靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理.docx
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靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理
项目类别
投送学科代码
科学部编码
A
C030304
国家自然科学基金
申请书
项目名称:
靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理
申请者：
马丁
所在单位：
华中科技大学同济医学院
邮政编码：
430030
通讯地址：
湖北省武汉市航空路13号
电话：
传真：
电子信箱：
申请日期:
2002年3月
国家自然科学基金委员会
一九九七年制
填报说明
一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及规定。
申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。
表达要明确、严谨，字迹要清晰易辨。
外来语要同时用原文和中文表达。
第一次出现的缩写词，须注出全称。
二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。
第三页起各栏空格不够时，请自行加页。
一式六份（至少一份为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对口科学部。
地区科学基金项目，申请书另报送省（自治区）科委一份原件。
三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报学科代码1由申请者填写。
四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组成员参加研究：
—在读（含在职）研究生
—已离退休的科研人员
—申请单位的兼职科研人员
五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含重点项目、重大项目），不得超过两项。
六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。
七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。
科学部将对此信息保密。
八、国家自然科学基金委员会通讯地址：
北京市海淀区花园北路35号东门
邮政编码：
100083
一、简表
名称
逆
向
求
源
探
索
宫
颈
癌
发
病
分
子
学
机
理
英语
Theetiologyandmolecularbiologicalcounterevidenceofcervicalcancerwomen
研
类别
A.自由申请
B.高技术探索
C.青年
D.地区
高技术探索
究
E.重大
F.重点
H.专项
A
项目主题号
项
报审
名称1
妇科学
名称2
A..基础研究
目
学科
代码1
C030304
代码2
B.应用基础
A
申请金额
2
5
．
0
0
万元
起止年月
2003年1月至2005年12月
所用实验室
A.国家重点；B.部门开放
B
实验室编号
姓名
马丁
性
A.男
出生年月
民
名称
汉
申
拼音
MaDing
别
B.女
A
身份证号
族
代码
01
专业技术
名称
教授
学
A.博士B.硕士
博士学位
授予国别
国（地区）名
中国
A.院士
B.博士生导师
请
职务
代码
011
位
C.学士
A
或地区
代码
156
C.博士后
B
名称
华中科技大学
系（所）
同济医院
代码
43007402
者
所在
性质
A.高等院校
B.科研单位
邮政编码
430030
隶属
名称
教育部
单
C..其它
A
申请者电话
（027）83662475
关系
代码
360
位
所在地
湖北省（自治区、直辖市）武汉市（县）石乔口区航空街（路）13号
总人数
高级
中级
初级
博士后
博士生
硕士生
参加单位数
11
4
4
3
1
主
姓名
身份证号
专业技术职务
工作单位及代码
项目中
的分工
签章
1
本
项
目
采
用
全
新
科
研
设
计
及
研
究
手
段
，
运
用
双
向
分
子
分
析
验
证
系
统
在
D
N
A
、
R
N
A
和
蛋
白
研
摘
三
个
层
次
全
面
探
索
宫
颈
癌
发
病
机
制
。
研
究
要
点
究
包
括
H
P
V
相
关
致
癌
基
因
的
筛
查
和
确
定
、
病
毒
内
蛋
白
表
达
方
式
、
信
号
传
导
调
节
、
致
病
过
程
、
易
容
要
感
度
量
标
准
。
特
别
是
反
向
逆
源
手
段
不
但
能
精
巧
和
辨
别
致
病
蛋
白
，
更
能
准
确
追
逆
确
定
致
病
基
因
，
意
由
此
建
立
针
对
阻
断
病
毒
感
染
致
癌
的
“
治
疗
窗
”
义
主题词
1.主题词不多于三个；2.主题词之间空一格
（英文用/分隔）
中文
宫
颈
癌
人
类
乳
头
状
病
毒
分
子
机
理
英文
Cervicalcancer/HPV/biologicalmechanism
简表填写要求
