细胞工程课程设计模板参阅版.docx
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细胞工程课程设计模板参阅版
燕山大学
课程设计说明书
透明质酸对牛卵母细胞体外成熟影响的设计
学院（系）：
环境与化学工程学院
年级专业：
00级生物制药
学号：
040110050001
学生姓名：
赵宏伟
指导教师：
赵红卫
教师职称：
讲师
燕山大学课程设计（论文）任务书
院（系）：
XXXXXXXX基层教学单位：
ＸＸＸＸＸ
学号
040110050001
学生姓名
赵宏伟
专业（班级）
00级生物制药
设计题目
透明质酸对牛卵母细胞体外成熟的影响
设
计
主
要
内
容
1.HA浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响
2.HA在不同基础培养液中对卵母细胞成熟的影响
3.OCS、BSA与HA对牛卵母细胞体外成熟的影响
设
计
要
求
1.要有明确设计的目的
2.设计合理的操作方式
3.设计出合理的测定指标
4.设计的内容要与题目基本一致
5.设计总结与分析（设计特点及补充说明，鉴别比较分析，个人体会等）
工
作
量
1.至少阅读15篇以上的相关科技文献
2.设计文字至少在15000字以上
工
作
计
划
8.27——8.28查阅资料
8.29——8.31整理文献
9.1——9.5提出设计方案
9.6——9.10撰写说明书
9.11——9.12检查内容，准备答辩
9.13——9.14答辩
参
考
资
料
[1]方岩雄,吕钱江等.超临界二氧化碳流体萃取分离技术[J].精细与专用化学品,2002,10（6）:
17-19,21.
[2]王欣,陈庆华，李元瑞.大蒜品种及预处理条件对超临界C02萃取效果的影响[J].食品与机械，2003,
（2）:
13-14.
[3]王欣,李元瑞.眼临界充体萃取过程的优化选择[J].中国油脂,2000,25（6）:
200-203.
指导教师签字
基层教学单位主任签字
说明：
学生、指导教师、基层教学单位各一份。
年月日
燕山大学课程设计成绩评定表
指导教师成绩评定（满分100分）：
得分
设计内容的切题程度：
满分20分（）
设计内容立题合理性：
满分10分（）
设计内容的规范程度：
满分15分（）
设计书前后内容完整：
满分20分（）
设计说明说排版成绩：
满分15分（）
设计说明书的工作量：
满分5分（）
设计过程平时成绩：
满分10分（）
总分成绩：
指导教师：
年月日
答辩成绩评定：
（满分100分）得分
仪表成绩：
满分20分（）
口语表达：
满分30分（）
幻灯质量：
满分20分（）
设计分析：
满分40分（）
总分
评定人：
年月日
设计撰写成绩
（70%）
答辩成绩
（30%）
合计
教师签字：
年月日
200X-201XX季学期
生物工程专业课程设计
结题论文
透明质酸对牛卵母细胞体外成熟影响的设计
学院（系）：
环境与化学工程学院
年级专业：
00级生物制药
学号：
040110050001
学生姓名：
赵宏伟
指导教师：
赵红卫
教师职称：
讲师
摘要
{说明：
摘要就是整篇材料的浓缩，通过摘要的信息，读者能够知道你做了什么；大体300-500字，把这部分删除，是用来解释的}
本设计拟定在改良的基础培养液中添加HA，主要探讨HA对牛卵母细胞成熟的影响。
设计内容主要分为三部分：
HA浓度对牛卵母细胞体外成熟影响的设计；HA在不同基础培养液中对卵母细胞成熟影响的设计；OCS、BSA与HA对牛卵母细胞体外成熟影响的设计。
第一部分设计拟定探索出HA能够提高卵母细胞成熟的最佳浓度，为HA对卵母细胞成熟影响的研究奠定基础；第二部分设计是在第一部分的基础上分析HA对母细胞成熟的影响，拟定探索基础培养基是否影响HA的效果；第三部分设计就是在前两部分的基础上，探讨新发现的HA是否由于传统的添加物OCS、BSA。
通过本次设计，拟定探讨HA能否有效地提高牛卵母细胞的成熟率，并确定最佳的浓度范围，进一步与传统添加物比较，新型的HA能否代替OCS、BSA，成为一种成分确定的卵母细胞成熟添加物。
关键词：
透明质酸；牛卵母细胞；体外成熟；卵裂率
目录
第一部分：
文献综述
1.XXXXXXXXX1
1.1XXXX1
1.2XXXX1
1.3XXXX1
1.4XXXX2
2.XXXXXXXXX2
2.1XXXXX2
2.2XXXXX3
2.3XXXXX3
2.4XXXXXX3
