细胞生物学实验指导.docx
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细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物教研室
目
录
实验一动物细胞的基本形态观察和显微测量………………………………1
实验二线粒体的活体染色及电镜照片观察…………………………………4
实验三液泡系的活体染色及电镜照片观察…………………………………6
实验四细胞生理活动的观察…………………………………………………7
实验五细胞组分的化学反应…………………………………………………11
实验六细胞核与线粒体的分级分离…………………………………………14
实验七细胞融合………………………………………………………………17
实验八培养细胞的形态观察和计数…………………………………………19
实验九细胞的原代和传代培养………………………………………………23
实验十细胞中微丝的染色及微丝与细胞形态的实验观察…………………25
实验十一应用细胞融合技术制备染色体提前凝集标本……………………27
实验十二放线菌素D诱导HL60细胞凋亡的实验观察……………………29
实验十三MAPK信号通路与乳腺癌细胞增殖及可能机制的探索性实验…36
实验一动物细胞的基本形态观察和显微测量
【实验目的】
制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态，学会使用测微尺，通过测量对
红细胞的进化进行分析。
【实验用品】
一、材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴。
二、器材和仪器配有目镜测微尺的显微镜一台、载片十张、盖片三张、吸水纸、手术
器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。
三、试剂1％甲苯胺兰、1％甲基兰、Ringer氏液（两栖类用）。
【实验内容】
一、细胞的基本形态观察
（一）原理
细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，
这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。
例如：
具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具
有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭
圆形或圆饼形。
不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：
细胞膜、细胞质和细胞核。
但也
有例外。
例如：
哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。
（二）观察方法与结果
1．制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。
取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊
髓，取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。
将另一载片压在
脊髓碎块上，用力挤压。
将上面的载片取下即可得到压片。
在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，
染色10分钟，盖上盖片，吸去多余染液。
在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质
细胞。
染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或
星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁（参照照片）。
2．蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察
剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌
束，继续剥离，可得到很细的肌纤维（肌细胞）。
尽可能拉直肌纤维。
在显微镜下观察，肌细
胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边（参照照片）。
3．蟾蜍肝脏压片的制备与观察
剪开蟾蜍腹腔，取一小块（约2～3mm）肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻
3
压将肝中的血挤出。
然后放在载片上，制片方法同脊髓压片。
染色用甲基兰。
显微镜下观察
可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形（参照照片）。
4．蟾蜍血涂片的制备与观察
取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在载片上．将另一载片的一端呈45°角紧贴在血滴的前
缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层。
（图l一1）。
晾干。
显微镜观察可
见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。
白细胞数目少，为圆形。
图1—1血涂片的制备
5．人血涂片的制备与观察
取人血一滴，制片方法同上。
显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核。
自细胞数目
少，为圆形。
6．人口腔上皮细胞标本的制备与观察
用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上（不可反复涂沫），滴一滴甲苯胺兰染液，染
色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。
显微镜下观察可见复盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭
圆形，中央有椭圆形核，染成兰色。
二、测微尺的使用
（一）原理
测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。
目镜测微尺是一个放在目镜像平面
上的玻璃圆片。
圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的
放大倍数而异。
因此，用前必须测定。
镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，长1毫米（1000
μm），被分为100格，每格长度是10微米。
（二）方法
1．将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺
使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数（图1—2）。
2．按下式求出目镜测微尺每格代表的长度
目镜测微尺每格代表的长度（μm）=
X10
三、测量人口腔上皮细胞
从显微镜载物台上取下镜台测微尺，换上人口腔上皮细胞标本，测量细胞、细胞核的长
短径。
【作业】
一、分别求出使用低倍镜（10X），高倍镜（40X）时目镜测微尺每格代表的长度：
低倍镜：
目镜测微尺每格代表的长度=
XlO（μm）=
XlO（μm）=
μm
μm
高倍镜：
