临床病例中病原性细菌的分离与鉴定.docx

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临床病例中病原性细菌的分离与鉴定

实践五临床病例中病原性细菌的分离与鉴定

目的要求

初步掌握动物疫病检测的采样技术、病原微生物的接种、分离、培养、纯化技术及鉴定技术

练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。

实验原理

为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。

稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离

实验材料

样品：

临床病例

培养基：

灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、肉汤培养基、三糖铁培养基。

无菌水：

装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。

其它：

无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。

试剂：

1万U/mL链霉素液、10％苯酚；剪刀，镊子，手术刀，冰块，保温盒，酒精灯

实验步骤

（一）动物疫病检测的采样技术：

重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样

采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具

家禽采样需要：

酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、采样单等

牛羊采样还需：

牛鼻钳、20ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等

猪采样还需：

猪保定器、开口器、扁桃体采样器等

脏器的采取还需：

解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等

所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输

血清样品的采集

家畜采血方法：

雏鸡（禽）心脏采血

左手抓鸡，竖折，手持采血针，平行颈椎。

从胸腔前口插入，回抽风有回稳中有降时，即把针心向外拉，使血液流入采血针

成年禽心脏采血

助手抓住两翅及两腿，右侧握保定，在触及心博动明显处或胸骨前端，背部下部凹处连线的1/2入消毒，垂直或稍向前方刺入2-3cm，回抽见回血时，即把针心各外拉，使血液流入洒血针

成年禽可采取翅静脉采血

助手一手握住禽的两腿，另一手握住两翼，在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向静脉丛刺入，见有血液回流即把针心向外拉，使血液流入采血针，每只禽采血液2-3ml做好标记

牛羊采血方法

牛颈静脉采血

用手按住颈静脉沟的下端及近心端，可看到颈静脉隆起，消毒后在颈静脉隆起处，针头向头端方向快速刺入，抽取5ml血，采血完毕用酒精棉球按压并拔出针头

也可采用尾静脉采血

在牛尾根后下方4-5cm的正中，垂直刺入2-3cm，见有血液回流进入真空采血管

奶牛可乳房静脉采血

奶牛腹部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流进入真空采血管

羊的采血方法：

选用颈静脉采血，方法同牛颈静脉采血

猪的采血方法

耳静脉采血：

站立保定，助手用力在耳根压静脉的近心端，手指轻弹或用酒精棉球反复涂擦耳静脉，使血管扩张，针头沿血管刺入，见有血液回流接入真空采血管

前腔静脉采血：

保定器让猪头仰起，露出右腋窝，针头从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针心向外拉，使血液流入采血真空管

血清分离：

采血后针心后拉抽入少量空气，倾向放置，血液凝固前不能晃动以防止溶血，血液经过自然放置数小时，冬天可置37℃

病原检测样品的采集

1、家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法

取无菌棉签插入鸡喉咙内转动三圈或泄殖腔内转动三圈取出，插入含有1ml含青霉素、链霉素各3000单位的PH值为7.2的pb离心管中，减去漏出部分，盖紧瓶盖，做好标记

2、牛羊O-P液的采取方法：

先禁食12小时，助手保定牛，消毒碳杯，术者手从牛喉角后沿伸入口腔，抓住舌头，将碳杯送入咽喉，顺吞咽动作将采样杯来回抽动三次即可。

将O-P液移入容器或汉克式（Hanks）液中保存。

3、猪扁桃体采取技术

扁桃体采样器使用：

把采样钩拉在扁桃体上，快速扣动板机即可

扁桃体采集：

用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，快速扣动板机取出扁桃体放离心管中

病死畜禽的解剖

与重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具

家禽采样需要：

酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、采样单等

牛羊采样还需：

牛鼻钳、20ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等

猪采样还需：

猪保定器、开口器、扁桃体采样器等

脏器的采取还需：

解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等

所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输

血清样品的采集

家畜采血方法：

雏鸡（禽）心脏采血

左手抓鸡，竖折，手持采血针，平行颈椎。

从胸腔前口插入，回抽风有回稳中有降时，即把针心向外拉，使血液流入采血针

成年禽心脏采血

助手抓住两翅及两腿，右侧握保定，在触及心博动明显处或胸骨前端，背部下部凹处连线的1/2入消毒，垂直或稍向前方刺入2-3cm，回抽见回血时，即把针心各外拉，使血液流入洒血针

