沉降菌监测规程.docx
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沉降菌监测规程
沉降菌监测规程
一、目的
建立沉降菌监测方法，规范沉降菌监测操作。
二、范围
适用于西厂区车间洁净室、无菌检查室、阳性室、洗衣房、取样间、微生物室的沉降菌监测。
三、职责
检验中心人员负责车间洁净室、洗衣房、取样间的采样工作；负责各部分所需的材料准备、培养、菌落计数，以及无菌检查室、阳性室、微生物室监测的采样内容的执行。
质量中心负责人负责本规程执行情况的监督检查。
四、内容：
1.仪器与用具
1.1培养皿（φ90mm）
1.2恒温培养箱
1.3高压蒸汽灭菌锅
2.监测程序
2.1将已准备好的合格的空白培养皿放入物料缓冲间。
2.2检测人员按人员进入洁净区的要求穿好洁净服，戴好口罩进入洁净室。
2.3按此《沉降菌监测规程（西厂区）》对环境进行监测。
3.测试规则
3.1测试条件
3.1.1温度和相对湿度
沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温度和相对湿度应与生产工艺等要求相适应（温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间）。
3.1.2压差
沉降菌测试前，洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净室（区）之间的压差应当不低于10帕斯卡，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净级别低的洁净室（区）一般要求相对正压。
3.1.3换气次数、空气流速
洁净级别
换气次数（风速）
A级
0.36-0.54m/s
C级
≥25次/h
D级
≥15次/h
3.2测试状态
静态测试：
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
动态测试：
洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
（在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
）
3.3测试时间
3.3.1对单向流，如C级背景下的局部A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
3.3.2对非单向流，如C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
3.4测试方法
采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
3.4.1采样方法
静态：
将已制备好的培养皿按4项的要求及采样点平面图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中0.5h后，再将培养皿盖盖上。
动态：
将已制备好的培养皿按4项的要求及采样点平面图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中4h后，再将培养皿盖盖上。
动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。
3.4.2培养
3.4.2.1全部采样结束后,将培养皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养，时间不少于72h。
3.4.2.2用于检测的培养皿应经过预培养合格后使用，为避免运输过程造成影响，在每次取样时，取3个培养皿与其他采样皿同法操作但不暴露采样，然后与采样后的培养皿同时培养，结果应无菌生长。
3.4.3菌落计数
3.4.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查是否有遗漏。
3.4.3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
3.5测试人员要求
测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.采样点数目及布置
4.1采样次数
每个采样点一般取样一次。
4.2最少采样点数目参照表：
面积（m2）
洁净度级别
A级
C级
D级
＜10
2～3
2
2
≥10～＜20
4
2
2
≥20～＜40
8
2
2
≥40～＜100
16
4
2
≥100～＜200
40
10
3
≥200～＜400
80
20
6
400
160
40
13
注：
表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。
对于非单向流洁净室是指房间的面积。
4.3洁净区灌装间、配制间的沉降菌取样点监测位置根据《沉降菌取样风险评估报告》确定。
不能确定的点根据GB/T16294-2010和2010版GMP附录要求均匀分布沉降菌的取样监控点，具体分布规则如下：
注：
为采样点
4.4工作区采样点的位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。
