检验中级考试小结DOC.docx
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检验中级考试小结DOC
临床检验基础
1、血液检验
真空采血管灰色--氟化钠、草酸钾抗凝---测定血糖
金黄色-分离胶
血涂片制备技术：
血滴越大、角度越大、推片速度越快则血膜越厚。
进行红细胞渗透脆性试验时使用的抗凝剂为肝素
凝血项目使用109mmol/l枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:
9。
血沉用枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:
4。
1.血细胞手工检验
（1）血细胞形态
嗜多色红细胞属于未完全成熟的红细胞，由于胞质中含有RNA而被染成灰色、蓝色，嗜多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃，常见于溶血性贫血。
H-J小体位于成熟或幼红细胞胞质中，是保内残留的RNA，常见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血及脾切除术后。
点彩红细胞见于铅中毒、溶血性贫血患者等。
卡波环出现原因是核膜残余物或胞质脂蛋白变性。
Russell小体是浆细胞胞质内的一种数目不等、大小不一、染成肉红色的球形小体，是浆细胞内质网分泌免疫球蛋白受阻或黏蛋白变性所致，常见于多发性骨髓瘤、伤寒、疟疾。
粒细胞自晚幼粒开始失去分裂能力，逐渐发育成熟。
涂片法白细胞分类时，涂片尾部幼稚细胞多
中性粒细胞增多并核左移称再生性左移，常见于各种病原体的感染，特别是急性化脓性细菌感染。
核左移伴中性粒细胞减少或者正常称为退行性核左移，多见于机体抵抗力低下的严重感染，常见于伤寒感染。
杆状粒细胞》5%称轻度左移
》10%中度
》25%并出现幼稚粒细胞时成为重度核左移
（2）血细胞计数
血细胞计数板手工计数
白细胞四角大方格N/4*10*106*稀释倍数
红细胞、血小板中央大方格中的四角+中央中方格N*5*10*106*稀释倍数
嗜酸性粒细胞、精子10个大方格N*106*稀释倍数
*计数域的误差属于固有误差，无法避免，不属于技术性误差。
Miller窥盘计数Ret大、小方格面积比为9:
1
小方格计数红细胞数，大方格计数网织红细胞数。
少儿在6-9天和4-5岁时，外周血淋巴细胞与中性粒细胞基本相等约为50%。
正常人外周血涂片中，中性杆状粒细胞比例为1-5%。
HCT测定WHO推荐的首选常规方法为微量离心管，经典方法--温氏法。
温氏法血细胞比容测定，EDTA-K2抗凝血加入温氏管中离心后血液分为5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层、帯氧红细胞层。
读数时读取还原红细胞层柱高即为血细胞比容。
典型MCHC增高仅见于球形红细胞增多症，但罕见超过380g/l。
巨幼细胞性贫血直方图波峰右移，峰底增宽，明显的大细胞不均一性。
缺铁性贫血时RDW最早出现变化。
嗜酸性粒细胞稀释液中乙醇、丙酮、乙二醇等作用为嗜酸性粒细胞保护剂，伊红、固绿等为嗜酸性粒细胞着色剂，甘油可以防止乙醇等液体挥发，碳酸钾、草酸铵可破坏其他细胞和增强嗜酸性粒细胞着色。