成年禽可采取翅静脉采血

助手一手握住禽的两腿，另一手握住两翼，在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向静脉丛刺入，见有血液回流即把针心向外拉，使血液流入采血针，每只禽采血液2-3ml做好标记

牛羊采血方法

牛颈静脉采血

用手按住颈静脉沟的下端及近心端，可看到颈静脉隆起，消毒后在颈静脉隆起处，针头向头端方向快速刺入，抽取5ml血，采血完毕用酒精棉球按压并拔出针头

也可采用尾静脉采血

在牛尾根后下方4-5cm的正中，垂直刺入2-3cm，见有血液回流进入真空采血管

奶牛可乳房静脉采血

奶牛腹部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流进入真空采血管

羊的采血方法：

选用颈静脉采血，方法同牛颈静脉采血

猪的采血方法

1、耳静脉采血：

站立保定，助手用力在耳根压静脉的近心端，手指轻弹或用酒精棉球反复涂擦耳静脉，使血管扩张，针头沿血管刺入，见有血液回流接入真空采血管

2、前腔静脉采血：

保定器让猪头仰起，露出右腋窝，针头从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针心向外拉，使血液流入采血真空管

血清分离：

采血后针心后拉抽入少量空气，倾向放置，血液凝固前不能晃动以防止溶血，血液经过自然放置数小时，冬天可置37℃

病原检测样品的采集

1、家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法

取无菌棉签插入鸡喉咙内转动三圈或泄殖腔内转动三圈取出，插入含有1ml含青霉素、链霉素各3000单位的PH值为7.2的pb离心管中，减去漏出部分，盖紧瓶盖，做好标记

2、牛羊O-P液的采取方法：

先禁食12小时，助手保定牛，消毒碳杯，术者手从牛喉角后沿伸入口腔，抓住舌头，将碳杯送入咽喉，顺吞咽动作将采样杯来回抽动三次即可。

将O-P液移入容器或汉克式（Hanks）液中保存。

3、猪扁桃体采取技术

扁桃体采样器使用：

把采样钩拉在扁桃体上，快速扣动板机即可

扁桃体采集：

用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，快速扣动板机取出扁桃体放离心管中

病死畜禽的解剖与病变组织器官的采取

采样原则：

采集有病变的器官组织，采集病变和健康组织交界处，先采实质器官，如脾、肾，后采集污染的器官组织，如胃肠等。

急性死亡的牛羊先采耳尖血,涂片镜检，排除炭疽。

1、猪的样品采集

活猪先从前腔静脉采血，病死猪沿腹部切开并剥离皮肤，然后酒精棉火焰消毒，更换手套、镊子、剪刀，观察并采集股前淋巴结，下颌淋巴结，然后剪开胸骨，打开胸腹腔，观察心、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、扁桃体、喉头、膀胱、胃、小肠、大肠等器官的病变并采样，如有神经症状，还要采集大脑，用锯锯开脑骨，剪刀剥离脑膜，用镊子取出大脑。

2、家禽的样品采集

先用消毒剂喷湿鸡毛，从两腿到胸部用剪刀剪开，剥离皮肤，用酒精棉火焰消毒，更换手套、镊子、剪刀、沿肋骨下缘剪开，观察肝脏并取样，然后检查心脏、肺脏、脾脏、喉气管、脾胃、肌胃、十二指肠、胰腺、肓肠与盲肠扁桃体、直肠等器官的病变并取样，采样完毕脱掉手套与病禽尸体一起进行无害化处理.采样人员用消毒液洗手消毒，环境采用喷洒消毒，所采病料放带有冰块的冷藏箱保存运送,如不能及时运送或检测，1-3天血清样品可冷藏保存，否则冰冻保存，病料样品冰冻保存期，作细菌培养的样品应冷藏保存和运送，采样同时填写采样单，包括厂名、畜种、日龄、联系人、变化、规模、采样数量、样品名称、编号、免疫情况、临床表现、病理变化等。