可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.5最少培养皿数
满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。
洁净度级别
所需培养皿数（φ90mm）
（静态以沉降0.5h计，动态以沉降4h计。
）
A级
14
C级
2
D级
2
5.监测频率
表1：
监测
频次
一车间
二车间
三车间
六车间
无菌室
微生物室
阳性室
取样间
洗衣房
周测
（动态）
灌装间A级区；
灌装间C级区；
配制间；
物料称量间；
男/女二更。
灌装间A级区；
灌装间C级区；
配制间；
物料称量间；
男女二更。
灌装间A级区；
灌装间C级区；
配制一室；
配制二室。
灌装间A级区；
灌装间C级区；
配制间
无菌室所有房间
微生物室所有房间
阳性室所有房间
取样间所有房间
一二车间洁净洗衣房每三个月动态测试一次。
三车间洁净洗衣房在生产洁净区，故每月动态测试一次。
月测
（动态）
洁净区所有房间
洁净区所有房间
洁净区所有房间
洁净区所有房间
——
——
——
——
5.1车间恢复生产前进行沉降菌监测时，对所有洁净区房间进行静态测试。
5.2采样点见附件,监测结果记录于相应的沉降菌监测记录中，记录应包括：
房间温度、相对湿度、压差及测试状态等项目。
6.结果计算
6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
6.2平均菌落数的计算，见下式：
M1+M2+…+Mn
平均菌落数M=_________________
n
式中：
M平均菌落数；
M11号培养皿菌落数；
M22号培养皿菌落数；
Mnn号培养皿菌落数
n培养皿总数。
7.结果评定
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
7.1每个测点的平均菌落数不得超过所选定的评定标准。
7.2若某个测点的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新连续采样两次，两次测试结果均须合格。
8.合格标准和纠偏限、警戒限
8.1合格标准
洁净级别
静态（在空气中暴露0.5h）
动态（在空气中暴露4h）
微生物最大允许数
微生物最大允许数
沉降菌（CFU/皿）
沉降菌（CFU/皿）
A级
＜1
＜1
C级
≤3
≤50
D级
10
——
（1）表中各数值均为平均值。
（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测,并累积计数。
（即：
同一位置多个沉降碟监测的时间总和符合要求,静态要求：
各沉降碟暴露时间总和为0.5h；动态要求：
各沉降碟暴露时间总和为4h。
）
8.2纠偏限和警戒限
项目
沉降菌
纠偏限
A级（动态）
＜1cfu/4小时
C级（动态）
20cfu/4小时（一车间灌装间为10cfu/4小时，二车间灌装间为6cfu/4小时）
警戒限
C级（动态）
一车间灌装间为8cfu/4小时，二车间灌装间为5cfu/4小时
9.不合格处理程序
若沉降菌检测不符合要求，检验人员将检测结果反馈相关部门进行原因分析并采取必要措施整改，按照《偏差处理规程》处理。
10.相关文件
《偏差处理规程》（Q/HRGL04010）
11.变更历史
版本号
变更原因及内容
执行日期
修订人
A
新文件下发
2013.03.04
姚盛凯
B
增加微生物室沉降菌监测内容
2013.06.03
姚盛凯
C
增加六车间沉降菌检测内容
2013.9.24
姚盛凯
12.附件
附件1：
一车间沉降菌采样点
房间名称
房间
面积（m2）
位置
采样点数
培养皿数
月测
周测
C级
化验室
122
23
——
2
2
——
原料缓冲间
102
11
——
2
2
——
物料暂存间
33
——
2
2
——
物料称量室
103
12
——
2
2
2
包材储存室
105
22
——
2
2
——
气闸室
106
7
——
2
2
——
清洁室
107
7
——
2
2
——
活性炭称量室
108
18
——
2
2
——
清洗室
109
29
——
2
2
——
男二更（穿洁净衣）
114
12
——
2
2
2
女二更（穿洁净衣）
112
12
——
2
2
2
配件室
121
3
——
2
2
——
二更缓冲间
115
2
——
2
2
——
洁净走廊
116
162
——
10
10
——
办公室
135
8
——
2
2
——
1503线配制室
117
51
投料处
4
1
1
——
3
3
1503线灌封间
118
105
内包材暂存处
10
1
1
门口附近的回风口
1
1
——
8
8
1504线稀配间
124
52
投料处
4
1
1
——
3
3
1504线浓配间
125
52
投料处
4
1
1
——
3
3
1504线灌封间
131
90
内包材暂存处
4
1
1
门口附近的回风口
1
1
——
2
2
1507线配制间
126
35
投料处
2
1
1
——
1
1
1505/1506线灌封间
127
24
内包材暂存处
2
1
1
门口附近的回风口
1
——
——