2.5XXXXX3
2.6XXXXX4
2.7XXXXX4
2.8XXXXX4
3.XXXXXXX4
3.1XXXXX4
3.2XXXXX4
4.XXXXXX4
4.1XXXX4
4.2XXXXX5
4.3XXXXXX7
4.3.1XXXX7
4.3.2XXXXX8
4.3.3XXXXXX9
4.4XXXXX9
第二部分：
课程设计部分
1.材料11
1.1XXX11
1.2XXXX11
1.2.1XXX11
1.2.2XXXX11
1.3XXX11
1.4XXX11
2.方法11
2.1XXX11
2.2XXXX11
2.3XXXX12
2.4XXXX12
2.5XX12
2.6XXXXX12
2.7XXXXX12
3.设计13
3.1HA浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响13
3.2OCS、BSA与HA对牛卵母细胞体外成熟的影响13
3.3HA在不同基础培养液中对卵母细胞成熟的影响13
4.分析与总结14
参考文献14
第一部分文献综述
{文献综述 就是对你研究或者设计题目相关材料的归纳、总结与分析，得到你要的信息，发现此部分内容的不足！
你的设计就是弥补不足或者填补空白！
是问题得到很好的解决}
7500字左右
1.XXXXXX（标题四号（黑体））
1.1XXXX（小四黑体）
1.1.1XXXX（小四宋体）
XXXXXXXXXXXXXXX（正文字体宋体小四，固定值21磅）
2.XXXX
2.1ＸＸＸＸＸＸ
ＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ（正文字体宋体小四固定值21磅）
第二部分课程设计部分
透明质酸对牛卵母细胞体外成熟影响的设计
（与正文之间空两行）
（下面部分为设计的引言，就是你为什么要进行这项研究，有什么价值以及你的目的，这也是文献综述的延伸，就是从文献综述中提炼的精华，作为研究或者设计的引子，7500字左右，此部分为解释，应该删除）
随着现代动物生物技术的发展，卵母细胞的需求日益增加，而且卵母细胞的成熟程度直接影响卵母细胞的利用效率，提高卵母细胞成熟的质量将会有益于这一问题的解决。
但是，体外成熟的卵母细胞与体内成熟相比较，支持胚胎发育的潜力有限；因此，进一步模拟卵母细胞体内的生长环境仍然是目前研究的重点。
研究表明，在哺乳动物卵泡液、输卵管和子宫液中存在大量的粘多糖分子[1~4]，透明质酸（hyaluronicacid，HA）便是其中主要成分，它由颗粒细胞、卵丘细胞和上皮细胞分泌[5]，并在牛的卵母细胞、卵丘细胞、早期胚胎和囊胚上发现了其受体[6]，其主要功能是支持细胞粘结和迁移、调节细胞基因表达、蛋白质分泌、细胞增生分化等，影响细胞代谢途径、影响腺苷酸环化酶的活性以及ATP的浓度[7,8]。
国外有人在卵母细胞成熟液中添加HA可代替血清和血清白蛋白（bovineserumalbumin，BSA）使卵母细胞成熟[9]，国内尚无此类研究。
因此，本研究通过在无血清培养基中添加HA对牛卵母细胞进行成熟培养，探索不同浓度的HA对卵母细胞成熟培养的影响，并能否代替BSA和血清使卵母细胞成熟，以期寻找牛卵母细胞无血清成熟培养的较佳途径。
1材料
1.1卵巢
猪卵巢采集自河北省秦皇岛市海滨区新店子屠宰场。
猪宰杀剖腹后，立即无菌剪下卵巢，挑选黄体期和红体较少，卵泡直径约3~5mm、大小均匀的卵巢，使用37℃的PBS缓冲液冲洗干净，置于37℃的PBS缓冲液4h内带回实验室。
1.2实验用的仪器
仪器
厂商
型号
体式显微镜
日本Nikon
SMZ
荧光显微镜
日本Nikon
E600
全自动高压消毒锅
日本Yamato
SM-51
CO2培养箱
美国BINDER
低温台式高速离心机
德国Eppendorf
自动数字天平
AD
EK-120A
液氮罐
Taylar-Wharton
1.3实验药品
药品
厂商
TCM199
GIBCO
Hepes
SIGMA
FCS
SIGMA
FSH
宁波市激素制品有限公司
LH
宁波市激素制品有限公司
PFF
自制
青霉素
大连美罗大药厂
链霉素
大连美罗大药厂
蔗糖
上海生物优先公司
Gly
SIGMA
DMSO
SIGMA
0.25ml细管
北京耀北生物技术公司
四孔板
北京耀北生物技术公司
2.方法
（方法就是具体的试验步骤；解释删除）
2.1卵母细胞的采集
从屠宰场收集卵巢后，放入35℃双抗生理盐水中，用保温瓶在3h内运到实验室，去除血污。
