浅论大肠癌中MTA1和HIF.docx

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浅论大肠癌中MTA1和HIF

浅论大肠癌中MTA1和HIF

【摘要】【目的】探讨大肠癌中转移相关基因1（MTA1）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白的表达及其与淋巴管生成的关系。

【方法】用免疫组织化学SP法检测81例大肠癌中MTA1、HIF-1α蛋白的表达及D2-40标记的淋巴管密度。

【结果】81例大肠癌中MTA1、HIF-1α阳性表达率分别为%和63%，MTA1和HIF-1α的表达均与大肠癌Duke?

蒺s分期和淋巴结转移相关（P　）而与组织学分级和浸润深度无关（P　），大肠癌中MTA1和HIF-1α蛋白表达呈正相关（P　），MTA1和HIF-1α蛋白过表达病例肿瘤旁淋巴管密度分别为±、±，高于MTA1和HIF-1α不表达和弱表达病例（±、±），两者的差异有统计学意义（P　）。

【结论】MTA1和HIF-1α蛋白的过表达可能促进了大肠癌旁淋巴管的生成，在肿瘤淋巴结的转移中起一定作用。

【关键词】结直肠癌;MTA1;HIF-1α;淋巴管密度

　Abstract：

【Objective】Toinvestigatetheexpressionofmetastasis-associatedgene1（MTA1），hypoxiainducible-factorlalpha（HIF-1α）inhumancolorectalcancerandtoexploretherelationshipbetweentheirexpressionandlymphangiogenesis.【Methods】TheexpressionofMTA1andHIF-1α，andD2-40markedlymphaticvesseldensity（LVD）weredetectedbyimmunohistochemicalstainingineighty-onehumancolorectalcancercases.【Results】ThepositiveratesofMTA1andHIF-1αexpressionwere%and　%respectivelyintheeighty-onehumancolorectalcancercases.TheexpressionofMTA1andHIF-1αwerebothcorrelatewithDuke’sstageandlymphnodemetastasis（P　）butdidnotcorrelatewiththepathologicalgradeanddepthofinvasion（P　）.Inaddition，MTA1andHIF-1αexpressionhasapositivecorrelationinhumancolorectalcancer（P　）.InMTA1andHIF-1αover-expressioncases，theperitumoralLVDwas　±　and　±　respectivelyandwashigherthanthatoftheMTA1andHIF-1αexpressionnoneorweakcases（±，　±），thedifferencehasstatisticallysignificance（P　）.【Conclusion】TheoverexpressionofMTA1andHIF-1αincolorectalcancerpossiblypromotethecancerlymphangiogenesisandplayaroleinlymphnodemetastasis.

　　]淋巴道转移是大肠癌转移的重要途径，而淋巴管的生成则是促进大肠癌淋巴道转移的主要因素。

MTA1（metastasis-associatedgene1）是近年来发现的一个与肿瘤转移密切相关的癌基因，MTA1可促进大肠癌侵袭转移，但其与淋巴管生成的关系尚不明确[1]。

HIF-1α是一种肿瘤细胞缺氧条件下诱导的核转录因子，已有研究表明HIF-1α与乳腺癌、胰腺癌的淋巴管生成相关[2-3]。

特别值得注意的是，MTA1可直接影响HIF-1α蛋白的稳定性和转录活性来促进乳腺癌的转移，那么大肠癌中MTA1和HIF-1α的表达是否有相关性及其与淋巴管生成的关系值得进一步深入研究。

本研究用免疫组织化学的方法检测81例大肠癌切除肿瘤组织中MTA1和HIF-1α的表达及用淋巴管特异性标记物D2-40标记的肿瘤淋巴管密度，探讨大肠癌中MTA1和HIF-1α的表达与淋巴管生成的关系。

　　1材料与方法

　　临床资料

　　收集暨南大学附属第一医院2007年9月至2008年12月81例大肠癌手术切除标本。

其中男性患者45例，女性患者36例，年龄从21岁到93岁，平均年龄岁。

81例大肠癌中，高中分化癌59例，低分化癌19例，另外3例粘液腺癌并为低分化癌，有淋巴结转移者40例，其中一例有肝转移，无淋巴结转移者41例。

患者在手术前均未接受过放化疗。

所有标本经100mL/L甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别做常规HE染色和免疫组织化学染色。

　　主要实验试剂

　　鼠抗人MTA1单克隆抗体、鼠抗人D2-40单克隆抗体和兔抗人HIF-1α多克隆抗体分别购自美国SantaCruz公司，福州迈新生物技术开发公司和武汉博士德生物工程公司。

