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复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者肠黏膜
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者肠黏膜
作者:
赵佳,沈霖,范恒朱锐
【摘要】目的观察复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者肠黏膜K基因结合核转
录因子(NF-B)及信号转导和转录激活因子6(STAT6)活化的影响,探讨复方苦参结肠溶
胶囊的治疗该病的可能机制。
方法将34例溃疡性结肠炎患者随机分为两组,中药组22
例使用复方苦参结肠溶胶囊治疗,西药组12例使用柳氮磺吡啶治疗。
两组均治疗8
周。
观察比较两组治疗前后的症状、体征、大便常规、结肠镜和病理检查,并采用免
疫组化方法检测两组治疗前后的NF-Bp65及STAT6的表达情况。
结果中药组临床疗
效总有效率为100%,西药组为75%(P0.05);中药组结肠黏膜病变疗效总有效率为90.9
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%,西药组为75%(P0.05)。
两组患者治疗后NF-Bp65及STAT6的表达均降低,且中
药组优于西药组(P0.05)。
结论复方苦参结肠溶胶囊抑制NF-Bp65及STAT6的活化及
表达可能是其治疗溃疡性结肠炎的疗效机制之一。
【关键词】结肠炎溃疡性复方苦参结肠溶胶囊K基因结合核转录因子信号转导
和转录激活因子6
Abstract:
ObjectiveToobservetheeffectofCSFJConexpressionofNF-BandSTAT6in
theintestinalmucosaofpatientswithulcerativecolitisandtostudythepossiblemechanism.
Methods34patientswithulcerativecolitiswererandomlydividedintoatradionalChinese
medicine(TCM)group(n=22)treatedbyCSFJC,andaWesternmedicine(WM)group
(n=12)treatedbySulfasalazineTablets,bothofthemweretreatedfor8weeks.Beforeand
afterthetreatment,thesymptoms,thephysicalsign,theroutinestooltest,thecolonoscope
andpathologicalexaminationinthetwogroupswereobservedandcontrasted.Moreover,the
expressionsofNF-BandSTAT6weredetectedwithimmunohistochemistryinthetwo
groups.ResultsThetotaleffectiverateoftherapeuticeffectwas100%intheTCMgroupand
75%intheWMgroup,andthetotaleffectiverateofcolonicmucosaLesionwas90.9%in
theTCMgroupand75%intheWMgroup,andtherewerebothsignificantdifferences(P
0.05).Afterthetreatment,expressionsofNF-BandSTAT6inpatientsofthetwogroups
weredecreased,however,theresultsoftheTCMgroupwerebetterthantheresultsofthe
WMgroup,withsignificantdifference(P0.05).ConclusionCSFJCcaninhibittheactivation
andexpressionofNF-BandSTAT6,whichmaybeoneofthemechanismsfortreatmentof
ulcerativecolitis.
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Keywords:
Colitis,Ulcerative;CompoundSophoraeFlavescentisJiechangrongcapsule;
NF-B;STAT6
溃疡性结肠炎是一种病因尚不十分清楚的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病,病
变主要限于大肠黏膜与黏膜下层,临床表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛,病情轻重不
等,多呈反复发作的慢性病程[1]。
前期研究作者采用复方苦参结肠溶胶囊治疗本病,
疗效显著[2]。
在此基础上,本研究重点观察复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者
肠黏膜K基因结合核转录因子(NF-B)及信号转导和转录激活因子6(STAT6)表达的影
响,并探讨其疗效机理。
现报道如下。
1临床资料
1.1病例纳入及排除病例的选择参照中华医学会消化分会2000年成都全国炎症性肠
病学术研讨会炎症病诊断治疗规范的建议的标准进行。
34例溃疡性结肠炎患者均为
2005-07~2006-05间在武汉协和医院中医科门诊就诊的患者。
全部病例均有持续性或
反复发作的腹泻、腹痛、粘液便或脓血便的临床症状,且中医辨证为湿热内蕴证。
结
