具体PH缓冲液配制数据.docx

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具体PH缓冲液配制数据

标准缓冲溶液（均用pH标准缓冲物质配制）

1.1  苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液：

c（KHC8H4O4）=0.05mol/L（25℃时，pHs=4.003）。

  苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质，有小塑料袋和瓶装两种，配制方法如下：

  a）袋装配制法：

  在250mL（或500mL）量瓶中（根据袋中标准缓冲物质量，选择量瓶大小），按袋上的说明配制成所需的浓度。

保存于聚乙烯瓶中。

  b）瓶装配制法：

  称取5.10g苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4预先在115℃±5℃，烘2～3h，于干燥器中冷却），溶于水并稀释至500mL，混匀。

保存于聚乙烯瓶中。

1.2  0.025mol/L磷酸二氢钾（KH2PO4）和0.025mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）混合标准缓冲溶液（25℃时，pHs=6.864）：

  磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质，有小塑料袋装（混合磷酸盐）和瓶装（两种pH标准缓冲物质分别包装）两种。

配制方法如下：

  a）袋装配制法：

  在量瓶（根据袋上说明确定量瓶大小）中按袋上说明配制成所需浓度后，保存于聚乙烯瓶中。

  b）瓶装配制法：

  迅速称取3.40g磷酸二氢钾（KH2PO4）和3.55g磷酸氢二钠（Na2HPO4）（均预先在115±5℃烘2～3h，于干燥器中冷却）溶于蒸馏水，转入1000mL量瓶中，加水至标线，混匀。

1.3  0.008695mol/L磷酸二氢钾（KH2PO4）和0.03043mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）标准混合缓冲溶液（25℃时，pH=7.413）：

  磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装，配制方法如下：

  迅速称取1.18g磷酸二氢钾和4.31g磷酸氢二钠（均预先在115℃±5℃烘2～3h，于干燥器中冷却），溶于水，全量移入1000mL量瓶中，加水至标线，混匀。

保存于聚乙烯瓶中。

1.4  硼砂标准缓中溶液：

c（Na2B4O7·10H2O）=0.010mol/L（25℃时，pHs=9.182）。

  硼砂的pH标准缓冲物质也有塑料袋装和瓶装两种，配制方法如下：

  a）袋装配制法：

  在500mL量瓶中，按袋上说明配制成所需浓度后，分装于5个100mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封。

  b）瓶装配制法：

  称取1.91g硼砂（预先在盛有蔗糖饱和溶液的干燥器中平衡两昼夜），溶于刚煮沸冷却的蒸馏水，全量转入500mL量瓶中，加水至标线，混匀。

分装于5个100mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封，有效期为三个月，经常使用的缓冲溶液，每周更换一次。

  各种标准缓冲溶液的pH值随温度的变化而变化。

0～45℃的pH值列于表21中。

27.1.3.2  饱和氯化钾溶液：

  称取40g氯化钾（KCl），加100mL水，充分搅拌后盛于试剂瓶中（此溶液应与氯化钾固体共存）。

表21  0～45℃标准缓冲物质的pH值

温度，℃    苯二甲酸氢钾（27.1.3.1.1）    混合磷酸盐（27.1.3.1.2）    磷酸盐（27.1.3.1.3）    硼砂（27.1.3.1.4）

0    4.006    6.981    7.534    9.458

5    3.999    6.949    7.500    9.391

10    3.996    6.921    7.472    9.330

20    3.998    6.879    7.429    9.226

25    4.003    6.864    7.413    9.182

30    4.010    6.852    7.400    9.142

35    4.019    6.844    7.389    9.105

40    4.029    6.838    7.380    9.072

45    4.042    6.834    7.373    9.042

简便配方:

PH4.01用10.21克在105度烘过的苯二甲酸氢钾，用水稀释定容1L，即为0.05mol/l。

PH6.87，3.39克在50度烘过的磷酸二氢钾和3.53克无水磷酸氢二钾，溶于水定容1L。

即为0.025mol/l磷酸二氢钾及0.025mol/l磷酸氢二钠溶液。

PH9.18用3.80克硼砂溶于无二氧化碳的冷水中定容1L。

pH计缓冲溶液是一种能使pH值保持稳定的溶液。

若向这种溶液中加入少量的酸或碱，或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱，以及将溶液适当稀释，这个溶液的pH值基本上稳定不变，这种能对抗少量酸或碱或稀释，而使pH值不易发生变化的溶液就称为pH缓冲溶液。

　　pH标准缓冲溶液特点：

　　标准溶液的pH值是已知的，并达到规定的准确度。

标准溶液的pH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。

溶液的制备方法容易。

　　1.PH4.00325度邻苯二甲酸氢钾可配制250ML溶液

　　2.PH6.86425度混合磷酸盐可配制250ML溶液

　　3.PH9.18225度硼酸可配制250ML溶液

　　1）缓冲溶液作用原理和pH值

　当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。

弱酸及其盐的混合溶液（如HAc与NaAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液。

由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用，是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。

当向这种溶液中加入一定量的强酸时，H离子基本上被A-离子消耗：

所以溶液的pH值几乎不变；当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。

　　2）缓冲溶液的缓冲能力

　在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。

这说明它的缓冲能力是有一定限度的。

缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。

0.1mol·L-1HAc和0.1mol·L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。

关于这一点通过计算便可证实。

但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。

组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH最小，缓冲能力大。

不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。

缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。

对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。

弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1；弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1；例如HAc的pKaφ为4.76，所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76～5.76的缓冲溶液，在这个范围内有较大的缓冲作用。

配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大，此时（c（HAc）/c（NaAc）=1。

　　3）缓冲溶液的配制和应用

　为了配制一定pH的缓冲溶液，首先选定一个弱酸，它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值，然后计算酸与碱的浓度比，根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。

