农药生物测定实验指导 1.docx
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农药生物测定实验指导1
农药生物测定实验指导
（自编试用1.0）
主编：
姜兴印
副主编：
赵春青张卫光
制药工程专业用
山东农业大学植物保护学院
2008年9月
棉铃虫人工饲料制备
一、实验目的
学习棉铃虫人工饲料制备技术和方法。
本方法还适合玉米螟等人工饲料的制备。
二、实验用品和仪器设备
仪器设备：
天平、高压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛子（40目）、量筒、搪瓷盘、温度计
实验物品：
小麦粉、玉米粉、黄豆粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、VC、棉油、苯甲酸钠、山梨酸钾、兽用链霉素、水等
三、实验方法
1.配方：
用料
用量（g）
用料
用量（g）
小麦粉
300
琼脂
45
玉米粉
300
山梨酸钾
10
大豆粉
200
苯甲酸钠
5
棉叶（风干）
35
链霉素
200万单位
Vc
10
棉油
5ml
酵母粉
80
水
2000ml
2.小麦粉、玉米粉、黄豆粉、酵母粉和棉叶装入罐头瓶中，高压灭菌40min.（120℃）
3.水+琼脂煮开冷却至70℃，加入Vc、防腐剂、棉油混匀，再加入混合好的其他成分，充分混匀。
4.倒入搪瓷盘，加盖冷却后放入冰箱中备用。
四、质量检查
饲料冷却后观察颜色和固化成型情况。
五、实验报告
农药生物测定药剂配制
一、实验目的
学习生物测定药剂配制的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备
电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：
93%顺式氯氰菊酯，95%吡虫啉
实验制剂：
50%多菌灵WP，2.5%功夫EC（w/w），33%施田补EC（w/v）
三、实验方法
1.原药母液的配制与稀释
（1）用丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L50mL丙酮液。
（2）用丙酮配制1％吡虫啉母液50mL，然后稀释成125mg/L50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡虫啉按照5：
2的比例混合，配制1.5%混剂50mL丙酮液。
2.制剂的稀释
（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L100mL的水溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L100mL的水溶液（烧杯）。
（3）33%施田补EC，稀释成150mg/L100mL的水溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理
将以上每一种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
五、实验报告
撰写实验报告。
杀虫剂毒力测定－微量点滴法
一、实验目的
学习微量点滴法测定杀虫剂触杀毒力的实验操作技术和方法，学习和使用微量点滴仪。
二、实验用品和仪器设备
生化培养箱、电子天平、计算器、微量点滴仪、烧杯、移液管、养虫盒、镊子、滤纸、记号笔、容量瓶等。
实验药剂：
顺式氯氰菊酯，2.5、5.0，10，20，40mg/L
实验材料：
玉米螟5龄幼虫
三、实验方法
1.药剂配制与稀释
用丙酮配制1％顺式氯氰菊酯母液，然后稀释成系列浓度。
2.试虫选取与称重
选择个体大小一致的5龄幼虫，每个处理浓度3次重复，每个重复20头幼虫，电子天平称重求平均虫重。
3.微量点滴仪的使用方法和注意事项
4.药剂点滴
点滴部位：
幼虫前胸背面，点滴量1.0uL左右，以溶剂处理为对照。
5.点滴后的幼虫放置在养虫盒内，5头/盒，饲喂人工饲料，置于28℃的生化培养箱中。
四、结果检查和处理
处理48h后检查死亡数，用毛笔尖端或尖头镊子轻轻触动虫体，以不能正常爬行者为死亡。
计算死亡率和校正死亡率，并求毒力回归方程和LD50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
杀虫剂毒力测定－浸渍法
一、实验目的
学习浸渍法（浸虫和浸叶法）测定杀虫剂触杀毒力和胃毒毒力的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备