肠镜检查可见黏膜血管纹理模糊、紊乱、充血、水肿、出血及脓性分泌物附着。
病变
明显处可见弥漫性多发糜烂或溃疡。
病理检查可见固有膜内有弥漫性、慢性炎症细胞
及中性粒细胞,嗜酸性粒细胞浸润,隐窝有急性炎症细胞浸润,隐窝上皮增生,杯状
细胞减少。
全部病例按临床严重程度分级:
腹泻每日4次以下,便血轻或无,无发
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热、脉搏加快或贫血为轻度;介于轻度和重度之间为中度;腹泻每日6次以上,伴明显黏
液血便,体温37.5℃,脉搏90次/min,血红蛋白100g/L为重度。
结合临床症状及实验
室检查排除细菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸虫病、肠结核等感染性结肠炎及克隆
病、缺血性肠炎、放射性肠炎患者及结肠癌、直肠癌患者,并排除症状严重伴全身中
毒性症状的急性爆发型患者。
1.2一般资料将34例患者随机分为两组。
中药组22例中,男5例,女17例;年龄
25~64岁,平均(32.5112.46)岁;病程1.5~25年,病情程度轻度9例,中度11例,重
度2例。
西药组12例中,男6例,女6例;年龄24~62岁,平均(31.7311.58)岁;病程
2~28年,病情程度轻度5例,中度6例,重度1例。
两组患者的年龄、病情程度比较
差异无统计学意义(P0.05),具有可比性。
所有病例均经结肠镜和病理学检查治疗前后
各1次,所有标本均由病理活检取出,各切出3片,1片行HE染色,另2片行免疫组
织化学染色。
2方法
2.1治疗方法中药组口服复方结肠溶胶囊,本方由苦参、地榆、青黛、白及、甘草等
组成。
该药由北京中惠药业有限公司研制的中药新药(第六类),口服4粒/次,0.4g/
粒,3次/d。
治疗期间停用其他治疗溃疡性结肠炎的中、西药。
西药组依据病情口服柳
氮磺吡啶片,4片/次,0.25g/片,3次/d,该药由上海福达制药有限公司生产。
两组疗
程均为8周。
治疗前后检测血、尿、大便常规,肝、肾功能,心电图,并进行结肠镜
及病理检查。
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2.2NF-Bp65及STAT6检测[3]采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连结法(SP
法)。
4m石蜡切片脱蜡至水,3%过氧化氢去离子水室温孵育10min,将组织切片浸入
组织抗原修复液(枸橼酸钠液)中,后置入微波炉内进行组织修复(高温)2min。
室温放凉
15min,PBS洗3次,3min/次,滴正常小牛血清封闭,置于恒温培养箱37℃30
min,倾去血清,滴加一抗,4℃冰箱孵育过夜,后用37℃恒温培养箱孵育40min。
PBS洗2次,3min/次,滴加生物素标记的二抗,37℃孵育40min。
PBS洗3次,3
min/次,辣根过氧化物酶的链霉卵白素,37℃孵育30min。
倾去多余的二抗。
PBS洗
3次,3min/次。
DAB显色液显色,显微镜下控制显色时间。
用苏木素复染,乙醇脱
水,二甲苯透明,中性树脂封片。
两种一抗分别为兔抗人NF-Bp65多克隆抗体及兔抗
人STAT6多克隆抗体(均购自武汉意德生物技术有限公司),SP试剂盒购自北京中杉金
桥生物技术有限公司。
每张片子随机选取8个高倍镜视野(200),用免疫组化分析软件
系统HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统(华中科技大学同济医学院清屏影像
公司)对所选视野内的棕黄色阳性信号进行图像分析,计算各组患者肠黏膜NF-Bp65
及STAT6的阳性表达情况,即代表阳性强度的平均光度的均值。
2.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件处理数据,使用(s)表示,治疗前后比较采
用配对样本t检验,组间比较采用卡方检验。
3结果
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3.1疗效判定标准参照中华医学会消化分会2000年成都全国炎症性肠病学术研讨会
对炎症病诊断治疗规范的建议及《中药新药治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的临床
研究指导原则》(2002年试行版)进行判定。
3.1.1临床疗效判定标准临床症状消失,结肠镜检查黏膜大致正常为完全缓解;临床症
状基本消失,结肠镜复查黏膜轻度炎症或部分假息肉形成为有效;临床症状、内镜及病
理检查无改善为无效。
3.1.2黏膜病变疗效判定标准肠镜复查黏膜病变恢复正常,或溃疡病灶已形成瘢痕;肠
镜复查粘膜病变恢复程度达2级以上,为显效(完全缓解);肠镜复查黏膜病变恢复程度
达1级以上为有效;肠镜复查黏膜病变改善未达到以上标准,甚至加重者为无效。
3.2两组临床疗效比较中药组22例治疗8周,显效12例,有效10例,无效0例,
总有效率为100%;西药组12例中,显效4例,有效5例,无效3例,总有效率为75
%。
两组临床疗效差异有统计学意义2=5.63(P0.05)。
3.3两组黏膜病变疗效比较中药组22例中,显效9例,有效11例,无效2例,总有
效率为90.9%;西药组12例中,显效4例,有效5例,无效3例,总有效率为75%。
两组比较差异有统计学意义2=6.52(P0.05)。
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3.4NF-Bp65及STAT6的测定两组患者治疗后NF-Bp65及STAT6的表达均降低,
中药组与西药组治疗后比较差异有统计学意义t=2.54,P=0.02(P0.05),且中药组优于
西药组。
见表1。
表1各组NF-Bp65及STAT6表达平均光度的比较(略)中药组与西