　以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。

对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。

　缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛，如鉴定Mg2离子时，可用下面的反应：

　白色磷酸铵镁沉淀溶于酸，故反应需在碱性溶液中进行，但碱性太强，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反应的pH值需控制在一定范围内，因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液，保持溶液的pH值条件下，进行上述反应。

（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量  试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。

工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：

称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。

2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：

称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：

毫升）

pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 

5.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.4 

5.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.0 

6.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.2 

6.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.2 

6.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.9 

6.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.0 

6.4 26.7 73.3 7.7 89.4 10.6 

6.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.5 

6.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.8 

6.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.3 

6.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.2 

6.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.0 

7.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0 

（三）0.15Mol/L PB液

附表2  0.15Mol/LPB液配制法

pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml） 

6.4 26.5 73.5 

6.6 37.5 62.5 

6.8 49.0 51.0 

7.0 61.0 39.0 

7.2 72.0 28.0 

7.4 81.0 19.0 

7.6 87.0 13.0 

Na2HPO4·2H2O分子量=175.05   0.15Mol/L溶液含26.7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358.22  0.15Mol/L溶液含53.7g/L。

NaH2PO4·H2O分子量=138.00    0.15Mol/L溶液含20.7g/L。

NaH2PO4·2H2O分子量=156.03   0.15Mol/L溶液含23.4g/L。

（四）0.2Mol/L PB缓冲液

附表3  0.2mol/L PB缓冲液配制法

pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml） 

5.8 8.0 92.0 

6.0 12.3 87.7 

6.2 18.5 81.5 

6.4 26.5 73.5 

6.6 37.5 62.5 

6.8 49.0 51.0 

7.0 61.0 39.0 

7.2 72.0 28.0 

7.4 81.0 19.0 

7.6 87.0 13.0 

7.8 91.5 8.5 

8.0 94.7 5.3 

0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L

            Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L

    0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L

           NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L

欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/L PH 7.2）

  NaCl                          8.0g

  KCl                           0.2g

  Na2HPO4                      1.15g

 （如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

  KH2PO4                        0.2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）  文章来自：

 医药园  （）   整理：

zfg

1．硼酸（Ｈ3BO3）

0.2Mol/L硼酸：

硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）

0.05Mol/L硼砂：

硼砂19.07g加水至1 000ml。

附表4  不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法

pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml） pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml） 

7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5 

7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5 

7.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.0 

8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0 

（七）巴比妥缓冲液

1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液

   巴比妥钠                 47.6g

   蒸馏水                   3 000ml

   1.17N  HCl               55.0ml

  （1.17 N  HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）

⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1.17 N  HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。

    2．pH8.4  0.06Mol/L巴比妥缓冲液

        巴比妥                   1.84g

        巴比妥钠                 10.30g

        加蒸馏水至               1 000.00ml

    3．pH8.6  0.06Mol/L巴比妥缓冲液

        巴比妥                   1.66g

        巴比妥钠                 12.76g

        加蒸馏水                 1 000.00ml

（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液  见表附表5

附表5  0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法

pH 0.2Mol/L

Tris（ml） 0.1Mol/L

HCl（ml） pH 0.2Mol/L

Tris（ml） 0.1Mol/L

HCl（ml） 

23℃ 37℃ 23℃ 37℃ 

9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.5 

8.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0 

8.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.5 

8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0 

8.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.5 

8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0 

8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5 

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH，0.05Mol/L

25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）

附表6  Tris—HCl缓冲液配制法

    pH 0.2Mol/L

Tris（ml） 0.1NHCl

（ml）     pH 0.2Mol/L

Tris（ml） 0.1NHCl

（ml） 

23℃ 37℃ 23℃ 37℃ 

9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.5 

8.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0 

8.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.5 

8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0 

8.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.5 

8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0 

8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5 

8.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.0 

8.14 8.00 25 25.0     25   

三羟甲基氨基甲烷（Tris）

 分子量=121.14

 0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：

Tris24.23g，加水至1 000ml。

 0.1NHCl：

取HCl8.6ml，加水至1 000ml。

（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液

 NaHCO3                 3.70g

 Na2CO3                  0.60g

溶于600.00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。

最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液

1．配制pH8.0磷酸缓冲液

   0.1Mol/L Na2HPO4       94.50ml

   0.1N NaH2PO4           5.50ml

   混合即可

2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

 用途：

用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液

1．贮存液

   NaCl                   80.00g

   KCl                    4.00g

   Na2HPO4·12 H2O        1.52g

   KH2PO4                 0.60g

   葡萄糖                  4.00g

   0.4％酚红液             50.00ml

   双馏水加至             100.00ml

 115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液

   贮存液                 1份

   双馏水                 9份

 115℃高压灭菌15min。

临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）

配方1：

氯化汞             6.0g

       碘化钾              12.4g

       20％NaOH           30ml

       加蒸馏水至          100ml

配方2：

碘化汞              11.5g

       碘化钾               8g

       蒸馏水               50ml

    （完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

  用途：

检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液

       葡萄糖               2.05g

       柠檬酸钠             0.80g

       氯化钠              0.42g

       蒸馏水              100ml

  溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）

       青霉素（40万U）    5支

       链霉素（200万μg）  1支

  分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

  临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）

配方1：

重铬酸钾            150g

        蒸馏水             300ml

        浓硫酸             3 000ml

将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。

此为强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。

如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：

浓硫酸              50%

        蒸馏水              50%

        重铬酸钾            5%

此为中等强度洗液。

配方3：

重铬酸钾             100g

        蒸馏水              1 000ml

        加热溶解，冷却后缓慢加入

      工业硫酸             100ml

此液为弱洗液，为棕红色。

使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效

　　缓冲溶液（英文：

buffersolution）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低p