羊抗鼠和羊抗兔SP试剂盒购自福州迈新技术开发公司，DAB显色液购自中杉金桥生物技术公司。

　　免疫组织化学染色

　　染色方法按照链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法试剂盒说明书步骤进行。

用已知阳性表达的癌组织做阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

组织均用pH的柠檬酸修复液微波修复抗原处理。

鼠抗人MTA1单克隆抗体经1：

50稀释后用于实验，其它两种抗体均为即用型工作液。

　　结果判定

　　MTA1和HIF-1α阳性判定

　　MTA1和HIF-1α均为细胞浆或核表达。

胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。

判定标准综合染色强度和着色细胞数量进行分级：

着色略高于背景和着色细胞数　10%为阳性;细胞数　25%，着色较弱为弱阳性;细胞数为25%～50%，着色较强为中度阳性;细胞数　50%，着色强为强阳性。

其中，中度和强阳性为过表达。

　　淋巴管计数方法

　　参照Vermeulen等[6-7]所用方法，先在40倍视野下寻找淋巴管密度最多的区域，再在200倍视野下计数D2-40阳性的淋巴管个数。

取3个视野淋巴管的平均值即为所计淋巴管密度。

　　统计学方法

　　采用SPSS统计学软件，率进行χ2检验，淋巴管密度的比较用t检验，相关分析采用Spearman检验，P　为有统计学意义。

　　2结果

　　MTA1和HIF-1α的表达和临床病理指标的关系

　　MTA1和HIF-1α的阳性表达均以胞浆为主，仅很少量核表达（图1A，B）。

MTA1表达阳性率为%，其中中度和强阳性病例有23例，弱阳性有31例，阴性有27例;HIF-1α阳性率为63%，中度和强阳性有28例，弱阳性有23例，阴性有30例。

MTA1和HIF-1α的阳性表达均与分化程度无关（χ2=，P　;χ2=，P　），与浸润深度无关（χ2=，P　;χ2=，P　），但与淋巴结转移和Duke?

蒺s分期相关（χ2=，P　;χ2=，P　，表1）。

　　MTA1和HIF-1α表达的相关性

　　MTA1阳性的54例大肠癌中，HIF-1α阳性率为%（39/54）;MTA1阴性的27例中，HIF-1α阳性率为%（12/27）。

MTA1和HIF-1α的表达存在正相关性（rs=，P　，表2）。

　　淋巴管的观察

　　淋巴管被染成棕黄色，肿瘤旁比较明显，大多都呈扩张状态，管腔不规则，管壁很薄，为扁平的内皮细胞所围成，不见肌层（图1C）。

有淋巴结转移的病例，肿瘤旁淋巴管密度为±，无淋巴结转移的病例，肿瘤旁淋巴管密度为±。

经统计学分析，有、无淋巴结转移的病例肿瘤旁淋巴管密度的差异有统计学意义（t=，P　）。

　　MTA1和HIF-1α的表达与肿瘤旁淋巴管密度的关系

　　MTA1中度和强阳性的病例肿瘤旁淋巴管密度为±，MTA1阴性和弱阳性的病例肿瘤旁淋巴管密度为±，低于MTA1过表达的病例，两者肿瘤旁淋巴管密度的差异有统计学意义（t=，P　）;同样HIF-1α中度和强阳性的病例肿瘤旁淋巴管密度（±）高于HIF-1α弱和不表达病例（±），其差异有统计学意义（t=，P　，图2）。

　　3讨论

　　MTA1及HIF-1α与大肠癌淋巴管生成的关系

　　淋巴道转移是大肠癌等上皮性肿瘤发生转移的主要方式，淋巴管生成则是肿瘤淋巴道转移的重要机制。

引起淋巴管生成的分子机制尚未明了，MTA1和HIF-1α可能都是影响淋巴管生成的因素。

目前已明确，MTA1是促进大肠癌等多种肿瘤转移的关键分子。

Toh等[1]人和本研究组前期研究分别从mRNA与蛋白质水平证实，大肠癌组织中MTA1过度表达与淋巴结转移阳性率显着相关。

本研究的结果显示MTA1过表达时大肠癌旁淋巴管密度LVD增加，则进一步提示MTA1可能通过影响淋巴管生成来促进大肠癌淋巴道转移。

　　HIF-1α是缺氧状态引起肿瘤细胞转移的关键分子。

正常氧条件下，HIF-1α易被泛素蛋白酶体系统降解。

缺氧时，HIF-1α降解受阻，蛋白量增多，HIF-1α与靶基因中的缺氧反应元件结合启动了靶基因的转录。

HIF-1α可通过调控这些靶基因来影响肿瘤淋巴管的生成，从而促进肿瘤细胞的转移。

Katsuta等[10]在食管癌组织中用免疫组织化学的方法证明：

HIF-1α的表达能促进血管内皮生长因子VEGF-C的表达，且HIF-1α的表达与肿瘤细胞浸润淋巴管有关，提示HIF-1α可能通过调节VEGF-C的表达在肿瘤淋巴管的转移中起一定的作用。