药组治疗后比较,差异有统计学意义(P0.05)
NF-Bp65及STAT6活化后阳性表达为棕黄色,主要定位于细胞核,中药组治疗前阳
性表达强,中药组治疗后阳性表达明显减弱(见图1)。
4讨论
正常情况下,NF-B与抑制蛋白IB结合在细胞质中,处于非活化形式。
当细胞受到
刺激后,IB磷酸化并随后被降解,NF-B就转入细胞核中并激活相关基因的转录[4]。
STAT6属于信号转导和转录激活因子(STATS)家族中的一员。
与STAT家族中其他成
员的结构相似,STAT6在它的N末端附近有4个螺旋区域,中心有DNA结合区域,
一个含磷的酪氨酸结合区域(Src同族域或SH2),以及在C的末端有转活区域[5]。
STAT6在胞质中以一种潜伏的单体形式存在,如果某种刺激因素使STAT6结合在IL-4
受体上,STAT6的641位点上的酪氨酸残基发生磷酸化,STAT6被激活,进入细胞
核,与特定基因的启动子结合,诱发特发基因的表达[6]。
既往研究表明,与正常组比较,溃疡性结肠炎患者肠黏膜中NF-Bp65的活化及表达
是增高的[7]。
同样与正常组比较,溃疡性结肠炎患者肠黏膜中STAT6的表达上调
7
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[8]。
活化后的NF-B转入细胞核,刺激IL-1、TNF-、IL-6、IL-8、MHCⅡ类分子、
ICAM-1及iNOS的表达[9]。
活化的STAT6参与了Th2的分化[10],Th1/Th2的平衡
失调。
tips:
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关于麻疯树提取物体外抗病毒和杀菌作用的初步研究
作者:
刘娟,雷蕾,唐琳,李昱星,陈放
【摘要】目的研究麻疯树提取物的体外抗病毒和杀菌作用,为进一步提取分离有效
成分提供实验依据。
方法采用细胞培养技术,观察麻疯树1,2,3号提取物对单纯疱
疹Ⅰ型病毒(HSV-Ⅰ)、单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-Ⅱ)和流感A3型病毒(A3)的直接灭活作
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用以及抑制它们增殖的作用;采用悬液定量杀菌法,观察麻疯树1号提取物对白色念珠
菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭作用。
结果麻疯树1,2,3号提取物对细胞的
毒性较小;提取物既能抑制单纯疱疹病毒在胞内的增殖,又能直接灭活该病毒;总体而
言,提取物对HSV-Ⅰ在胞内增殖的抑制作用略优于HSV-Ⅱ,对HSV-Ⅰ的直接灭活作
用更是显著强于HSV-Ⅱ;提取物对A3的直接灭活作用效果显著;3号提取物还能抑制
A3在鸡胚内的增殖。
麻疯树1号提取物对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具
有极强的杀灭作用。
结论麻疯树提取物具有体外抗病毒、杀菌的作用。
【关键词】麻疯树提取物抗病毒杀菌
Abstract:
ObjectiveToprovideanexperimentalevidenceforfurtherextractionand
separationofactivecomponents,weinvestigatedtheantivirusandbactericidaleffectsof
extractsfromJatrophacurcasL.invitro.MethodsWeappliedthemethodofcellcultureto
observeextractsfromJatrophacurcasL.,No.1,2,3,directlykillingherpessimplexvirus
(HSV-ⅠⅡ)andinfluenzavirusA3,aswellasinhibitingtheirproliferationincells.In
anotherexperiment,weobservedthebactericidaleffectofNo.1extractfromJatrophacurcas
L.onCandidaalbicans,StaphylococcusaureausandEscherichiacoli.ResultsTheextracts
fromJatrophacurcasL.,No.1,2,3,hadlowercytotoxicity.Alltheextractscouldinhibitherpes
simplexvirusfromproliferatingincellsanddirectlykillthevirus.Theirinhibitoryactionon
theproliferationofHSV-ⅠwasalittlebetterthanⅡ,whiletheirinhibitoryeffectonHSV-
ⅠwasobviouslystrongerthanⅡ.AlltheextractswereabletokillinfluenzavirusA3
directly,andextractNo.3couldinhibittheproliferationofthisvirusinembryonatedegg.
Furthermore,No.1extracthadaverystrongbactericidaleffectonCandidaalbicans,
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StaphylococcusaureausandEscherichiacoli.ConclusionExtractsfromJatrophacurcasL.
haveantivirusandbactericidaleffectsinvitro.
