14生物实验操作技能指导李启凡吕帆许小凤.docx
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14生物实验操作技能指导李启凡吕帆许小凤
生物实验技术操作指导
目录
生物实验须知实验室一些常用知识介绍
实验一：
马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验
实验二:
植物组织中DNA和RNA的提取和鉴定
实验三：
糖酵解中间产物的鉴定
实验四：
综合设计实验—蛋白质的制备及其含量测定
实验五：
细菌血栓溶解酶活性测定
实验六：
可溶性糖的硅胶G薄层层析
实验室主要仪器使用操作规程与注意事项
生物实验须知
1．实验室规则
（1）实验课必须提前5分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。
（2）使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约,应特别注意保持药品和试剂的纯净,严防混杂污染。
（3）实验台、试剂药品架必须保持整洁,仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐,仪器洗净倒置放好,实验台面抹拭干净,经教师验收仪器后,方可离开实验室。
（4）使用和洗涤仪器时,应小心谨慎,防止损坏仪器。
使用精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障应立即报告教师,不要自己动手检修。
（5）在实验过程中要听从教师的指导,严肃认真地按操作规程进行实验,并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告,由课代表收齐交给教师。
（6）仪器损坏时,应如实向教师报告,真填写损坏仪器登记表,然后补偿一定金额。
（7）每次实验课安排同学轮流值日,值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录
实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
3．实验报告的书写
实验结束后,应及时整理和总结实验结果,写出实验报告。
（1）标题
标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。
（2）实验目的
（3）实验原理
应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。
（4）操作步骤
操作步骤（或方法）可以采用流程图的方式或自行设计的表格来表达。
（5）实验结果
将实验中的现象、数据进行整理、分析，得出相应的结论。
建议尽量使用图表法来表示实验结果，这样可以使实验结果清楚明了。
（6）讨论
包括对实验结果及观察现象的小结、对实验中遇到的问题和思考题的探讨以及对实验的改进意见等。
4．生物实验课评分标准
⏹实验预习情况（10%）
⏹实验操作情况（20%）
⏹实验报告情况（30%）
⏹实验考试成绩（40%）
实验室一些常用知识介绍
一．玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂
1.玻璃仪器的洗涤
（1）新购买的玻璃仪器,首先用自来水洗去表面灰垢,然后用洗衣粉刷洗,自来水冲净后,浸泡在1%~2%盐酸溶液中过夜以除去玻璃表面的碱性物质。
最后,用自来水冲洗干净,并用蒸馏水冲洗2次。
（2）对于使用过的玻璃仪器,应先用自来水冲洗,再用毛刷蘸取洗衣粉刷洗。
用自来水充分冲洗后再用蒸馏水冲洗2次。
凡洗净的玻璃仪器壁上都不应带有水珠,否则表示尚未洗净,需重新洗涤。
（3）比较脏的仪器或不便刷洗的仪器,使用前应用流水冲洗,以除去粘附物,如果仪器上有凡士林或其他油污,应先用软纸擦除,再用有机溶剂擦净，最后用自来水冲洗。
待仪器晾干后,放入铬酸洗液中浸泡过夜。
取出后用自来水充分冲洗,再用蒸馏水冲洗2次。
（4）普通玻璃仪器可在烘箱内烘干,但定量的玻璃仪器如吸管、滴定管、量筒、容量瓶等不能加热,应晾干备用。
另外,分光光度计中的比色杯的四壁是用特殊胶水粘合而成,受热后会散架,所以也不能烘干。
2.一些常用的洗涤剂
肥皂水或洗衣粉溶液这是最常用的洗涤剂,主要是利用其乳化作用以除去污垢,一般玻璃仪器均可用其刷洗。
实验一：
马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验
一、实验目的
1．学习从组织细胞中制备酶的方法。
2．掌握多酚氧化酶的作用及各种因素对其作用的影响。
二、实验原理
多酚氧化酶是一种含铜的酶，其最适pH值为6～7。
由多酚氧化酶催化的反应，如以邻苯二酚为底物，可以被氧化形成邻苯二醌。
由多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果变成褐色就是由于该酶作用的结果。