（采样单用签字笔或钢笔逐项详细填写，一式三份）

采样时间与数量：

免疫效果检测：

冻干疫苗免疫14天，灭活疫苗免疫21天后，每群采血清30份，进行抗体水平检测。

疫苗监测：

采集禽喉拭子和泄殖腔拭子，牛O-P液，猪扁桃体进行病原监测。

采样数量依据感染的高低，一般可每群随机抽检30-60头（只），有病死时，可采2-3头（只）病死畜禽的器官组织。

病变组织器官的采取

采样原则：

采集有病变的器官组织，采集病变和健康组织交界处，先采实质器官，如脾、肾，后采集污染的器官组织，如胃肠等。

急性死亡的牛羊先采耳尖血,涂片镜检，排除炭疽。

猪的样品采集

活猪先从前腔静脉采血，病死猪沿腹部切开并剥离皮肤，然后酒精棉火焰消毒，更换手套、镊子、剪刀，观察并采集股前淋巴结，下颌淋巴结，然后剪开胸骨，打开胸腹腔，观察心、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、扁桃体、喉头、膀胱、胃、小肠、大肠等器官的病变并采样，如有神经症状，还要采集大脑，用锯锯开脑骨，剪刀剥离脑膜，用镊子取出大脑。

家禽的样品采集

先用消毒剂喷湿鸡毛，从两腿到胸部用剪刀剪开，剥离皮肤，用酒精棉火焰消毒，更换手套、镊子、剪刀、沿肋骨下缘剪开，观察肝脏并取样，然后检查心脏、肺脏、脾脏、喉气管、脾胃、肌胃、十二指肠、胰腺、肓肠与盲肠扁桃体、直肠等器官的病变并取样，采样完毕脱掉手套与病禽尸体一起进行无害化处理

采样人员用消毒液洗手消毒，环境采用喷洒消毒，所采病料放带有冰块的冷藏箱保存运送

如不能及时运送或检测，1-3天血清样品可冷藏保存，否则冰冻保存，病料样品冰冻保存期，作细菌培养的样品应冷藏保存和运送，采样同时填写采样单，包括厂名、畜种、日龄、联系人、变化、规模、采样数量、样品名称、编号、免疫情况、临床表现、病理变化等。

