生物实验.docx
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生物实验
渤海大学学生实验报告
课程名称：
任课教师：
实验室名称：
房间号实验时间：
年月日
学院
化学化工与食品安全学院
专业
班级
姓名
学号
同组人
实验项目
组别
实验成绩
实验一蛋白质性质及酶活性实验
实验原理
在水溶液中，蛋白质分子表面结合大量的水分子，形成水化膜，同时蛋白子分子本身带有电荷，与溶液的反离子作用，形成双电层，因而每个蛋白质分子可形成一个稳定的胶粒。
整个蛋白质溶液就形成稳定的亲水溶胶体系。
当某些物理化学因素导致蛋白质分子失去水化膜或失去电荷，甚至变性时，它就丧失了稳定因素，以固态形式从溶液中析出，这就是蛋白质的沉淀作用，。
蛋白质的沉淀作用分为两类，可你沉淀作用和不可逆沉淀作用。
一·目的与要求
1.通过实验加深对蛋白质溶液的溶胶特性及其稳定因素的认识
2.了解各种沉淀试剂的本质，区别可逆的盐析及不可逆的沉淀作用
二·实验器材
（一）试剂
1.蛋白质氯化钠溶液取10ml蛋清，加蒸馏水100ml和饱和氯化钠溶液50ml，充分搅匀后纱布滤去不溶物。
2.蛋白质溶液取5ml蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后，用纱布过滤。
3.饱和硫酸铵溶液称固体（NH4）2SO4850g加于1000ml蒸馏水中，在70c-80c下搅拌促溶，室温中放置放夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铵溶液。
4.饱和苦味酸溶液取2g苦味酸放入三角烧瓶，加蒸馏水100ml，80c水浴约10min使之完全溶解，于室温下冷却后析出黄色结晶，上清液即为饱和苦味酸，此液可存放数年。
5.1%硫酸铜溶液，1%三氯乙酸溶液，1%醋酸溶液，5%鞣酸溶液，硫酸铵粉末，2%的硝酸银，饱和硫酸铜，10%NAOH溶液，95%乙酸。
（二）器材
试管及试管架，量筒，纱布，烧杯，试管夹等。
三·操作方法
1.蛋白子的盐析作用
2ml蛋白质氯化钠溶液+2ml饱和硫酸铵溶液（混匀静置10min有球蛋白析出）+硫酸铵粉末（边加边用玻璃棒搅拌析出清蛋白）+水沉淀溶解
2.乙酸沉淀蛋白质
2ml蛋白质溶液+少许氯化钠晶体（待溶解后）+95%乙醇4ml混匀有沉淀
3.有机酸沉淀蛋白质
1ml蛋白质溶液+10%三氯乙酸有沉淀
4.重金属盐析沉淀蛋白质
1ml蛋白质溶液+4滴10%NAOH溶液+2%硝酸银溶液有沉淀
1ml蛋白质溶液+少许1%硫酸铜溶液（有沉淀）再+过量1%硫酸铜溶液（沉淀消失）
5.生物碱试剂沉淀蛋白质
1ml蛋白质溶液+4滴1%醋酸+5%鞣酸有沉淀
1ml蛋白质溶液+4滴1%醋酸+饱和苦味酸溶液有沉淀
实验二蛋白质的等点点测定
实验原理
蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数的氨基与羧基成肽键组合等酸碱基团。
但是总有一定数量自由的氨基与羧基，以及酚基等酸碱基团。
因此蛋白质和氨基酸一样是两性电解质，在不同的PH水溶液中解离后所带正，负电荷不同。
调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态出现，在电场内改蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的PH值，称为该蛋白质的等电点。
当溶液的PH低于蛋白质的等电点时，即在H+较多打条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子;当溶液PH大于等电点时，即在OH-较多的条件下，蛋白质分子带负电荷，成为阴离子。
不同蛋白质各有特异的等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质非人变化测定各种蛋白质的等电点，最常用上网方法是测其溶解度最低是的溶液的PH值。
蛋白质等点多接近于PH7.0，略偏酸性的等电点也较多，比如明胶的等电点为PH4.7，也有偏碱性的，如粗蛋白等电点为PH0.5-12.0.处于等电点的蛋白质变现电中性，所以在溶液中的稳定性很低，容易沉淀析出。
本实验讲酪蛋白溶液分别置于连续不同的PH环境中，通过观察混浊程度可观测酪蛋白的等电点。
用酪蛋白与醋酸配置各种不同PH值得缓冲溶液，向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的PH值即为酪蛋白的等点。
1．目的与要求
掌握根据蛋白质在不同PN溶液中的溶解度来测定蛋白质的等电点。
2．实验试剂与器材
（1）试剂
1.1.00mol/l醋酸溶液，0.10mol/L醋酸溶液，0.01mol/L醋酸溶液。
2.0.5%酪蛋白溶液（以0.01mol/LNaOH溶液作溶剂）
酪蛋白-醋酸钠溶液配制:
称取纯酪蛋白0.25g，加蒸馏水20ml及1.00ml/LNaOH溶液5ml。
摇荡使酪蛋白溶解，然后加1.00mol/L醋酸5ml，倒入50ml容量瓶内，用蒸馏水稀释至刻度线，混匀，结果酪蛋白溶于0.10mol/L醋酸钠溶液内，其浓度为0.5%。
（2）器材
试管及试管架，试管及吸量管。
3．实验步骤
试剂（ml）
试管号
1
2
3
4
5
蒸馏水
8.4
8.7
8.0
8.2
7.4