生化培养箱、电子天平、计算器、浸虫器、烧杯、移液管、养虫盒、镊子、滤纸、记号笔、容量瓶等。
实验药剂：
80％氟虫腈WG
实验材料：
小菜蛾3龄幼虫，甘蓝叶片
三、实验方法
1.药剂配制与稀释
将药剂稀释1.0×105×，2.0×105×，4.0×105×，8.0×105×，以清水为对照。
2.采用浸渍法先将甘蓝叶片在不同浓度的药液中处理3－5s，放在报纸上晾干，放在养虫盒里，每盒1片。
3.用浸虫器将小菜蛾幼虫在药液中浸渍处理3－5s，每一浓度处理30头，分为3次重复，每一重复10头幼虫放在1个养虫盒内。
4.28℃生化培养箱饲养。
四、结果检查和处理
处理3d后检查结果，用毛笔尖端或尖头镊子轻轻触动虫体，以不能正常爬行者为死亡。
计算死亡率和校正死亡率，并求毒力回归方程和LC50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
杀虫剂触杀毒力测定-滤纸片药膜法
一、实验目的
学习滤纸片药膜的准备方法和利用药膜测定杀虫剂对鳞翅目初孵幼虫的毒力。
二、实验用品和仪器设备
电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒、滤纸、大头针、泡沫板、毛笔、培养皿、秒表、丙酮、石油醚、缝纫机油等。
实验原药：
90%辛硫磷原油
实验材料：
玉米螟初孵幼虫
三、实验方法
1.混合溶剂的配制
丙酮：
石油醚：
缝纫机油＝1：
3：
1
2.原药母液的配制
用混合溶剂配制1％辛硫磷母液50mL。
3.药膜的制备
取直径9cm滤纸，放于用三根大头针做成的支架上，吸取1mL1%辛硫磷母液，从滤纸中心向外均匀环形滴加，使其充分湿润，待溶剂挥发后，放于直径9cm的培养皿内备用，以混合溶剂处理为空白对照。
4.初孵幼虫的处理
用软毛笔迅速挑取玉米螟初孵幼虫30头于滤纸上，并立即计时，培养皿的一侧加一微光源，玉米螟由于有趋光性，会迅速爬向光照得一方，不断转动培养皿，使玉米螟保持爬动，以不能爬动的为死虫，观察幼虫击倒时间及头数，重复3次。
四、结果计算和处理
计算各个处理幼虫的击倒率和校正击倒率，求得毒力回归方程和击倒中时（KT50）。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行分析和讨论。
杀螨剂毒力测定－浸玻片法
一、实验目的
学习浸玻片法测定杀螨剂的实验操作技术和方法。
本方法适合测定螨体背部刚毛较短的各种雌成螨。
二、实验用品和仪器设备
生化培养箱、电子天平、计算器、双目解剖镜、烧杯、移液管、载玻片、双面胶带、零号毛笔、记号笔、搪瓷盘、吸水纸、薄海绵、剪刀等。
实验药剂：
2.5％功夫乳油，2000×、4000×、8000×、16000×、32000×
实验材料：
山楂叶螨
三、实验方法
1.将双面胶带剪成2cm长，贴在载玻片的一端。
2.用零号毛笔挑起3－4日龄的雌成螨，迅速将其背部粘在胶带上，每行粘10头，粘2－3行。
3.双目解剖镜仔细观察粘在胶带上的螨，用毛笔除去粘在胶带上不规则的螨，如足、腹面、头部等粘在胶带上，只保留符合规定的雌成螨。
25℃，相对湿度80％左右的条件下放置4h后，再用解剖镜观察，足能够正常活动的个体符合实验要求，去除不合格的其它个体，并记录存活个体数。
4.用水将实验药剂配制成5个系列浓度，置于100mL烧杯中，用手持玻片无螨的一端，将粘有螨的一端在药液中浸渍5s，取出后用吸水纸吸去多余的药液。
对照用清水处理。
每个处理重复3－4次。
5.在搪瓷盘中铺设厚度为1.0cm的海绵或吸水纸，其上铺蓝布，加水湿透海绵（或吸水纸）和蓝布，不要积水。
将玻片平放在上面，置于25℃的生化培养箱中。
四、结果检查和处理
处理24h后检查死亡数，用毛笔尖端轻轻触动螨足，以不动者为死亡。
计算死亡率和校正死亡率，并求毒力回归方程和LC50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
杀菌剂室内毒力测定－生长速率法
一、实验目的
学习生长速率法测定杀菌剂室内毒力的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备
生化培养箱、电子天平、计算器、直尺、培养皿、烧杯、移液管、打孔器（直径0.5cm）、移菌环、酒精灯、记号笔、容量瓶、三角瓶（50mL、250mL）、超净工作台、PDA培养基、微波炉、高压灭菌器、电饭煲、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。
实验药剂：
95%乙霉威原药
实验材料：
灰葡萄孢菌
三、实验方法
