培养技术的发展，概括起来可以分为三个方面：
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原生质体培养的热情。
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1971年，Takebe等在烟草上首次由原生质体获得了再生植株，这不但在理论上证明了
除体细胞和生殖细胞以外，无壁的原生质体同样具有全能性，而且在实践上可以为外源基因的导入提供理想的受体材料。
?
在1985年以前，作为粮食和饲料主要
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