一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字，简表中所有代码以最新发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。
高技术探索课题主题号按《高技术新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写，申请重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。
二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。
三、部分栏目填写要求：
项目名称应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）。
基础研究指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。
应用基础研究指有广泛应用前景，但以获得新知识、新原理、新方法为主要目的的研究。
申报学科申请项目所属的最基础学科。
如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。
申请金额以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。
起止年月起始时间从申请的次年1月算起。
完成时间为完成年度的12月。
所用实验室系指研究项目将利用的实验室仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的开放实室。
所在单位名称及代码按单位公章填写全称。
例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中科院西安光机所”或“西安光机所”。
全称中的数字，一律写中文，例如：
航空航天工业部第七○一研究所。
首次申请国家自然科学基金的单位，尚未编入单位代码，其代码暂不填写。
参加单位数指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位（含作者所在单位），以阿拉伯数字表示。
项目组主要成员指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人员，本人应在申请书上签名。
本栏双线右侧内容不输入计算机。
研究内容和意义摘要及主题词均录入软盘。
2
二、立论依据
（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献及出处）
3-1
接第3页（项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献—附页）
3-2
差异表达达和功能演变着手，采用全新技术路线，精巧准确对致病蛋白进行分辨定格，并以此为切入点追逆解译DNA的变异，为病毒感染、病毒蛋白致癌提供确实可靠的依据，也可为探索其它疾病与致病因素相互关系建立一个新的技术突破口。
在以上研究的基础上，提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈癌侵扰的策略及有效方法。
参考文献
1.ChanPK,etal.Determinantsofcervicalhumanpapillomavirusinfection:
differencesbetweenhigh-andlow-oncogenicrisktypes.JInfectDis20021;185
（1）:
28-35
2.SchoellW,etal.Epidemiologyandbiologyofcervicalcancer.SeminSurgOncol.1999;16:
203-211
3.马丁，奚玲.宫颈癌的流行病学及病因学研究进展.中国实用妇产科杂志.2001;23:
1-5
4.许雪梅,司静懿等.中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6E7基因的分离、克隆和序列分析.中国医学科学院学报.1999;21:
185-191
5.CombitaAL,etal.Serologicresponsetohumanoncogenicpapillomavirustypes16,18,31,33,39,58and59virus-likeparticlesincolombianwomenwithinvasivecervicalcancer.IntJCancer200220;97（6）:
796-803
6.HagenseeME,etal.InfectionwithHumanPapillomavirus:
UpdateonEpidemiology,Diagnosis,andTreatment.CurrInfectDisRep2000;2
（1）:
18-24
7.ReinsteinE,etal.DegradationoftheE7humanpapillomavirusoncoproteinbytheubiquitin-proteasomesystem:
targetingviaubiquitinationoftheN-terminalresidueOncogene2000;19:
5944-50
3-3
8.DaemenT,et,al.Immunizationstrategyagainstcervicalcancerinvolvinganalphavirusvectorexpressinghighlevelsofastablefusionproteinofhumanpapillomavirus16E6andE7.GeneTher2002;9