（采样单用签字笔或钢笔逐项详细填写，一式三份）

采样时间与数量：

1、免疫效果检测：

冻干疫苗免疫14天，灭活疫苗免疫21天后，每群采血清30份，进行抗体水平检测。

2、疫苗监测：

采集禽喉拭子和泄殖腔拭子，牛O-P液，猪扁桃体进行病原监测。

采样数量依据感染的高低，一般可每群随机抽检30-60头（只），有病死时，可采2-3头（只）病死畜禽的器官组织。

（二）分离微生物菌检测程序

1、菌落总数的检验程序如下

┌─────┐

│检样│

└─────┘

↓

┌─────────────┐

│做成几个适当倍数的稀释液│ 

└─────────────┘

↓

┌──────────────┐

│选择2～3个适宜稀释度│

│各以1mL分别加入灭菌平皿内│

└──────────────┘

↓

┌─────────────┐

│每皿内加入适量营养琼脂│

└─────────────┘

36±1℃↓48±2h 

┌─────┐

│菌落计数│

└─────┘

↓

┌──────┐

│报告│ 

└──────┘

2、大肠菌群操作程序

┌─────┐

│检样│

└──┬──┘

┌──┴──┐

│稀释│

└──┬──┘

┌─────┴─────┐

│乳糖胆盐发酵管│

│36±1℃,24±2h│

└─┬───────┬─┘

┌───┴─┐┌─┴───┐

│不产气││产气│

└──┬──┘└─┬───┘

┌──┴───┐┌───┴───────┐

│大肠菌群阴性││伊红美蓝琼脂平板│

└──┬───┘│36±1℃,18±24h│

┌──┴──┐└──┬─────┬──┘

│报告│┌───┴─┐┌─┴───────┐

└─┬───┘│革兰氏染色││乳糖发酵管│

│└──┬──┘│36±1℃,24±2h│

││└─┬──────┬┘

┌─┴───┐┌──┴───┐┌─┴───┐┌─┴───┐

│革兰氏阳性││革兰氏阴性││产气││不产气│

└─┬───┘│无芽胞杆菌│└┬────┘└─┬───┘

│└────┬─┘││

┌─┴────┐┌┴───┴─┐┌────┴─┐

│大肠菌群阴性││大肠菌群阳性││大肠菌群阴性│

└─┬────┘└───┬──┘└────┬─┘

┌─┴───┐┌──┴──┐┌───┴─┐

│报告││报告││报告│

└─────┘└─────┘└─────┘

3.金黄色葡萄球菌检验程序如下:

