酶的特性实验.docx
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酶的特性实验
酶的特性实验
酶的特性实验
一、目的
酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。
通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理
酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异（专一）性，即一种酶只能对一种底物或一类底物（此类底物在结构上通常具有相同的化学键）起催化作用，对其他底物无催化反应。
例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。
还原糖产物可用班乃德试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。
唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下：
淀粉蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖
与碘反应：
蓝色蓝紫色红色无色无色
三、试剂和器材
（一）、试剂
1、2%蔗糖溶液：
用分析纯蔗糖新鲜配制。
2、0.5%淀粉溶液
（二）、材料
（1）唾液淀粉酶溶液：
先用蒸馏水漱口，再含10ml左右蒸馏水，轻轻漱动，2分钟后吐出收集在烧杯中，纱布过滤，即得清澈的唾液淀粉酶原液，根据酶活高低稀释50倍，即为唾液淀粉酶溶液。
（2）蔗糖酶溶液：
取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中，取蒸馏水12ml，分次加入，边加边研磨约10钟，用漏斗加滤纸过滤，滤液加2倍蒸馏水稀释。
（三）、仪器
恒温水浴（37℃）、沸水浴（100℃）、冰浴（0℃）、试管、吸管、2ml、5ml、量筒、比色板、胶头滴管等。
四、操作方法
（一）、酶催化的专一性
取6支干净试管，按下表操作：
操作项目
管号
1
2
3
4
5
6
0.5%淀粉（ml）
1
1
0
0
1
0
2%蔗糖（ml）
0
0
1
1
0
1
稀释唾液（ml）
1
0
1
0
0
0
蔗糖酶溶液（ml）
0
1
0
1
0
0
蒸馏水（ml）
0
0
0
0
1
1
酶促水解
摇匀，37℃水浴中保温10-15min
班乃德试剂（ml）
2
2
2
2
2
2
反应
摇匀，沸水浴中加热5～10min
结果（颜色）
（二）、温度对酶活力的影响
取3支试管，按下表操作：
操作项目
管号
1
2
3
0.5%淀粉溶液（ml）
2
2
2
稀释唾液（ml）
1
1
1
温度预处理5min（℃）
0
37
沸水浴
结果
摇匀，保持各自温度继续反应，5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于比色板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，向各管加入碘液2滴，混匀。
观察并记录各管反应现象，解释之。
（三）、pH对酶活力的影响
取3支试管，按下表操作：
操作项目
管号
1
2
3
pH5.0磷酸缓冲液（ml）
3
0
0
pH6.8磷酸缓冲液（ml）
0
3
0
pH8.0磷酸缓冲液（ml）
0
0
3
1%淀粉溶液（ml）
1
1
1
稀释唾液（ml）
1
1
1
结果（颜色）
摇匀，置37℃水浴中继续反应2分钟，每隔1分钟从第2号管中取出1滴反应液于比色板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色，即可停止反应，取出所有试管，并向个试管内加入2滴碘液，充分混匀，检查并记录各管颜色，解释PH对酶活性的影响。
（四）、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
取3支试管，按下表操作：
操作项目
管号
1
2
3
1%CuSO4（ml）
1
0
0
1%NaCl（ml）
0
1
0
蒸馏水（ml）
0
0
1
稀释唾液（ml）
1
1
1
0.1%淀粉溶液（ml）
2
2
2
结果（颜色）
摇匀，置37℃水浴反应1min左右即可用碘液检查2号试管淀粉水解程度，待2号试管的反应液不再变色时取出所有试管，并向各管内加入碘液1-2滴，观察并记录各管颜色，解释结果。
五、注意事项
（1）各人唾液中淀粉酶活力不同，因此实验2、3、4应随时检查反应进行情况。
如反应进行得太快，应适当稀释唾液；反之，则应减少唾液淀粉酶稀释倍数。
（2）酶的抑制与激活最好用经透析的唾液，因为唾液中含有少量Cl－。
另外，注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。
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