然后用带有18G针头的一次性注射器，抽吸直径2~10mm卵泡中的卵泡液。
吸卵液为TCM199+25mmol/LHEPES+10μg/mL肝素+4.0g/LBSA。
吸出液收集在35mm一次性培养皿中，静置5~10min后，在实体显微镜下挑选形态及颜色正常的、卵丘颗粒细胞层完整、细胞质均匀的卵母细胞。
2.2卵母细胞的成熟培养
收集的卵母细胞用成熟培养液半量冲洗3次，然后移至至少平衡2h培养液滴中，每滴放置约10～20枚卵母细胞，上覆石蜡油，在39℃，5％的CO2和相对饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养22～24h。
成熟培养液为见试验设计。
2.3体外受精
用含有6g/LBSA、3.0µg/mL肝素、3.0µg/L青霉素、1.0µg/mL亚牛黄酸和0.3µg/mL肾上腺素组成的受精液做成30µL受精滴，放入CO2培养箱中平衡1～2h。
然后，用改良的Tyrode’s液离心洗涤解冻精液2～3次，最终用受精液将精子密度稀释至2×106/mL。
在精液洗涤的同时，分离卵丘－卵母细胞复合体（cumulus-oocytecomplexes，COCs）上的卵丘细胞，使卵母细胞和卵丘细胞相互分离，用受精液洗涤3次，每10个卵母细胞移置一个受精滴中。
再用移液器吸取10μL处理好的精液加至受精小滴中，然后覆盖石蜡油，在39℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中进行孵育，48h后检查卵裂率。
3.设计
（设计就是你的核心内容，就是你要如何解决你在任务书中列举的问题——设计的内容，通过什么样手段达到你的目的，这部分与方法不一样，方法只是操作的流程，而不涉及思想，此内容为解释要删除）
3.1HA浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响
将选择的卵母细胞随机分配到HA浓度为0、1.5、3.0、4.5、6.0mg/mL培养液中进行体外培养，以空白组为对照组（CK）。
检查极体排出率，再将成熟的卵母细胞进行体外受精检查卵裂率，以确定HA的最佳浓度。
3.2OCS、BSA与HA对牛卵母细胞体外成熟的影响
将选择的卵母细胞随机分配到含有HA、发情母牛血清（OestrusCalfSerum，OCS）与BSA的mTCM-199中进行体外培养，以HA组为对照组（CK），检查极体排出率，再将成熟的卵母细胞进行体外受精检查卵裂率，探索HA能否代替OCS和BSA。
3.3HA在不同基础培养液中对卵母细胞成熟的影响
将选择的卵母细胞随机分配到含有4.0mg/mLHA的mTCM-199和mSOF培养液中进行体外培养，检查极体排出率，再将成熟的卵母细胞进行体外受精检查卵裂率，确定HA的效果是否与基础培养液有关。
4分析与总结
（此部分内容就是对你的设计的自我评价，通过别人的试验结果或者科学原理进行进一步的论证分析，此部分为解释，应删除）
3.1HA浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响
HA作为一种粘多糖不仅能够改善无血清培养基的物理特性，而且通过降解代谢为细胞成熟提供营养与能量[10]。
本设计，ＸＸＸＸＸＸ
3.2OCS、BSA与HA对牛卵母细胞体外成熟的影响
Stojkovic等[9]认为HA可代替血清支持培养系统，但本设计XXXXXXX。
以上分析表明在无血清培养条件下，HA可代替BSA，但是效果还不及血清。
3.3HA在不同基础培养液中对卵母细胞成熟的影响
Stojkovic等[9]（1999）在SOF-HA液中的卵母细胞成熟率比本研究mTCM-199-HA的结果高，本设计XXXXXXXX
本设计通过在改良的基础培养基中添加HA使牛卵母细胞成熟，初步认为HA在一定的浓度范围内可能对牛卵母细胞的成熟具有促进作用；在无血清培养中拟代替BSA，但是培养的效果可能如血清，因此完全代替血清还需要进一步探讨分析。
另外HA在不同的基础培养基中，对卵母细胞的成熟应该无明显差异。
参考文献
（宋体5号）
[1]PincusG,EnzmamEV.Thecomparativebehaviorsof mammalianeggsinvivoandinvitro[J]ExpMed,1935,62:
665-675