┌─────────────┐

│检样│

│25g（ml）+225ml灭菌生理盐水│

└───────┬─────┘

┌─────┴────┐

┌

报告

┌────────┐

│检样│

└┬──────┬┘

┌──────┴┐┌┴───────────┐

│前增菌法，││直接增菌法│

│冻肉,蛋品,乳品││鲜肉,鲜蛋,鲜乳或其他未经│

│及其他加工食品││加工的食品25g＋灭菌生理│

│25g+BP225mL││盐水25mL，做成检样匀液│

└──┬────┘└───┬────────┘

36±1℃┌─┴─┐一般4h,干蛋品18-24h├───────┐

┌────┴─┐┌┴─────┐┌───┴────┐┌─┴───┐

│10mL＋MM││10mL＋SC100ml││检样匀液25mL＋││检样匀液25mL│

│（或TTB）100ml│└───┬──┘│MM（或TTB）100mL││＋SC100ml│

└─┬────┘36±1℃│18-24h└─┬──────┘└┬────┘

42℃│18-24h│42℃│18-24h36±1℃│18-24h

│┌────┐│┌──┴────┐│

└──┤BS├─┘│DHL（HE、WS、SS）├───┘

└───┬┘└┬──────┘

36±℃│40~48h│36±℃18-24h

┌┴───────┴┐

│挑取可疑菌群│

└───┬─────┘

┌───────┴────────────────┐

│TSI（斜面、底层、产气、H2S），蛋白胨水（靛基质）│

│尿素（PH7.2）,KCN，赖氨酸│

└┬──────┬───────┬───────┬┘

┌─────┴─┐┌───┴───┐┌──┴────┐┌─┴────┐

│H2S＋靛基质－││H2S＋靛基质＋││H2S－靛基质－││非如左述的│

│尿素－KCN－││尿素－KCN－││尿素－KCN－││各种反应结果│

│赖氨酸＋││赖氮酸＋││赖氨酸＋/-│││

└─────┬－┘└───┬───┘└──┬────┘└┬─────┤

│┌────┴──┐┌──┴───┐│

││甘露醇,山梨醇││ONPG││

│└────┬──┘└──┬───┘│

┌─────┴─┐┌──┴────┐┌─┴────┐┌─────┐

│沙门氏菌││沙门氏菌││非沙门氏菌││非沙门氏菌│

│血清学试验││血清学试验│└─┬────┘└┬────┘

└──┬────┘└───┬───┘││

└──────────┼──────┴──────┘

┌──┴────┐

│报告│

└───────┘

（三）微生物的培养

制平板：

每组制培养皿3付。

在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。

病原性球菌分离鉴定

常见的病原性球菌，根据革兰氏染色性不同，可分为革兰氏阳性的葡萄球菌、链球菌、肺炎

双球菌及革兰阴性的脑膜炎球菌、淋球菌等。

这类球菌广泛的分布于自然界和健康人皮肤，

鼻咽腔及肠道。

当机体抵抗力降低或在医疗实践中无菌操作不严格时，常常引起化脓性感染

，故又把这类球菌称为化脓性球菌。



脓汁标本的采集和处理

1．严格的无菌规范采集标本。



2．标本采集后应该尽快进行分离培养，以提高阳性检出率。

对用于检查脑膜炎球菌的标本

，还要注意保湿，防治干燥。



3．有些标本，在分离培养时需要做预处理。

如尿液和脑脊液标本常需要做无菌离心，然后

取沉淀物进行培养。

血液标本应首先做增菌培养。



4．厌氧菌感染的脓汁标本常有腐臭味应予注意。

标本采集和运送是否合格，对厌氧菌培养

至关重要。

采集标本时，应避免被正常菌群所污染，尽量避免接触空气，及时送检。



5．标本是否直接镜检视标本的种类而定。

脓汁及创伤分泌物标本均应做直接镜检，以了解

标本内细菌的数量、形态、排列和染色性，这对于选择适宜的培养基具有参考价值。

标本的检验程序

直接涂片、染色（革兰氏或抗酸染色）、镜检；再采用需氧或厌氧分离培养脓汁（血平板、EMB

或普通琼脂平板），挑选可疑菌落，再行染色，同时进行纯培养、鉴定和药敏试验。

分离培养方法

（一）分离培养

1．左手斜持平板底，右手持接种环，接种环在火焰上灭菌（接种环与火焰之间相交成15

。

角）。

冷却后，沾取脓汁标本一接种环，先在平板的一端涂开并在平板的1/3面积上划密

集的平行线，接种环在火焰上灭菌。



2．将平板旋转约70。

，待接种环再次灭菌冷却后，使接种环通过已划线的“Ⅰ”区5—7

次，以后即不与“Ⅰ”区接触做连续密集划平行线，约占平板面积的1/3。

接种环再一次灭菌。

3．再转平板约70。

，如上法在第Ⅲ区划线，划满余下的培养基表面。



4．划完线后，先盖好平板，再将接种环上的残留细菌用火焰灭菌。

在平板底面的一隅用特

种铅笔写上班级和学号，然后是平皿底面向上放于铁丝筐中，送37℃培养18—24h。

如有孤立菌落生长，即可获得纯种细菌。

分离培养技术中划线操作很重要，划线要求平行密集但不重复。

接种环上带的细菌在划线过程中就陆续附在培养基表面上，初划线的区域附着的细菌较多，后划线的区域细菌越来越少。

有些地方，尤其是第Ⅲ区就可能有分散的单个细菌在培养基表面。

经培养后，即可能生长繁殖成单个菌落。

（二）分离培养结果观察

肉眼观察：

先一般性地观察整个培养基上的菌落，再选有代表性的孤立菌落做如下详细观察

：

大小—直径（mm）或针尖大、豆粒大等，或记载为：

大菌落（直径在5毫米以上），中等

大小菌落（直径在3毫米左右），小菌落（直径在1毫米左右）。



性状—点状、圆形、卵圆形、叶状等。



边缘—整齐、锯齿状、毛发状等。



表面—光滑、皱纹、湿润、干燥等。



隆起度—凸起、扁平、中心凹陷等。



结构—均质状、颗粒状等。



透明度—透明、半透明、不透明等。



观察菌落时，不要将空气中落入生长的杂菌误认为分离培养出的细菌。

杂菌生长于划线痕迹

之外，或为个别的形状异常的孤立菌落。

另外，也要注意保护好平板，勿使再落入杂菌。

〖HT7”