（2）:
85-94
9.NataleC,Computer-assistedanalysisofmolecularmimicrybetweenhumanpapillomavirus16E7oncoproteinandhumanproteinsequences.ImmunolCellBiol2000;78:
580-5
10.VillaLL,etal.Molecularvariantsofhumanpapillomavirustypes16and18preferentiallyassociatedwithcervicalneoplasia.JGenVirol2000;81Pt12:
2959-68
11.vonKnebelDoeberitzM.Newmoleculartoolsforefficientscreeningofcervicalcancer.DisMarkers2001;17（3）:
123-8
12.BoyleP,etal.Updateoncancercontrolinwomen.IntJGynaecolObstet2000;70
（2）:
263-303
13.DaemenT,et,al.Immunizationstrategyagainstcervicalcancerinvolvinganalphavirusvectorexpressinghighlevelsofastablefusionproteinofhumanpapillomavirus16E6andE7.GeneTher2002;9
（2）:
85-94
3-4
三、研究方案
4-1
拟解决的关键问题：
1.研究HPV感染诱发宫颈癌的分子学基础，精确分析病毒致癌蛋白功能结构，运用双向验证法特别是逆向求源手段准确筛查病毒癌基因DNA片段。
2.探索HPV在宿主细胞的整合方式，细胞内信息或效应因子作用的病理性累积强化效应。
3.明确病毒DNA不同开放编码的过度表达或缺失对影响病毒复制、激活宿主细胞癌基因、维持恶性表型的关键所在。
4.探讨HPV病毒蛋白在肿瘤恶变进程中与p53、Rb相互结合过程及对细胞生长负调节功能的影响。
5.阐明端粒酶激活及调控与高危型HPV感染的相互关系，p53和Rb对端粒酶活性的调节作用机制。
6.以全新微电子蛋白分析手段确定致癌基本元素以及致癌的根本规律，明确病毒诱促发癌变的触发点，进一步找寻超早期阻断HPV诱发宫颈癌的“时间窗”。
4-2
5-1
5-2
研究方法，技术路线，实验方案流程图
5-3
可行性分析:
1）本项目采用多学科、多项新技术的综合性研究，可保证各项指标的全面完成。
2）申请单位在中国最早建立妇科肿瘤专科研究室，并承当“八五”、“九五”中国妇女生殖系统病毒感染流行学攻关课题。
申请者长期从事妇科肿瘤研究，有深厚肿瘤基础研究的功底。
3）已建立本项目涉及的实验模型，以及实施本项目关键性的技术条件和实验方法，如Pepnet检测系统、流式细胞分析系统、共聚焦组织细胞分析系统和DNA、RNA及蛋白分析手段。
4）项目组高、中、初级科研人员结构合理，课题组成员技术实力雄厚，多人曾承担并完成国家各级别科研课题，有较强的科研履约能力和良好的履约记录。
5）申请单位已具备完成课题所需的绝大部分仪器设备，如DNA合成仪、PCR仪、流式细胞议、共聚焦分析仪。
今年已策划投资500万建立生物芯片检测研究中心。
6）申请单位已在去年为本项目先期课题“宫颈癌早期智能筛查系统”提供18万配套启动基金，并承诺为本项目提供配套基金。
7）已同美国西南医学中心Anderson癌症中心及德国Essen大学建立合作关系，部分实验将在美国西南医学中心实验室进行。
3．本项目的创新之处
1）本课题以探讨研究HPV感染与宫颈癌发生的分子机理为切入点，旨在揭示肿瘤发生、发展的基本规律，找寻可能的阻断措施，抢占国际肿瘤分子生物学制高点。
2）申请者在广泛调研和自身实践的基础上，在国际上率先提出双向分子验证分析系统和新技术工艺路线，对HPV致癌基因和相应蛋白的结构功能进行正向和逆向全方位分析。
特别是后者聚焦在致癌的基本功能蛋白的解析，以此逆源解译DNA核苷密码，更具创意。
3）对差异表达的功能蛋白所采用的分析手段，如多级分解鉴定、系列酶解分带精确定性、共价离子蛋白芯片杂交、芯片原位蛋白分解等多是首次设计或是最新技术的革新，目的是能够对目标蛋白分辨精细、定位准确、简化省时。
4）该分析系统除探索HPV感染与宫颈癌因果关联外，更普遍适用于从现象到本质、结构至功能基本规律的探索，如生命功能的基本分子结构、药物的有效结构等等，有实质的创新意义。
5-4
4.年度研究计划及预期进度
本项目预期用三年时间完成,自2003.1-2005.12
2003.1-2003.12完成方法步骤技术路线中第1）部分中
（1）、
（2）；第2）部分中
（1）、
（2）；第3）部分中
（1）主要关键内容。
2004.1–2004.12完成方法步骤技术路线中第1）部分中（3）；第2）部分中（3）；第3）部分中
（2）、（3）；第5）部分中
（1）、
（2）、（3）主要关键内容。
2005.1–2005.12完成方法步骤技术路线中第2）部分中（4）、（5）；第3）部分中（4）、（5）、（6）；第4）部分中
（1）、
（2）、（3）、（4）主要关键内容。