嗜酸性粒细胞计数结果可应用于观察急性传染病的预后、判断肾上腺皮质功能、观察大手术患者和烧伤患者的预后。
猩红热急性期，可能乙型溶血性链球菌产生酶激活补体，引起嗜酸性粒细胞增多。
血沉减慢见于红细胞数量明显增多以及纤维蛋白原含量下降。
红细胞渗透脆性试验多用于红细胞膜缺陷筛查，对遗传性球形红细胞增多症具有重要诊断价值。
Ham试验对诊断PNH有重要价值。
Coombs试验对免疫性溶血性贫血有重要诊断价值。
血红蛋白电泳对异常血红蛋白病有重要诊断价值。
纤维蛋白原、球蛋白、CM、胆固醇等升高均加快血沉；清蛋白、卵磷脂增加能减缓红细胞沉降率。
正常人血浆比密约为1.025-1.030。
浓缩血小板在20-24度温度下，保存期为7天。
再生障碍性贫血中MPV降低
2.血细胞分析仪
国际血液学标准化委员会公布的血细胞分析仪的性能评价指标：
可比性、准确性、总重复性、精密度、线性范围。
血细胞计数参考方法：
红细胞、白细胞计数参考方法为单通道电阻抗法；血小板为流式细胞仪。
网织红细胞生成指数（RPI）=网织红细胞计数（%）*（患者HCT/正常人HCT）*（1/网织红细胞成熟天数），反映的是网织红细胞生成速度是正常人的多少倍。
使用血细胞分析仪计数网织红细胞时，血小板聚集可引起假性升高。
Hb测定：
1.ICSH推荐参考方法--氰化高铁血红蛋白比色法：
高铁氰化钾将各种血红蛋白转化为高铁血红蛋白（SHb除外，无法转化SHb），而后与CN-结合成HiCN，最大吸收峰540nm，转化液推荐使用文-齐液。
试剂保存不得使用塑料瓶，可冷藏，不可冰冻，因前两者均会造成CN-丢失造成HB转化不完全，测定结果偏低。
缺点：
试剂有毒；SHb无法转化为氰化高铁血红蛋白。
2.SDS-Hb法无公害
血细胞分析仪采用多角度偏振光散射法（MAPSS）测定时：
1、0度前角光散射可粗略测定细胞大小；2、10度狭角光散射可测定细胞内部结构相对特征3、90度垂直光散射测定细胞内部颗粒和核分叶情况；4、90度垂直去偏振散射光区分中粒与嗜酸粒。
激光与细胞化学法即应用激光散射与细胞化学法进行白细胞分类
过氧化物酶活性：
嗜酸性粒细胞》中性粒细胞》单核》淋巴、嗜碱性粒细胞=0
激光散射法血小板计数时，高角度（5 -10）主要检测细胞折射指数；低角度（2-3）主要测量细胞大小。
电阻抗法血小板计数时采用浮动界标技术。
电阻抗、射频及特殊染色法进行血细胞分类时，检测幼稚细胞加入硫化氨基酸，幼稚细胞结合更多硫化氨基酸，因此幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，成熟细胞随后被破坏。
3.血型检验
卫生部要求：
抗A、抗B效价》128，亲和力《15s，凝集素效价《1:
4，必须具有检出A2、A2B的能力。
Rh血型阴性确证应做弱D鉴定，弱D抗原较弱一般不与盐水中抗D试剂反应凝聚，必须采用酶法、抗球蛋白法、凝集胺试验等检测。
低离子凝聚胺技术对kell血型系统中的抗K不敏感。
简易致敏红细胞血小板血清试验是检测血小板血型较为理想的方法。
ABO血型4种表现型、6种基因型
ABO基因位于9号染色体短臂
ABO基因中B编码的糖基转移酶是D-半乳糖转移酶，A编码的是N-乙酰-D-半乳糖转移酶。
血型物质不存在于脑脊液中
RH抗原目前仅发现在红细胞上存在，血小板表面存在血小板特异抗原以及ABO、HLA等相关抗原。