多酚氧化酶的最适底物是邻苯二酚（儿茶酚）。
间苯二酚和对苯二酚与邻苯二酚的结构相似，它们也可以被氧化为各种有色物质。
酶是生物催化剂，其催化活性易受各种因素的影响，如温度、pH、底物种类、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和蛋白质变性剂等都会改变其生物催化活性。
三、实验器材
1．匀浆机
2．小刀，纱布，漏斗，其它玻璃器皿
3．离心机
4．冰箱
5．恒温水浴
四、材料与试剂
1．马铃薯
2．0.1mol/L的NaF溶液:
将4.2g氟化钠溶于1000mL水中。
3．0.01mol/L的邻苯二酚溶液:
将1.1g邻苯二酚溶解于1000mL水中,用稀NaOH调节溶液的pH值为6.0,防止其自身的氧化作用。
当溶液变成褐色时，应重新配制。
新配制的溶液应贮存于棕色瓶中。
4．pH6.8的磷酸盐缓冲液
5.5%三氯乙酸溶液
6.硫脲
7.0.01mol/L的间苯二酚溶液:
将0.11g间苯二酚溶解于100mL水中。
8．0.01mol/L的对苯二酚溶液:
将0.11g对苯二酚溶解于100mL水中。
9．固体硫酸铵
10．0．8％HCl：
19.2mL浓HCl加水稀释到1000mL。
11．0.2%和0.3%（V/V）的乳酸溶液。
12.0.5%的碳酸钠溶液
13．0.01％的碳酸钠溶液
五、操作方法
1．多酚氧化酶的制备
每三个小组一起，称取150g马铃薯（新马铃薯可以不去皮），切块后放入匀浆机，加入150mLNaF溶液，匀浆后用四层纱布过滤。
各组分别量取50mL滤液置离心管中，于3500转/min离心5～10min，取上清夜，加入固体硫酸铵16g，溶解，于4℃放置30min，于3500转/min离心15min，倒掉上清液，沉淀用15mLpH6.8的磷酸盐缓冲液溶解，即为粗酶液，含有马铃薯多酚氧化酶。
2．多酚氧化酶的催化作用
按表1加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
表1多酚氧化酶的催化作用
试管号
酶液
邻苯二酚
水
混匀后37℃保温5～10min，观察颜色变化
1
15滴
15滴
－
2
15滴
－
15滴
3
－
15滴
15滴
3．多酚氧化酶的化学性质
按表2加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
表2多酚氧化酶的化学性质
试管号
酶液
5％三氯乙酸
硫脲
振荡混匀后分别加入邻苯二酚15滴，于37℃保温10min，观察颜色变化
1
15滴
－
－
2
15滴
15滴
－
3
15滴
－
少许
4．底物专一性
按表3加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
表3多酚氧化酶的底物专一性
试管号
酶液
邻苯二酚
间苯二酚
对苯二酚
混匀后37℃保温5～10min，观察颜色变化
1
15滴
15滴
－
－
2
15滴
－
15滴
－
3
15滴
－
－
15滴
5．底物浓度的影响
按表4加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
表4底物浓度的影响
试管号
酶液
邻苯二酚
水
混匀后37℃保温1min，观察颜色变化
1
5滴
1滴
39滴
2
5滴
10滴
30滴
3
5滴
40滴
－
6．酶浓度的影响
按表5加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
表5酶浓度的影响
试管号
酶液
邻苯二酚
水
混匀后37℃保温2min，观察颜色变化
1
15滴
15滴
－
2
1滴
15滴
14滴
1．氢离子浓度的影响
按表6加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
管号
1
2
3
4
5
0.8%HCl
40滴
-
-
-
-
0.3%乳酸
-
40滴
-
-
-
0.2%乳酸
-
-
40滴
-
-
0.01%碳酸钠
-
-
-
40滴
-
0.5%碳酸钠
-
-
-
-
40滴
邻苯二酚
7滴
7滴
7滴
7滴
7滴
酶液
7滴
7滴
7滴
7滴
7滴
混合后pH值
1
3
5
7
9
37℃保温5min，观察颜色变化,确定最适pH值
六、思考题
1．在酶制备过程中加入硫酸铵的目的是什么？
2．在多酚氧化酶性质实验中三氯乙酸和硫脲有什么作用？
3．该多酚氧化酶的最适pH值是多少？
为什么？
4．通过实验可知哪些因素会影响酶的催化活力？
实验二：
植物组织中DNA和RNA的提取和鉴定
一、实验目的
①学习和掌握从植物组织中分离核酸的原理和操作方法。
②学习和掌握测定核酸含量的定糖法（苔黑酚法和二苯胺法）的原理及操作方法。
二、实验原理
核酸是生物体内的主要化学成分，核酸在生物体内主要以核蛋白的形式存在。
核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在与在细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。