完成补充方法步骤技术路线中的其余部分，总结实验结果，撰写论文，课题结题并组织鉴定。
5.预期研究成果
成果以论文形式发表并组织鉴定
1）初步明确HPV感染与宫颈癌发生的内在关系和分子生物学基础,阐明肿瘤发生学中作为重要外源促发因素的病毒致癌机理。
2）确定病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标准。
3）提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈癌侵扰的策略及有效方法
4）研究成果获奖期望值：
获国家科技进步成果二等奖一项；并争取国际科技奖项。
5）发表科技论文数量和级别：
国外期刊发表论文4篇以上，国内期刊发表论文8篇以上。
6
四、研究基础
7-1
7-2
8-1
8-2
施维,女,27岁，1993年毕业于同济医科大学医疗系，1996年获妇科肿瘤硕士学位，并获”特别优秀毕业研究生”称号，之后在同济医院妇产科工作。
已在国家级刊物发表论文5篇，参加香港国际计算机和妇产科学会议并作大会发言，多次在全国一类会议上进行论文交流.研究成果卵巢癌细胞内ATP、ATP酶及Ca2＋水平与化疗敏感相关性研究经卫生部鉴定为国际先进水平。
顾美皎，女，65岁，教授,1955年毕业于武汉医学院。
为实用妇科与产科杂志编委，妇科与产科杂志副总编，妇产科进展，中国肿瘤与康复的编委，为妇产科学（第三版）编委。
1986年5月赴美国访问学习，现任中华妇产科学会武汉分会主任委员，主要从事妇科恶性肿瘤的早期诊断及提高疗效的研究，承担国家自然科学基金课题，1、卵巢癌细胞内ATP及钙离子水平与耐药相关性研究（C03031906）。
2、化学发光酶免疫测定性激素依赖性肿瘤雌孕激素受体的对照研究（38970730）。
获国家卫生部科学进步三等奖（97301101）。
科研鉴定：
1、提高卵巢恶性肿瘤疗效的研究，获省卫生厅二等奖。
2、宫颈癌及癌前病变与性传播疾病相关性研究获卫生厅三等奖。
先后在国内外核心杂志上发表论文四十余篇。
8-3
8-4
12.马丁，奚玲.宫颈癌的流行病学及病因学研究进展.中国实用妇产科杂志.2001;23:
1-5
13.马丁，曾益新等。
肿瘤转移，肿瘤学。
1999人民卫生出版社
14.MaD（马丁）,WuP,EganRW,BillahMM,Wang.Phosphodiesterase4Bgenetranscriptionisactivatedbylipopolysaccharideandinhibitedbyinterleukin-10inhumanmonocytes.MolPharmacol199955:
50
15.MaD（马丁）,HuW,JacksonJK.FrequentoverexpressionofCDC25Ainthecelllinederivedfromovariancancers.1999AnnualAACRMeetingPresentation（1999美国国家癌症年会宣讲）
16.马丁，王世宣.妇科恶性肿瘤基因治疗的策略与方向.国外医学妇产科学分册，1999，26（5）：
295.
17.LiXun（李旬）,PatelR,MelamedMR,etal:
Thecellcycleeffectandinductionofapoptosisby5-bromouridineinculturesofhumanleukaemicMott-4andHL-60celllineandmitogenstimulatednormallymphocytes.Cellproliferation.1994;27:
307-319．
18.LiXun（李王旬）,TraganosF,etal:
SimultaniousanalysisofDNAreplicationandapoptosisduringtreatmentofHL-60cellswithcamptothecinandhyperthermiaandmitogenstimulationofhumanlymphocytes.Cancerresearch1994;54:
4289-4293.
19.LiXun（李王旬）,PatelR,MelamedMR,etal:
Thecellcycleeffectandinductionofapoptosisby5-bromouridineinculturesofhumanleukaemicMott-4andHL-60celllineandmitogenstimulatednormallymphocytes.Cellproliferation.1994;27:
307-319．
20.LiXun（李王旬）,TraganosF,MelamedMR,etal.detectionof5-bromo-2-deoxyuridineincorporatedintoDNAbylabelingstrandbreakinducedbyphotolysis（SBIP）.InternationalJournalofOncology
21.MurakamiT,LiXun（李王旬）,etal.Inductionofapoptosisby5-Azacytidine:
Drugconcentration-dependentdifferencesincellcyclespecificity.Can
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