患者红细胞直接抗人球蛋白试验阳性可以导致Rh血型鉴定出现假阳性。
孟买血型基因型为hh，但h基因为无效基因，其红细胞表面无A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗体。
稀有血型血液保存方式一般选用冷冻红细胞。
引起非溶血性发热反应最常见的原因是抗白细胞抗原的抗体，因此可用少白红细胞预防非溶血性发热反应。
为预防TA-GVHD，临床选用辐照红细胞，破坏免疫活性淋巴细胞。
选用洗涤红细胞来预防因输血发生的严重过敏反应。
输注全血补充血小板时12h内的全血视为新鲜血；补充粒细胞时8h内全血视为新鲜血；补充凝血因子时24h内全血视为新鲜血。
用酶处理过的红细胞进行血型鉴定时，MN抗原会被破坏。
2、尿液检验：
1.尿液理化检验
甲醛对尿中细胞、管型有固定作用，用于Addis计数防腐
甲苯可在尿液表面形成一层薄膜，常用于尿糖、尿肌酐、蛋白等化学成分测定防腐；
浓盐酸用于17羟、17酮类固醇激素测定的防腐；
冰乙酸用于24H尿醛固酮测定的防腐。
痰液观察分层情况，可用少量苯酚防腐。
正常人尿液中GLU含量为《5.0mmol/24h
尿液T-H蛋白紫外光谱分析出现最大吸收峰的波长为277nm
尿本周蛋白检测：
筛选方法-热沉淀-溶解法、对甲苯磺酸法
确诊方法SDS-PAGE、免疫电泳、免疫固定电泳
本周蛋白的本质是免疫球蛋白轻链。
肾小管重吸收功能受损多为小分子蛋白尿，肾病综合征多为选择性蛋白尿。
重金属中毒多引起肾间质性肾炎，主要表现为肾小管损伤，重吸收与浓缩功能减退。
Mb蛋白尿的特点Mb能溶于80%饱和硫酸铵溶液
正常人尿胆红素阴性，尿胆原阴性或弱阳性。
苯丙酮酸尿症患者新鲜尿液具有“老鼠屎”样臭味。
尿胆原测定常用Ehrlich法，苯丙酮酸尿症的筛查试验为三氯化铁定性法，酪氨酸尿的过筛试验为亚硝基萘酚定性法。
加热乙酸法测定本周蛋白尿PH要求为4.5-5.5。
2.尿沉渣检验
肾移植后发生排斥反应尿液细胞学检查改变：
核退变，红细胞、白细胞、上皮细胞形成混合细胞团块，淋巴细胞，肾小管细胞，管型和背景坏死物。
其中两项恒定指征为淋巴细胞和肾小管细胞。
人巨细胞病毒感染，尿液中含有巨细胞病毒包涵体的细胞是上皮细胞。
尿管型显微镜检查应在低倍镜下观察20个视野，正常人尿液检查RBC0-3/HP，WBC0-5/HP。
Addis1h尿白细胞计数，正常女性白细胞《14万/小时。
正常人尿渗量为600-1000mOsm/（KgH2O）
3.尿液分析仪检验
干化学法中，高浓度尿蛋白可使尿比重测定偏高；Vc可尿糖测定假阴性；青霉素药物偏酸可使尿蛋白测定假阴性；青霉素类药物可使尿白细胞测定减少或假阴性；Vc可使尿隐血试验假阴性。
干化学法测定尿胆原时，胆色素原、胆红素、吲哚、吩噻嗪类都可产生干扰；大多数尿液试剂带没有测定尿胆原阴性，因此干化学不能用于梗阻性黄疸尿胆原测定。
干化学法测定尿胆红素时，维生素C、亚硝酸盐、氯丙嗪、盐酸苯偶氮吡啶都可产生干扰。
CCCLS规定：
干化学法的确证实验尿蛋白确证实验----磺基水杨酸法；尿葡萄糖确证实验---葡萄糖氧化酶定量法；尿胆红素确证实验---Harrison法；尿白细胞和红细胞-----镜检；尿比重---折射仪法
三、排泄物与分泌物检验
1.粪便检验：
检查钩虫卵用饱和盐水漂浮法，蛲虫卵用透明膜试纸法，蛔虫卵用离心沉淀集卵法，血吸虫卵用毛蚴孵化法；阿米巴滋养体直接镜检