用冰冷的稀三氯乙酸或高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆，以除去酸溶性小分子物质。
再由有机溶剂如乙醇、乙醚等抽提，去除脂溶性的磷脂等物质。
最后用浓盐溶液（10%氯化钠溶液）和0.5mol/L高氯酸（70℃）分别提取DNA和RNA。
由于核酸和脱氧核糖核酸有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比。
因此可用定糖法来定性定量测定核酸。
①核糖的测定：
测定核糖的常用方法是苔黑酚法（3，5—二羟基甲苯，即Orcinol反应）。
当含有核糖的RNA与浓盐酸及3，5—二羟基甲苯在沸水水浴中加热10～20min后，有绿色物产生，这是因为RNA脱嘌呤后的核糖与酸作用生成糠醛，后者再与3，5—二羟基甲苯作用生成绿色物质。
RNA+浓硫酸+
绿色化合物
注意：
DNA、蛋白质和黏多糖等物质对测定有干扰作用。
②脱氧核糖的测定：
测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。
含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热后，产生蓝色。
这是因为DNA嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-6-酮基戊醛，再与二苯胺作用产生蓝色物质。
DNA+少量浓硫酸或冰乙酸+
蓝色物质
注意：
DNA、蛋白质和黏多糖等物质对测定有干扰作用。
此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。
上述两种定糖的方法准确性较差，但快速简便，能鉴别DNA和RNA，是鉴定核酸、核苷酸的常用方法。
三、实验器材
1恒温水浴
2电炉
3布氏漏斗装置
4移液管
5烧杯
6量筒
7剪刀
8研体
四、材料和试剂
1新鲜菜花
295%乙醇
3丙酮
45%高氯酸溶液
50.5mol/L三氯酸溶液
610%氯化钠溶液
7标准RNA溶液（5mg/100mL）
8标准DNA（15mg/100ml）
9粗氯化钠
10海沙
11二苯胺试剂：
将1g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，再加入2.75mL浓硫酸（置冰箱中可保存6个月。
使用后，在室温下摇匀）。
12三氯化铁浓盐酸溶液：
将2ml10%三氯化铁溶液（用FeCl3·6H20配制加入到）400mL浓盐酸中。
五、操作方法
1.核酸的分离
①取菜花的花冠20g，剪碎后置于研钵中。
加入20mL95％乙醇和少量诲砂，研磨
成匀浆。
然后用布氏漏斗抽滤，弃去滤液。
②向滤渣中加入20mL丙酮，搅拌均匀,抽滤，弃去滤液。
③再向滤渣中加人20mL丙酮，搅拌5min后抽滤（用力压滤渣，尽量除去丙酮）。
④在冰盐浴中，将滤渣悬浮在预冷的20mL5％高氯酸溶液中搅拌抽滤弃去滤液。
⑤特滤渣悬浮于20mL95％乙醇中，抽滤，弃去滤液。
⑧滤渣中加入20mL丙酮，搅拌5min。
抽滤至干．用力压滤渣尽量除去丙酮。
⑦将干燥的滤渣重新悬浮在40ml10％氯化钠溶液中，在沸水浴中加热15mln，放置、
冷却，抽滤至干，留滤液，并将此操作重复进行一次。
将两次滤液合并，为提取物一。
⑧将滤渣重新悬浮在20mL0.5mol儿高氯酸溶液中。
加热到70℃。
保温20min
（恒温水浴）后抽滤。
留滤液为提取物二。
2．DNA和RNA的定性鉴定
①二苯胺反应：
按表1加入各种试剂，反应后观察现象井记录结果。
表1二苯胺反应加入试剂
管号
1
2
3
4
5
蒸馏水/ml
1
-
-
-
-
DNA溶液/ml
-
1
-
-
-
RNA溶液/ml
-
-
1
-
-
提取物一/ml
-
-
-
1
-
提取物二/ml
-
-
-
-
1
二苯胺试剂/ml
2
2
2
2
2
放沸水浴中10min后的现象
②苔黑酚反应：
按表2加入各种试剂，反应后观察现象井记录结果。
表2苔黑酚反应加入试剂
管号
1
2
3
4
5
蒸馏水/ml
1
-
-
-
-
DNA溶液/ml
-
1
-
-
-
RNA溶液/ml
-
-
1
-
-
提取物一/ml
-
-
-
1
-
提取物二/ml
-
-
-
-
1
三氯化铁浓盐酸溶液/ml
2
2
2
2
2
苔黑酚乙醇溶液/ml
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
放沸水浴中10-20min后的现象
根据现象分析提取物一和提取物二中主要含有什么物质?
六、思考题
1．核酸分离时为什么要除去小分子物质和脂类物质？
本实验是怎样除掉的？
2．运用本实验方法是否可以提取到能够进行其他生物实验用的核酸材料?
3．快速鉴别RNA和DNA的方法是什么?
实验三：
糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。
二、实验原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。
硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。
然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。
三、仪器原料和试剂
（1）仪器：
试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。
（2）原料：
新鲜酵母。
（3）试剂：
①2，4-二硝基苯肼：
0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。
②0.56mol/L硫酸肼溶液：
称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。
此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。
③5%葡萄糖溶液。
④10%三氯乙酸溶液。
⑤0.75mol/LNaOH溶液。
⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。
四、操作步骤
（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。
杯号
5%葡萄糖加入量/ml
10%三氯醋酸加入量/ml
碘乙酸加入量/ml
硫酸肼加入量/ml
发酵时起泡多少
1
10
2
1
1
2
10
--
1
1
3
10
--
--
--
（2）将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内，放入37℃保温1.5h，观察发酵管产生气泡的量有何不同。
（3）把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表补加各试剂，摇匀放10min后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取滤液进行测定。
杯号
10%三氯乙酸/ml
碘乙酸/ml
硫酸肼/ml
2
2
--
--
3
2
1
1
（4）取3个试管，分别加入上述滤液0.5ml，并按下表加入试剂和处理。
管号
滤液/ml
0.75mol/L
NaOH/ml
室温放置
10min
2，4-二硝基苯肼/ml
38℃水浴保温19min
0.75mol/L
NaOH/ml
观察结果
1
0.5
0.5
0.5
3.5
2
0.5
0.5
0.5
3.5
3
0.5
0.5
0.5
3.5
五、思考题
实验中哪一发酵管生成的气泡最多？
哪一管最后生成的颜色最深？
为什么？
实验四：
综合设计实验
蛋白质的制备及其含量的测定
类型：
给定选题的综合设计性实验
基本内容：
通过学习的生物化学知识和实验技术，自行设计一种含蛋白质的样品处理方法、蛋白质制备方法和测定方法。
基本要求：
掌握常用的蛋白质制备和定量测定的方法及其原理，能够根据样品的种类不同设计蛋白质制备的方法，并根据蛋白质性质不同设计选用相应的定量测定方法。
通过实验方案设计及方法选择，使学生了解不同来源蛋白质制备的基本原理与方法；熟悉几种蛋白质含量测定方法的基本原理及应用条件；学会设计并实施一种蛋白质的制备及测定实验方案；通过实验独立完成试剂的配制、蛋白质的制备、标准曲线的制作、蛋白质含量测定、结果计算、方案实施总结全过程。
并能够熟练使用离心机、分光光度计等进行蛋白质制备和紫外、可见分光光度测定。
可选择的蛋白质含量测定方法有：
（1）紫外分光光度法
（2）Bradford法
（3）双缩脲法等
（4）Folin-酚法
实验报告：
要求给出实验目的、设计方案及设计原理、实验技术路线和参数选择的依据、实验参考文献、实验方法和步骤、实验结果和分析、总结。
第一部分：
蛋白质样品的选择、处理及制备
设计要求：
1．蛋白质样品的选择:
乳制品、植物蛋白、动物蛋白等
2．处理方法的选择：
根据所要制备和测定的蛋白质样品的来源、种类和特性选择处理的方法——可选择粉碎、匀浆、超声破壁等方法
3．制备方法的选择：
根据要测定的蛋白质组分选择制备的方法——可选择粉碎后直接测定总蛋白质、采用特定溶剂提取后测定特定溶解性的蛋白质、分离纯化后测定特定组分的蛋白质等等。
根据以上选择制定实验方案，并确定具体的实验参数，具体实验步骤和参数的选择可参考实验教材。
（1）生物化学实验技术和操作指导，自编讲义
（2）生物化学实验（工科专业适用），化学工业出版社，董晓燕主编，第一版，2003年
（3）生物化学实验和技术，中国轻工业出版社，袁道强主编，第一版，2006年
第二部分：
样品中蛋白质含量的测定
设计要求：
1．根据所制备的样品中蛋白质的性质选择合适的测定方法，如粗制品的总蛋白质含量一般可选择凯氏定氮法，纯化后没有干扰的蛋白质样品可选择紫外分光光度法等等。