1.PDA培养基的制备和灭菌，培养皿、移液管、三角瓶（50mL）灭菌。
2.灰葡萄孢菌的培养
PDA平板培养灰葡萄孢菌，菌落生长达2/3皿。
3.药剂配制与稀释
先将原药用丙酮配制1%母液，再用丙酮稀释成25、50、100、200、400mg/L，以丙酮为对照。
4.带药PDA平板的制备和接菌
在无菌的超净工作台上，50mL三角瓶中准确加入4.0mL药液，再加入冷却至50℃左右融化的PDA培养基至50mL刻度线，迅速摇匀后平均倒入到3个直径9cm的培养皿中，制备成带药平板，每个浓度3次重复。
以丙酮为对照。
用灭菌的打孔器在灰葡萄孢菌菌落的边缘打取菌饼，接入到带药平板中央。
25℃生化培养箱培养。
四、结果检查和处理
处理3d后检查结果，用直尺测量菌落直径，计算各处理的抑制率，并求毒力回归方程和EC50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
杀菌剂毒力测定－圆叶片法
一、实验目的
学习利用圆叶片法测定杀菌剂对黄瓜霜霉病菌生物活性的基本要求和方法。
二、实验用品和仪器设备
光照生化培养箱、电子天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、培养皿、玻棒、镊子等。
实验药剂：
霜霉威，烯酰吗啉等
试验菌种：
黄瓜霜霉病菌（pseudoperonosporacubensis）。
实验材料：
黄瓜叶片
三、实验方法
1.黄瓜霜霉病菌孢子悬浮液的制备
室内用无菌水洗涤黄瓜霜霉病病叶的孢子，经过离心除去孢子梗等杂质，并稀释成1×105个孢子/mL孢子悬浮液，保存于4℃冰箱中备用。
2.药剂配制
在预试试验的基础上，将试验药剂用0.1%吐温80水溶液稀释成5-7个系列浓度。
3.圆叶片处理
用2.0cm打孔器在无病黄瓜叶上打取圆叶片，在药液中浸渍5min后取出晾干，放在培养皿内，皿内用滤纸保湿，每片圆叶片叶背面向上，中心滴加10ul孢子悬浮液，置于19℃生化培养箱内培养，光照黑暗12h交替。
每个浓度重复4次，以0.1%吐温80水溶液浸渍圆叶片并滴加孢子悬浮液的处理为对照。
四、结果检查和处理
7d后检查病斑长、短轴，计算防效，并用DPS数据处理软件对结果进行处理，求毒力回归方程和EC50和EC90。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
杀菌剂毒力测定－盆栽法
一、实验目的
学习利用盆栽法测定井冈霉素对小麦纹枯病的毒力。
二、实验用品和仪器设备
光照生化培养箱、电子天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、花盆（大号塑料杯）、玻棒、土壤等。
实验药剂：
井冈霉素，100，50，25，12.5mg/L；CK
试验菌种：
小麦纹枯病菌，PDA平板培养的菌丝。
实验材料：
小麦种子
三、实验方法
1.配制井冈霉素各浓度的水溶液，并将提前选择好的小麦种子在药液中浸泡1h，取出晾干。
2.将过筛的风干土壤装入花盆内4/5，并浇水湿透，加入PDA平板培养的小麦纹枯病菌，每皿菌种平均加入到12个花盆内土壤的表面。
3.播种，5粒/盆，覆盖1.5cm厚度的风干土壤。
4.光照生化培养箱内20℃培养21d，光照：
黑暗=10h：
14h，定期浇水，保持湿度。
四、结果检查和处理
处理21d后检查小麦幼苗发病情况，并按照要求将发病情况分级，计算病情指数和防效，并求毒力回归方程和EC50和EC90。
小麦幼苗病级分级标准：
0级，不显症状；1级病斑占叶鞘宽1/2以下；2级病斑占叶鞘宽1/2-3/4；3级病斑占叶鞘宽3/4以上至全叶鞘。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
除草剂室内毒力测定－小杯法
XX文库-让每个人平等地提升自我一、实验目的
学习小杯法测定除草剂室内毒力的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备
光照培养箱、小烧杯（50mL）、量筒、移液管、计算器、直尺、烧杯、记号笔、容量瓶（100mL）、保鲜膜、大头针、镊子、玻璃棒、砂子等。
实验药剂：
50%乙草胺乳油，
实验材料：
露白的稗草种子
三、实验方法
1.稗草种子催芽
28℃，24h催芽。
2.药剂配制与稀释
用水稀释系列浓度500、250、125、62.5、31.25mg/L，以水为对照。
3.播种
取不同浓度的药液10mL分别加入到50mL小烧杯中，加入适量砂子至刚好吸附药液，以清水为对照。
选取大小均匀、出芽一致的稗草种子播入砂子中。