0.01mol/L醋酸
0.6
0.1mol/L醋酸
0.3
1.0
1.0mol/L醋酸
0.8
1.6
0,。
5%酪蛋白醋酸钠溶液
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
溶液的最终PH
5.9
5.3
4.7
4.1
3.5
沉淀出现的情况
基本上无
少量
多
少量
基本上无
实验三蛋白质的呈色反应
蛋白质的呈色反应是指蛋白质所含的某些氨基酸及其特殊结构，在一定条件下可与某些试剂发生了生成了有色的物质的反应。
不用的蛋白质分子所含的氨基酸残基也是不完全相同，因此所发生的成色反应也是不完全一样。
另外呈色反应并不是蛋白质的专一反应，某些非蛋白质物质（含有-CS-HK,-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CHOH-CH2NH2等基团的物质）也能发生类似的颜色反应。
因此，不能仅仅根据呈色反应的结果为阳性就来判断被测物质一定就是蛋白质。
一．目的与要求
了解蛋白质的呈色反应原理。
（一）双缩脲反应
实验原理
当尿素经加热至180C左右时，两分子尿素脱去一分子氨，进而缩合成一分子双缩脲。
其在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。
其反应过程如下：
多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键，其结构与双缩脲分子中的亚酰4胺键相同。
因此，在碱性条件下与铜离子也能呈现出类似双缩脲的呈色反应，可用于蛋白质的定性或定量测定。
因此，一切蛋白质或二肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
其反应如下
试剂
1.蛋白质溶液（鸡蛋清用蒸馏水稀释10倍，通过2-3层纱布滤去不容物）
2.0.1%谷氨酸溶液
3.10%NaOH溶液
4.1%CuSO4溶液
5.尿素结晶
实验操作
1.双缩脲的制备及反应观察
少许尿素结晶+1ml10%NaOH溶液+2滴1%硫酸铜溶液浅粉红色
2.蛋白质双缩脲反应
1
2
3
4
蒸馏水（ml）
1.0
蛋白质样液（ml）
1.0
0.1%谷氨酸（ml）
1.0
10%NaOH（ml）
2.0
2.0
2.0
2.0
1%CuSO4（ml）
2滴
2滴
2滴
2滴
现象
无
粉红
浅蓝
无色
（二）茚三酮反应
实验原理
在弱酸条件下（PH5-7），蛋白质或氨基酸与茚三酮共热，可生成蓝紫色缩合物。
此反应为一切蛋白质和α-氨基酸所共有。
含有氨基的其他化合物亦可发生此反应。
如β-丙氨酸，氨和许多一级胺都呈有阳性反应。
尿素，马尿酸等的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸，在定性，定量测定中，应严防干扰物存在。
试剂
1.蛋白质样液
2.0.1%甘氨酸溶液
3.0.2%茚三酮溶液
实验方法
1ml0.1%甘氨酸溶液+0.5ml茚三酮（混匀，沸水浴加热）
1ml蛋白质溶液+0.5ml茚三酮（混匀，沸水浴加热）
实验四温度，PH，激活剂,抑制剂对酶活性的影响
酶的活性通常测定酶所作用的底物在酶作用前后的变化来研究的，本实验以唾液淀粉酶作用于底物淀粉为列，了解不同环境下，该酶分解淀粉生成给中糊精和麦芽糖等水解产物的变化，来观察淀粉酶的活性。
唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下：
淀粉》蓝色糊精》红色糊精》无色糊精》麦芽糖
蓝色》蓝紫色》红色》无色》无色
1.温度对酶活性的影响
实验原理
酶促反应同一般化学反应一样都需要在一定的温度下进行，使酶促反应速度最大时的温度称为此酶的最适温度，低于此温度，酶促反应速度缓慢，高于最适温度，酶蛋白变性失活。
2.PH对酶活性的影响
实验原理
在一定条件下，酶活性最高时的PH值称为最适PH，偏离此PH，酶的活性就会下降，不同的酶最适PH不同。
3.激活剂和抑制剂对酶活性影响
实验原理
在一定条件下，在酶促反应体系中加入激活剂可导致反应速率增加。
抑制剂则相反，它将抑制酶活性，使酶促反应不能进行。
1．目的与要求
掌握温度，PH，激活剂与抑制剂等等对酶活性的影响
2．实验器材
（1）试剂
1.0.5%淀粉溶液
2.碘溶液
3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液
4.0.5%NaCl溶液，1%硫酸铜溶液
5.唾液淀粉酶
（2）器材
水浴锅，电炉，比色盘，吸管等。
3．操作方法
（一）温度对酶活性的影响
试剂加入量（ml）
1
2
3
0.5%淀粉溶液
5
5
5
稀释唾液
1
1
1
温度
0℃水浴
37℃水浴
沸水浴
实验现象
蓝
黄
蓝
（2）PH对酶活性的影响
试剂（ml）
1
2
3
0.5%淀粉溶液
3
3
3
PH5缓冲溶液
1
PH6.6缓冲溶液
1
PH8缓冲溶液
1
稀释唾液
1
1
1
实验现象
蓝
黄
蓝
（3）激活剂和抑制剂对酶活性影响
试剂（ml）
1
2
3
0.5%淀粉溶液
2
2
2
1%CuSO4溶液
1
0.5%NaCl溶液
1
稀释唾液
1
蒸馏水
1
1
1
实验现象
无
浅色
浅蓝色
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