——
1
1507线灌封间
128
38
内包材暂存处
2
1
1
门口附近的回风口
1
——
——
——
1
办公室
135
8
——
2
2
——
A
级
1503线灌封间
118
16
灌装头
4
4
4
口盖轨道
口盖震荡筐
4
4
口管震荡筐
口管轨道
4
4
——
2
2
1504线灌封间
131
12.1
灌装头
4
4
4
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
4
4
加软管工位
4
4
——
2
2
1505/1506线灌封间
127
6.29
灌装头
4
4
4
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
4
4
加软管工位
4
4
——
2
2
1507线灌封间
128
13.77
灌装头
4
4
4
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
4
4
加软管工位
4
4
——
2
2
阴性对照
3
3
为保证碟子数目及监测及时，每次监测时碟子多取3个
3
3
总计：
132
100
备注：
微生物室采样点
房间名称
面积（m2）
采样点数
培养皿数
C级
更衣一室
3.20
2
2
更衣二室
3.52
2
2
缓冲间
2.88
2
2
微生物一室
6.96
2
2
微生物二室
10.20
2
2
A级
超净工作台
（一）（微）
1.05
2
14
超净工作台
（二）（微）
1.05
2
14
阴性对照
3
培养皿总数
41
J/HRGC03265B一车间沉降菌监测记录
（一）
日期：
取样人：
培养基批号：
培养箱编号：
放置时间：
取出时间：
监测项目
取样区（点）
位置
编号
结果观察
取样时间
监测结果
合格标准
房间温湿度、压差
1d
2d
3d
A级
沉降菌
118
1503线灌封间
灌装头
①②③④
静态：
＜1CFU/皿
动态：
＜1CFU/皿
（φ90mm）
----
口管震荡筐
口管轨道
⑤⑥⑦⑧
口盖震荡筐
口盖轨道
⑨⑩⑪⑫
——
⑬⑭
131
1504线灌封间
灌装头
①②③④
----
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
⑤⑥⑦⑧
加软管工位
⑨⑩⑪⑫
——
⑬⑭
127
1505/1506线灌封间
灌装头
①②③④
----
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
⑤⑥⑦⑧
加软管工位
⑨⑩⑪⑫
——
⑬⑭
128
1507线灌封间
灌装头
①②③④
----
加药塞震荡筐
输液塞震荡筐
⑤⑥⑦⑧
加软管工位
⑨⑩⑪⑫
——
⑬⑭
无菌室沉降菌监测记录
取样日期：
取样人：
培养基批号：
培养箱编号：
放置时间：
取出时间：
监测项目
取样区（点）
编号
结果观察
取样时间
监测结果
合格标准
房间温湿度、相对压差
1d
2d
3d
A级
超净工作台
（一）（微）
1234567
891011121314
静态：
＜1CFU/皿
动态：
＜1CFU/皿
（φ90mm）
----
超净工作台
（二）（微）
1516171819202122232425262728
----
超净工作台
（一）（无）
29303132333435
36373839404142
----
超净工作台
（二）（无）
43444546474849
50515253545556
----
超净工作台（三）（无）
57585960616263
64656667686970
----
超净工作台（四）（无）
71727374757677
78798081828384
----
C级
微生物一室
8586
静态：
≤3CFU/皿
动态：
≤50CFU/皿
（φ90mm）
微生物二室
8788
无菌一室
8990
无菌二室
9192
无菌三室
9394
无菌四室
9596
缓冲二
9798
缓冲二（无菌室）
99100
D级
缓冲一
101102
静态：
≤10CFU/皿
阴性对照
阴性-1阴性-2阴性-3
无菌生长
测试状态：
□静态0.5h□动态4h监测时间：
结束时间：
监测人：
复核人：
日期：
结论：
评价人：
日期：
微生物室沉降菌监测记录
取样日期：
取样人：
培养基批号：
培养箱编号：
放置时间：
取出时间
监测项目
取样区（点）
编号
结果观察
取样时间
监测结果
合格标准
房间温湿度、相对压差
1d
2d
3d
A级
超净工作台
（一）（微）
1234567
891011121314
静态：
＜1CFU/皿
动态：
＜1CFU/皿
（Φ90mm）
---
超净工作台
（二）（微）
1516171819202122232425262728
---
C级
更衣一室
一更-1一更-2
静态：
≤3CFU/皿
动态：
≤50CFU/皿
（Φ90mm）
更衣二室
二更-1二更-2
缓冲间
缓冲-1缓冲-2
微生物一室
一室-1一室-2
微生物二室
二室-1二室-2
阴性对照
阴性-1阴性-2阴性-3
无菌生长
测试状态：
□静态0.5h□动态4h监测时间：
结束时间：
监测人：
复核人：
日期：
结论：
评价人：
日期：
升级会员 