播种前先用玻璃棒在砂子里打孔，然后再播种，防止损伤稗草种子的幼根。
5棵/杯。
4.培养
保鲜膜封闭小烧杯口，用大头针扎5个孔，28℃光照培养箱（光:
暗=14:
10）培养14d。
四、结果检查和处理
处理14d后检查结果，用直尺测量根长和芽长，计算各处理的抑制率，分别求毒力回归方程和EC50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
除草剂室内毒力测定－小麦根长法
一、实验目的
学习小麦根长法测定除草剂室内毒力的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备
生化培养箱、培养皿、量筒（50mL）、移液管、计算器、直尺、烧杯、记号笔、容量瓶（100mL）、培养皿、玻璃棒、镊子、砂子、60目、80目标准筛等。
实验药剂：
50%乙草胺乳油，
实验材料：
露白的小麦种子
三、实验方法
1.小麦种子催芽
25℃，24h催芽。
2.药剂配制与稀释
用水稀释系列浓度200、100、50、25、12.5mg/L，以水为对照。
3.发芽床的制备
直径9cm的培养皿装满过筛的砂子并用玻棒刮平，每一皿加入30mL药液均匀湿透砂子。
4.播种
用玻棒在培养皿直径处轻轻压出一道凹槽，选取根长为1-2mm均匀一致的小麦种子播种，10粒/皿，用橡皮筋固定皿盖。
5.培养
25℃，培养4d。
四、结果检查和处理
处理4d后检查结果，用直尺测量根长，计算各处理的抑制率，求毒力回归方程和EC50值。
五、实验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
除草剂田间药效试验-玉米田除草剂
一、试验目的
学习防除夏玉米田杂草田间药效试验，以明确除草剂对夏玉米田一年生禾本科和阔叶杂草的除草效果及对夏玉米的安全性，
二、试验用品和仪器设备
喷雾器、电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、软尺等。
试验药剂：
乙草胺等
试验地杂草：
马唐（Digitariasanguinal）、牛筋草（Eleusineindica）、反枝苋（Amaranthusretroflexus）、马齿苋（PortulacaoleraceaL）
试验作物：
夏玉米，品种为郑单958或农大108.
三、试验方法
1.试验地选择
明确试验地的土质和栽培情况。
2.试验设计和安排
2.1供试药剂试验设计
表1供试药剂试验设计
处理号
药剂
施药制剂量（克/亩）
有效成分量（克/公顷）
1
999克/升乙草胺乳油
50
749.25
2
999克/升乙草胺乳油
70
1048.95
3
999克/升乙草胺乳油
90
1348.65
4
999克/升乙草胺乳油
140
2097.9
5
50%乙草胺乳油
120
900
6
人工除草
-
-
7
空白对照
-
-
2.2小区安排
小区南北纵向顺行分布，随机区组排列，见下表。
5
2
6
3
1
7
4
3
1
7
2
4
6
5
6
4
3
5
7
2
1
2
5
7
1
3
4
6
2.2.2小区面积和重复
小区面积：
30平方米，长方形设计。
重复次数：
4次。
3.施药方法
3.1使用方法
玉米播种后第二天进行土壤喷雾处理。
3.2施药器械
使用MATABI-16型背负式喷雾器，扇型喷头。
3.3施药时间和次数
3.4使用量
药剂施用量见表1，喷液量为40L／亩。
3.5防治病虫和非靶标杂草药剂资料
喷药时尚未使用任何药剂，分别在施药当天和第一、二次检查结果时进行人工除草，铲除人工除草区杂草，空白对照区不除草，以便测定由乙草胺本身造成的产量变化。
四调查、记录和测量方法
1.气象及田间管理资料
2.杂草调查
2.1调查时间和次数
分别在施药后5、10、15、20、40天调查。
20、40天采用绝对值调查法。
2.2调查方法
采用绝对数调查法。
每一试验小区固定调查3个点，每点0.33m2，分别在用药后20天、40天调查各点各种杂草的健株数，药后40天在调查杂草株数的同时调查鲜重防效。
2.3药效计算方法
GB/T17980.42-2000。
3.作物调查
3.1调查时间和次数
分别在施药后5、10、15天及2次检查结果时。
3.2调查方法
没有观察到药害症状。
4.对其他生物影响
观察表明该药剂对非靶标生物没有影响。
5.作物产量和质量
五、结果与分析
六、试验报告
撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。
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