（三）革兰氏染色镜检

选择经肉眼详细观察过的孤立菌落，用特种铅笔在平皿底面划圈作为标记，经老师检查后再

涂膜，做革兰氏染色。



【方法】

根据菌落特征和镜检所检基本可以确定细菌类别，如不能可做下一步鉴定：



（四）培养结果为革兰氏阳性时应作如下鉴定

1．初步判定为葡萄球菌，做甘露醇发酵和血浆凝固酶试验，以判定是否为金黄色葡萄球菌

。

需与链球菌鉴别时，应做触酶试验。

葡萄球菌触酶试验阳性，链球菌为阴性。



2．初步疑为链球菌时，根据溶血环的特征决定甲、乙、丙三型，同时接种肉汤培养基，观

察其生长特征，再涂片染色镜检，视其链状排列状况做出鉴定。

若疑为甲型链球菌则应做胆

汁溶菌试验，以与肺炎球菌鉴别。



3．形态、染色、菌落疑为肺炎球菌时，应做荚膜观察，并做菊糖发酵和胆汁溶菌试验。



4．形态、染色、菌落疑为脑膜炎球菌时，应做葡萄糖、麦芽糖、蔗糖发酵试验，氧化酶试

验及血清学鉴定。



（五）葡萄球菌的鉴定方法

1．血浆凝固酶试验（略）

2．触酶试验（略）

3．耐热核酶试验（略）

4．细菌对药物的敏感性试验（略）

（六）肺炎双球菌的鉴定方法

（一）肺炎双球菌感染小白鼠实验

【材料】

1．小白鼠、肺炎双球菌培养液。



2．注射器、3.5%碘酒、75%酒精、3%来苏儿液、镊子、剪刀、解剖盘。



3．载物玻片、荚膜染色液。



【方法】

1．小白鼠腹腔接种法：



固定—去毛—消毒—填写动物实验纪录标签（或卡片）—饲养—观察。



（1）用右手拇指、食指提起鼠尾，使鼠爬于鼠罐铁丝盖上，向后拉尾巴，则鼠成固定状态

。

此时迅速以左手拇指、食指捏住鼠头颈背部皮肤、提起、迅速翻转，使鼠腹部向上躺于掌

面。

然后以小指或无名指挟住鼠尾及左右腿处，中指垫于鼠背下，于左侧腹股沟部去毛，用

碘酒酒精消毒。



（2）将鼠头向下，使肠管倒向横膈膜，免遭刺伤，右手持住注射器，以15。

倾斜方向先

将针头刺入皮下，再将注射器提起，以近垂直方向穿透腹壁肌层与腹膜而进入腹腔，试抽注射器，若无物吸入时，说明针刺在腹腔内，立即可将感染材料注入，注射量以0.2ml为宜。

（3）注射完毕，用酒精棉签轻轻按压注射处片刻，以防止注入液外溢，并可达到消毒的目的。



（4）注射完毕的小鼠，标以记号（以染色液涂于鼠头部或背部）。

置入鼠罐内，并填写动

物实验卡或标签。

注明试验动物名称、记号、注射材料、部位、数量以及注射日期等，然后

贴于鼠罐壁上。

动物应饲养于隔离室内，每日早、晚喂食一次，喂前进性观察，注意有无发

病症状如食欲不振、竖毛、不活泼等现象，记入卡片，标签内。



（5）待动物频于死亡之前或观察一定时间后，杀死解剖，作细菌学及病理学检查。



2．小鼠尸体解剖与细菌学检查法

将一切器材准备妥当，放置于适当位置，然后进行解剖。



（1）将小鼠在3%来苏儿液中浸湿皮毛，仰卧于解剖台上，用固定钉固定其四肢，用碘酒充

分消毒腹部皮肤。



（2）用镊子提起下腹部皮肤，以钝头剪刀自近耻骨联合处至下颌部作直线剪开皮肤，再由

剪开线近四肢的两端，横向剪开四肢，剥离皮下组织，皮肤向腹部两侧翻转，并用固定钉固

定之。

观察注射部位及所属淋巴结有无充血肿大，粘连等病理变化。



（3）用碘酒消毒胸腹壁，将剪刀和镊子蘸酒精在火焰上灭菌，解剖胸腔，自横膈膜沿软骨

分别向上剪开直至上胸腔口，剪断一侧胸锁韧带，翻起胸骨，暴露胸腔脏器后，观察有无病

变。

然后剪开心脏，取心脏组织涂片，染色镜检。

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（4）将剪刀与镊子灭菌，继续解剖腹腔，从耻骨至横膈膜直线剪开肌层与腹膜。

此时应特

别注意勿损伤肠管，以免污染。

暴露腹腔脏器后，观察腹腔内有无渗出液及其它性状，并做

涂片检查，然后横剪开，观察肠管腹膜有无粘连、肝、脾、肾等脏器有无充血、肿大、粘连

以及病灶等变化。

然后取脾、肝等组织涂片。

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（5）解剖完毕，尸体浸入3%来苏儿液内，然后深埋或焚烧。

解剖台以来苏儿液消毒，解剖

器材煮沸灭菌。

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