[2]SuchanekE,SimunicV,JureticDandGrizeljV.Follicularfluidcontentsofhyaluronicacid,follicle-stimulatinghormoneandsteroidsrelativetothesuccessofinvitrofertilizationofhumanoocytes[J].FertilityandSterility,1994,62:
347-352.
[3]StojkovicM,PeinlS,StojkovicP,etal.Highconcentrationofhyaluronicacidinculturemediumincreasesthesurvivalrateoffrozenorthawedinvitroproducedbovineembryos[J].Theriogenology,2001,55:
317-356.
[4]KanokK,MiyanoTandKotaS.Effectsofglycosaminoglycansonthedevelopmentofinvitromaturedandfertilizedporcineoocytestotheblastocyststageinvitro[J].BiologyofReprodction,1998,58:
1226-1232.
[5]EppigJJ.FSHstimulateshyaluronicacidsynthesisbyoocyte-cumuluscellcomplexesfrommousepreovulatoryfollicles[J].Nature,1979,281:
483-484.
[6]ValcarcelA,MatosDG,FurnusC.Thehyaluronicacidreceptor（CD44）isexpressinbovineoocytesandpreimplantationalstageembryos[J].Theriogenology,1999,51:
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[7]FraserJRE,LaurentTC,LaurentUBG.Hyaluronan:
itsnature,distribition,functionsandturnover[J].JournalofinternalMedicine,1997,242:
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[8]LaurentTC,FraserJRE.Hyaluronic[J].JournaloftheFederationofAmericansocietiesforExperimentalBiology,1992,6:
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[9]StojkovicM,ThompsonJG,TervitHR.Effectofhyaluronicacidsupplementationoninvitrodevelopmentofbovineembryosinatwo-stepculturesystem[J].Theriogenology,1999,51:
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[10]MarquantLe,GuienneB,Guyader-JolyC,etal.Effectofhyaluronicacidinaserumfreematurationmediumonbovineembryosdevelopment[J].Theriogenology,1998,51:
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[11]FurnusCC,deMatosDG,MartinezAG.Effectofhyaluronicacidondevelopmentofinvitroproducedbovineembryos[J].Theriogenology,1998,49:
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25-44.
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