Keywords:
JatrophacurcasL.;Extracts;Antivirus;Bactericidal
麻疯树JatrophacurcasL.,又名黄肿树、芙蓉树、假花生、亮桐、吗哄罕、桐油树、
南洋油桐,属于大戟科(Euphorbiaceae)麻疯树属Jatropha植物,主要分布于热带和亚热
带地区[1]。
麻疯树全身皆可入药,根、茎皮和叶外用具有消肿散淤、止血、杀虫止痒
的功能[2~4],可用于跌打肿痛、创伤出血、皮肤瘙痒、湿疹等;茎叶内服还可以治疗
胆结石[2,5];另经临床试验证明[6],其乳汁具有抗病毒作用。
近年来还发现麻疯树种
子具有显著的抗癌活性[7]。
由此可见,麻疯树作为一种新兴的资源植物,在新药开发
方面具有巨大的应用价值。
1材料
1.1细胞非洲绿猴肾(Vero)传代细胞,由中国中医科学院西苑医院基础研究中心病毒
室提供。
1.2鸡胚九日龄鸡胚,购自中国农业科学院。
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1.3病毒单纯疱疹Ⅰ型病毒株(HSV-Ⅰ)、单纯疱疹Ⅱ型病毒株(HSV-Ⅱ)和流感A3
型病毒株(A3),由中国预防医学科学院病毒所提供。
HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ经Vero细胞增
毒后,分别收集,备用。
A3经九日龄鸡胚增毒后,其红细胞凝血效价为1∶160,收
集,备用。
1.4菌种白色念珠菌(Candidaalbicans,ATCC10231)第5代培养物,金黄色葡萄球菌
(Staphylococcusaureaus,ATCC6538)第4代培养物,大肠杆菌(Escherichiacoli,
ATCC8099)第4代培养物,均由四川省疾病预防控制中心提供。
1.5药物麻疯树提取物:
麻疯树干叶60%乙醇的浸提液,经低压浓缩并冷冻干燥后
制得黑褐色粉末,编为1号,含生药10g/g。
以上述浸提液为原料,以大孔树脂吸附层
析法进行梯度洗脱,收集30%和50%乙醇洗脱的产物,经低压浓缩并冷冻干燥后制得
粉末为黄绿色和棕黄色,对应编为2号和3号,分别含生药33g/g和100g/g。
阿昔洛
韦滴眼液,1mg/ml,武汉五景药业有限公司生产,批号为07010904。
病毒唑注射液,
100mg/ml,宜昌三峡制药厂生产,批号为20070311。
1.6仪器与试剂96孔细胞培养板;CO2孵箱(日本Yamato科学株式会社);倒置显微镜
(重庆光学仪器厂,型号:
1833670);微孔滤器。
DMEM干粉培养基(美国Invitrogen公
司,批号:
1290007)、胎牛血清、吐温。
细胞生长液(含10%胎牛血清)、维持液、消化
液以及胰酶液(含2%胎牛血清)等按《医学病毒学基础及实验技术》[8]配制。
胰蛋白胨
大豆琼脂培养基(TSA)、胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)、磷酸盐缓冲液(PBS)等按《消
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毒技术规范》[9]配制。
2方法与结果
2.1药物体外抗单纯疱疹病毒(HSV)实验[8]
2.1.1HSV对Vero细胞的毒力测定将长成单层的Vero细胞用胰酶液消化成单个细
胞,以细胞生长液调整细胞数至8.0104ml。
按每孔0.1ml加入96孔细胞培养板内,
放在37℃,5%CO2孵箱中培养24h。
待96孔细胞培养板内的Vero细胞长成单层后,
取上述制备好的HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ毒株,用维持液将其分别做10倍系列稀释(10-1~
10-10),然后按0.1ml/孔接种于细胞培养板内的Vero单层细胞中,每浓度6个复孔,
同时设细胞对照。
置37℃,5%CO2孵箱中培养7d,每日观察并记录细胞病变
(cytopathiceffect,CPE),测定组织细胞半数感染量(TCID50)。
结果见表1。
表1单纯
疱疹病毒的毒力测定(略)
按照Reed-Muench氏法[8]计算,HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ的TCID50分别为10-4.6/ml和
10-3.7/ml。
在2.1.3和2.1.4项实验中,所用病毒液浓度为100TCID50/0.1ml。
2.1.2药物对Vero细胞的毒性实验用维持液分别将1,2,3号药物作系列倍比稀
释,药液浓度梯度为2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.03125mg/ml,加入96孔细
12
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胞培养板的Vero单层细胞中,0.1ml/孔,每实验组4个复孔,同时设细胞对照和阿昔
洛韦对照(阳性对照)。
置37℃,5%CO2孵箱中培养,观察CPE,并记录各药物的最大
无毒浓度(TC0),共7d。
最后,按照Reed-Muench氏法[8]计算出各药物的半数有毒浓
度(TC50)。