目镜测微尺每格代表的长度=
二、分别绘制所观察的6种细胞并注明基本结构。
三、计算蟾蜍红细胞的核质比例。
计算细胞、细胞核体积的公式：
圆形V=4/3πr
椭圆形V=4/3πab
核质比N／D=Vn／（Vc—Vn）（Vn为核的体积，Vc是细胞质的体积）
3
（r为半径）
2
（a、b为长、短半径）
实验二线粒体（Mitochondrion）的活体染色
及电镜照片观察
【实验目的】
掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。
【实验用品】
一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。
二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml
注射器、吸管。
三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液（哺乳类用）。
【实验内容】
一、兔肝细胞线粒体的活体染色
（一）原理
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要
的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真
实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B是线
垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周
围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法
用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块
（2～3mm），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液（用镊子轻压），用吸管吸去Ringer氏
3
液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体
的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边
缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织
块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上
盖片，吸去多余水分。
（三）结果
显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
二、线粒体的光镜切片观察
用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
三．线粒体的电镜照片观察
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和
杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛
的区域。
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。
一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与
线粒体长轴平行排列的脊。
脊的横切面呈囊状或管状。
脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很
大关系。
这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：
第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照
片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长
轴垂直排列，肾小管上皮细胞重吸收作用需要能量，线粒体数目多。
第二张是恒河猴脊髓突
触内线粒体。
可见线粒体体积小、数目多，脊与线粒体呈同心圆排列。
第三张是小鼠睾丸间
质细胞线粒体，线粒体的脊为分支的管，在照片上呈单层膜泡状。
【作业】
绘制光镜下肝细胞活体染色所见的线粒体及电镜下肾小管上皮细胞中线粒体的形态结
构。
实验三液泡系（Vacuolarsystem）的活体染色
及电镜照片观察
【实验目的】
掌握一种活体染色方法，了解光学显微镜和电子显微镜下液泡系的基本形态结构。
【实验用品】
一、材料和标本蟾蜍一只，软骨细胞电镜照片。
二、器材和仪器光学显微镜一台、手术器材一套、解剖盘一个、载片、盖片、吸水纸。
三、试剂l／3000中性红染液、Ringer氏液（两栖类用）。
【实验内容】
一、蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察
（一）原理
在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、
溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。
软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原
纤维等，因而液泡系发达。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细
胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。
（二）方法
取一只蟾蜍，破坏脑和脊髓，剪开胸腔，取胸骨剑突软骨最薄部分的一小片，放在载片
上，滴两滴1／3000中性红染液，染色8～lO分钟，用吸水纸吸去染液，加一滴Ringer氏
液，盖上盖片，吸去多余Ringer氏液。
（三）结果
显微镜下观察，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核周围有许多染成玫瑰红色．大小不一的
小泡，即软骨细胞液泡系。
二、大白鼠胫骺软骨细胞电镜照片的观察
动物细胞液泡很小，即使是活体染色也只能看出是一个小点，为了进一步看清液泡的结
构我们有必要观察软骨细胞的电镜照片。
大白鼠胫骺骨细胞电镜照片，细胞核与核仁很清楚，细胞质中有丰富的粗面内质网，液
泡系发达，液泡由单层膜包围，细胞周边有液泡释放。
【作业】
绘制光镜下软骨细胞液泡系。
实验四细胞生理活动的实验观察
【实验目的】
通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。
【实验用品】
一、材料和标本雄性蟾蜍、小白鼠、l％鸡血悬液、6％淀粉肉汤、草履虫。
二、器材和仪器光镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器材、滴管、移液管、试
管、玻璃片、黑纸。
三、试剂0.3％台盼兰、1％刚果红。
【实验内容】
一、细胞的吞噬活动
（一）原理
白细胞是机体防御系统中能游走的单位。
它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。
它们有许多生理功能，如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。
在白细胞中，以粒细胞、
单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。
单核细胞由血液进入组织后逐渐演
变成巨噬细胞。
吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。
吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走，
然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶酶体与吞噬泡
融合消化异物。
（二）小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
l．实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤O．5～1ml（含O．3％台盼兰，起标
记作用），以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞（此步由教师在实验前进行完毕）。
2．实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％鸡血悬液0．5～1ml，注射后
轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3．1小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入O．5ml～1ml
生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。
4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片。
5．镜检，高倍镜下画图记录所见结果。
二、暗视野观察细胞的纤毛和鞭毛运动
（一）原理
暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。
常常用它来观
察没有染色的活体细胞或胶体粒子。
利用此照明法，在镜检时不能直接看到通过标本的照明
光线，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看到明亮
的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。
（二）自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。
步骤：
1．将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。
2．取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。
3．放一块透明玻璃于载物台透光孔上，用尺子测量光圈孔径。
4．按照图6--1的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。
5．将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。
注：
如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。
图6—1中央遮光板
a．光圈孔径
b．滤光片直径
（三）观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动
步骤：
1．用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。
2．腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。
3．沿蟾蜍二侧口角向后剪开约l厘米，将下颌翻转固定在腹部。
4．在上颌中线距喉头1厘米处放置腊屑，观察腊屑向什么方向移动？
记录腊屑开始移
动到消失的时间（见图6--2蟾蜍口腔内面图）。
5．然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约2×2cm小块，用牙签挑取剪下的粘
2
膜，将纵切面贴于载片上。
6．加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，镜检。
图6—2
蟾蜍口腔内面图
结果：
1．在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。
2．换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。
（四）暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动
步骤：
l．将前面实验所用蟾蜍沿腹中线开腹，暴露出黄色圆柱状精巢。
2．剪取一侧精巢于盛有自来水的平皿中，用镊子夹住精巢的一端，清洗去血污。
3．移取洗净的精巢于另一干净的平皿上，用眼科剪将精巢充分剪碎后，加入数滴自来
水混匀。
4．用吸管吸取平皿内液体，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片，稍待2～3分钟于镜下观
察。
结果：
1．在低倍镜下可见到视野中有许多精子：
头部呈长锥形，尾为细长的线状结构。
2．置高倍镜下观察：
可见有许多靠尾部鞭毛弯曲摆动驱使而运动的精子，测量鞭毛长
度。
三、草履虫纤毛运动及食物泡的形成
图6—3草履虫
草履虫是一种单细胞动物。
虫体由一个细胞组成，能执行复杂的生理功能。
其体表，均匀密布纤毛，为运动细胞器。
身体的前部有口沟，由前端斜向伸至体中部，
口沟的底部为胞口，下部一短管斜向后部而入胞质，称胞咽。
纤毛有规律的摆动使食物在胞
咽聚结形成食物泡（吞噬泡），最后脱离胞咽入胞质。
食物泡随细胞质由体后端到前端不停环
流，并与溶酶体（含酸性水解酶）融合，行使细胞内消化。
根据食物泡中刚果红指示剂的颜色变化（酸性时，为红色；近中性时，为黄色；碱性时，
为蓝色）。
可以观察到消化过程。
实验步骤：
1．取一滴草履虫培养液于载玻片上，放上几根棉花纤维，以减慢草履虫的运动。
加盖
玻片，制成临时装片。
2．观察草履虫的运动方式（观察时光线可调暗些）：
可见镜下有许多样似倒置鞋底的草
履虫，体表纤毛不断摆动，虫体以其中轴左旋前进，若遇阻力则试触后即刻回避而转向。
3．观察草履虫的食物泡的形成：
1）在盖玻片一侧加一滴l％的刚果红指示剂，用吸水纸从另一侧吸引使指示剂进入盖片
下方，选一运动较迟缓的草履虫，移入高倍镜观察吞噬活动。
2）几分钟后可见草履虫体内出现许多红色食物泡，随着食物泡不停的在胞质中环流，食
物不断消化，泡内酸性减弱或近中性，颜色渐渐呈黄色，食物泡渐小，最后食物泡颜色呈蓝
色，不能被消化的残渣，环流到身体后部的胞肛排出，不排出时不易见到胞肛。
【作业】
1．画图记录细胞吞噬实验所见结果，小鼠巨噬细胞吞噬实验如何解释细胞内台盼兰的
着色？
2．在观察细胞纤毛和鞭毛运动实验中,记录一下腊屑从开始运动到消失的时间。
3．鞭毛和纤毛有何异同？
实验五
细胞组分的化学反应
【实验目的】
了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性
蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
【实验用品】
一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、
水浴箱。
三、试剂PBS缓冲液（pH7.2）、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二
甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、
联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh
苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液（甲醇：
冰醋酸=3:
1，体积比）
【实验内容】
细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的
某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化
学成分进行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA
（一）原理
细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认
为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用
有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。
由此对细
胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。
（二）方法
l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。
2．取出盖片，用PBS（pH7.2）轻轻冲洗盖片表面去除残渣。
3．放入Carnoy固定液中固定l小时。
4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。
5．取出盖片放入蒸馏水中轻轻漂洗2～3次（2～3秒钟左右），吸去水分。
放入纯丙酮
中分色2～3秒钟。
6.放入l／2丙酮+1／2二甲苯中5秒钟。
7．放入纯二甲苯中透明5分钟。
8．滴一滴中性树胶于载玻片上，将盖片标本面朝下封片。
9．镜下观察
（三）结果
细胞质被染成浅红色，细胞核被染成蓝绿色，而其中核仁被染成紫红色（参照照片）。
二、细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示
（一）原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同，在pH值不同的溶液中，蛋
白质分子所带的净电荷多少不同。
如在生理条件下，整个蛋白质所带负电荷多，则为酸性蛋
白质；带正电荷多，则为碱性蛋白质。
据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后，用不同
pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。
（二）方法
1．以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡盘中，剪开胸腔，打开心包。
小心将
心脏剪一小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾
干。
2.将涂片作好标记放在70％乙醇中固定5分钟，室温晾干。
3．放入5％三氯醋酸中60℃30分钟，抽提出核酸。
4．清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。
5．滤纸吸干玻片上水分。
6.一张片放入0.1％碱性固绿（pH8.0～8.5）中染色10～15分钟,另一张片放入0.1％酸
性固绿（pH2.0～2.5）染色5～10分钟。
7．清水冲洗，盖上盖片镜检。
（三）结果
经碱性固绿染色片中，胞质、核仁不着色，细胞核大部分被染成绿色，是为碱性蛋白质
存在处（参照照片）。
经酸性固绿染色片中，因胞质和核仁中有酸性蛋白，被染成绿色。
三、细胞内过氧化物酶的显示
（一）原理
过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶
能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧
化物酶的有无或多少。
（二）方法
1．取小鼠一只，以颈椎脱位法将其处死，迅速剖开其后肢暴露出股骨，将股骨一端斜
向剪断，用PBS缓冲液湿润过的注射器针头吸出骨髓一滴滴到载玻片上。
2．推片，室温晾干。
3．将涂片放入0.5％硫酸铜中浸30秒~1分钟。
4．取出涂片直接放入联苯胺混合液中反应6分钟。
5．清水冲洗，放入1％番红溶液中复染2分钟。
6．清水冲洗，室温晾干。
7．镜检或封片后镜检。
（三）结果
涂片中可见一些细胞中存在着蓝色或棕色颗粒，为过氧化物酶所在位置。
四、过碘酸雪夫反应（PAS）——显示细胞内糖原（参照照片和示教片）
（一）原理
组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示，其化学基础是利用过碘酸
的氧化作用，打开碳链形成醛，生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化
合物。
（二）方法
l．取l~2mm厚的肝组织块，用Carnoy氏液4℃固定4～6小时。
2．乙醇脱水、二甲苯透明。
石蜡包埋，切片。
3．用70％乙醇展片。
4．脱蜡：
二甲苯
（1）5分钟→二甲苯
（2）5分钟→100％乙醇5分钟→含1％火棉胶的乙
醇液1分钟→70％乙醇1分钟。
5．直接浸入过碘酸酒精液反应5～15分钟，经70％乙醇洗片刻。
6．浸入Schiff氏酒精液反应15分钟。
7．亚硫酸水洗三次，以洗去多余的非特异性结合的色素，以及扩散的染料。
8．流水冲洗3～5分钟。
9．蒸馏水洗。
10．浸入Ehrlich苏木精复染20~30秒，使细胞核着色。
11．脱水：
95％乙醇3分钟二次→100％乙醇3分钟二次→二甲苯透明10分钟二次。
12．加盖片镜检或树胶封固后镜检。
（三）结果
细胞中呈紫红的颗粒即为糖原（参照照片）。
五、苏丹Ⅲ染色——显示细胞内脂肪（示教片）
【作业】
1．用彩色笔绘出Brachet反应及PAS反应的镜下所见。
2．说明着色的碱性蛋白可能是什么物质?
实验六细胞核与线粒体的分级分离
【实验目的】
通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，以了解其原理及过程。
【实验用品】
一、材料和标本小白鼠、冰块。
二、器材和仪器玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、
载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25ml烧杯、玻璃漏斗、解
剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、牙签。
三、试剂0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液、1％甲苯胺兰染液、0.02％詹
纳斯绿B染液、0.9％NaCl溶液。
【实验内容】
一、原理
细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这
一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分
离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化
学组成、理化特性及其功能的主要手段。
匀浆（Homogenization）低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质（即
0.25mol
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