2．参考附录中提供的可选用的方法，制定测定的具体实验方案。
附录：
测定蛋白含量可选用的方法
I.紫外分光光度法测定蛋白质的含量
一、实验目的
掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。
二、实验原理
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。
该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。
但此方法存在以下缺点：
1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。
2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。
但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。
但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。
三、实验器材
1．紫外分光光度计
2．移液管
3．试管及试管架
4．石英比色皿
四、材料与试剂
1．标准蛋白质溶液：
准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。
2．待测蛋白溶液：
酪蛋白稀释溶液，使其浓度在标准曲线范围内。
五、操作方法
1．标准曲线的制作
按表1加入试剂。
表1标准曲线的制作
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
牛血清白蛋白溶液/mL
0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
4.0
蒸馏水/mL
4
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0
蛋白质浓度/（mg/mL）
0
0.125
0.25
0.375
0.50
0.625
0.75
1.00
A280
混匀后,选用1cm的石英比色皿，在波长280nm处测定各管的吸光值。
以蛋白质的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。
2．未知样品的测定
取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。
并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
II.Bradford法测定蛋白质的含量
一、实验目的
学习考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的原理和方法。
二、实验原理
1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，迅速而准确的定量蛋白质的方法。
染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。
蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。
染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约只需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。
一些阳离子（如K+，Na+，Mg2+），（NH4）2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX-100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。
由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛用于蛋白质含量的测定。
三、实验器材
1．天平
2．分光光度计
3．试管及试管架
4．比色皿
5．移液管
四、材料与试剂
1．考马斯亮蓝G-250：
称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL95%乙醇中，加入100mL85%（W/V）磷酸，将溶液用水稀释到1000mL。
[试剂的终含量为：
0.01%考马斯亮蓝G-250，4.7%（W/V）乙醇，和8.5%（W/V）磷酸]。
2．标准蛋白质溶液：
可用牛血清白蛋白预先经凯氏定氮法测定蛋白含氮量，根据其纯度配制成0.1mg/mL的溶液。
3．未知样品液。
五、操作方法
1．牛血清蛋白标准曲线的制作
取6支试管，编号为1、2、3、4、5、6，按表2加入试剂。
表2牛血清蛋
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