Schoppmann等也用同样的方法在乳腺癌组织中研究认为HIF-1α与VEGF-C的表达和淋巴管的生成有关。

另外在胰腺癌、口腔鳞状细胞癌等肿瘤中也有报道HIF-1α能促进淋巴管生成[3，11]。

我们研究也发现HIF-1α过表达增加大肠癌旁淋巴管密度LVD，可见HIF-1α可通过促进肿瘤淋巴管的生成而促进肿瘤细胞淋巴结转移。

　　大肠癌中MTA1和HIF-1α表达的相关性

　　关于MTA1和HIF-1α的相关性目前研究尚不多见。

MTA1可参与组成NuRD复合物，与HDAC1、HDAC2相互作用使组蛋白去乙酰基、核小体重塑从而抑制基因的表达[12]。

最近有报道HDAC1/MTA1复合物能使HIF-1α去乙酰基而稳定，同时也增强了HIF-1α转录活性而使血管生成增加，为肿瘤的生长和转移提供了有利条件[13]。

朱晓霞等[14]报道在肺癌组织中MTA1的表达与HIF-1α的表达有显着相关性。

我们研究发现大肠癌中MTA1和HIF-1α的表达呈正相关，且促进了大肠癌淋巴结转移，这再次提示MTA1可能通过稳定HIF-1α蛋白促进了大肠癌转移。

特别是，我们还发现MTA1过表达的病例，大肠癌旁淋巴管密度增多，提示MTA1可能通过HIF-1α的表达诱导淋巴管生成。

　　综上所述，MTA1和HIF-1α的过表达与大肠癌淋巴道转移密切相关，两者都是判断大肠癌预后的重要指标。

而且MTA1很可能通过稳定HIF-1α蛋白来促进大肠癌旁淋巴管的生成，从而有利于大肠癌转移。

【参考文献】

　TohY，OkiE，OdaS，etal.OverexpressionoftheMTA1geneingastrointestinalcarcinomas：

correlationwithinvasionandmetastasis[J].IntJCancer，1997，74（4）：

459-463.

　　SchoppmannSF，FenzlA，SchindlM，etal.Hypoxiainduciblefactor-1acorrelateswithVEGF-Cexpressionandlymphangiogenesisinbreastcancer[J].BreastCancerResTreat，2006，99

（2）：

135-141.

　　TaoJ，LiT，LiK，etal.EffectofHIF-1alphaonVEGF-Cinducedlymphangiogenesisandlymphnodesmetastasesofpancreaticcancer[J].HuazhongUnivSciTechnologMedSci，2006，26（5）：

562-564.

　　YooYG，KongG，LeeMO.Metastasis-associatedprotein1enhancesstabilityofhypoxiainduciblefactor-1alphaproteinbyrecruitinghistonedeacetylase1[J].EMBOJ，2006，25（6）：

1231-1241.

　　KahnHJ，BaileyD，MarksA.MonoclonalantibodyD2-40，anewmarkeroflymphaticendothelium，reactswithKaposisarcomaandasubsetofangiosarcoma[J].MolPathol，2002，15（4）：

434-400.

　　VermeulenPB，GaspariniG，FoxSB，etal.QuantificationofAngiogenesisinSolidHumanTurnouts：

anInternationalConsensusontheMethodologyandCriteriaofEvaluation[J].EurJCancer，1996，32A（14）：

2474-2484.

　　郭永顺，戴宇平，夏金堂，等.膀胱移行细胞癌环氧化酶2表达与淋巴管和血管生成的关系[J].中山大学学报：

医学科学版，2009，30（3）：

299-302.

　　徐华，周序珑，杜彬.肿瘤转移相关基因MTA1在大肠癌中的表达及其临床意义[J].实用医学杂志，2005，21（19）：

2148-2149.

　　SemenzaGL.HIF-1：

mediatorofphysiologicalandpathophysiologicalresponsestohypoxia[J].JAppPhys，2000，88（4）：

1474-1480.

　　KatsutaM，MiyashitaM，MakinoH，etal.Correlationofhypoxiainduciblefactor-1alphawithlymphaticmetastasisviavascularendothelialgrowthfactor-Cinhumanesophagealcancer[J].ExpMolPathol，2005，78

（2）：

123-130.

　　LiangX，YangD，HuJ，etal.Hypoxiainduciblefactor-1alphaexpressioncorrelateswithvascularendothelialgrowthfactor-cexpressionandlymphangiogenesis/angiogenesisinoralsquamouscellcarcinoma[J].AnticancerRes，2008，28（3A）：

1659-1666.

　　TohY，NicolsonGL.TheroleoftheMTAfamilyandtheirencodedproteinsinhumancancers：

molecularfunctionsandclinicalimplications[J].ClinExpMetastasis，2009，26（3）：

215-227.

　　MoonHE，CheonH，ChunKH，etal.Metastasis-associatedprotein1enhancesangiogenesisbystabilizationofHIF-1α[J].OncolRep，2006，16（4）：

929-935.

　　朱晓霞，郭煜，陈龙华，等.MTA1、HIF-1α在肺癌中的表达及意义[J].南方医科大学学报，2009，29（4）：

642-644.