大便镜检到巨噬细胞常见于急性菌痢。
消化道出血》50ml开始出现黑便，粪便隐血阳性消化道出血5ml左右。
消化道寄生虫虫卵中体积最小的是华支睾吸虫卵。
艾滋病相关性腹泻，由寄生虫引起腹泻最常见的是隐孢子虫。
2..阴道分泌物检验：
BV的常见病原体是阴道加德纳菌，患者白带性状多为奶油状，含大量粘液与中性粒细胞。
诊断加德纳菌性阴道炎的指标是：
1.线索细胞；2.分泌物PH》4.5；3.胺试验阳性；4.阴道分泌物稀薄均匀。
阴道正常PH为4.0-4.5
四、体腔液检验
1.脑脊液检验：
脑脊液蛋白质定量比色法优于比浊法，正常人脑脊液中蛋白质含量不到血浆蛋白的1%；Froin综合征是一种梗阻性脑病；潘氏实验灵敏度高，部分正常脑脊液可以呈极弱阳性。
脑脊液蛋白电泳有前清蛋白带，血清蛋白电泳一般无前清蛋白带。
化脓性脑膜炎LDH明显增高，经治疗，LDH无明显减低甚至进一步增高，提示预后不好。
结核性脑膜炎ADA增高明显，多发性硬化症脑脊液中髓鞘碱性蛋白MBP含量上升，MBP可以作为多发性硬化症的辅助诊断指标。
正常人脑脊液无红细胞，白细胞（0-10）*106主要是淋巴与单核细胞。
化脓性脑膜炎，脑脊液明显浑浊，静置后可形成凝块或沉淀；
结核性脑膜炎，脑脊液毛玻璃样轻度浑浊，静置后表面可有网膜形成；
蛛网膜下腔梗阻，脑脊液可呈黄色胶冻样。
脑脊液同时出现胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离，称为Froin-Nonne综合征，是蛛网膜下腔梗阻的特点。
正常人脑脊液压力为80-180mmH2O，健康人腰穿所得脑脊液比密为1.006-1.008，正常人脑脊液PH为7.31-7.34。
2.浆膜腔积液检验：
引起胸腔积液最常见的恶性肿瘤是肺癌，以周围型肺癌常见。
恶性间皮瘤染色质分布于核的一侧，病理性核分裂象多见，多核瘤细胞多见。
小细胞未分化癌特征性表现-癌细胞体积小、胞质少、裸核样，核染色深呈墨水滴样。
心包积液草黄色常见于尿毒症引起的心包积液，黄色多见于黄疸。
胸腔积液中最常见的肺癌细胞类型为腺癌
女性腹水常见类型为浆液性乳头状囊腺癌
3.关节积液检验：
类风湿患者关节积液中可发现胆固醇结晶
RA主要累及小关节、肿大僵硬；关节腔积液白细胞《5000*106葡萄糖不明显降低。
化脓性关节炎时WBC》6000*106葡萄糖明显降低。
正常人关节积液WBC（0-50）*106/L。
4.羊水检验：
粘多糖沉积病产前诊断简易指标是羊水细胞内甲苯胺蓝定性试验和糖醛酸半定量测定，胰腺纤维囊性病产前诊断最佳指标是羊水r-谷氨酰转移酶测定
五、脱落细胞学检验：
绝经期妇女阴道涂片中可见到阴道上皮高度萎缩，细胞出现退化现象，核染色质疏松或消失，称为“早熟角化细胞”。
挖空细胞特指HPV感染出现的核周空穴细胞；瓢形核是产后性外底层细胞的特征；
核内包涵体多见于HSV病毒感染，印戒细胞是胃腺癌的一种细胞。
宫颈癌以鳞状细胞癌为主，脱落细胞中找到挖空细胞应做HPV分型或活检。
宫颈鳞癌以非角质化型常见。
支气管肺泡灌洗液，结节病时以T淋巴细胞为主；特发性肺间质纤维化以中性粒细胞增多为主，伴嗜酸粒增多；卡氏肺孢子虫感染时，以淋巴细胞增多为主；急性呼吸窘迫综合征以中性粒细胞为主。
判断细胞良性或恶性，主要依靠细胞核的改变
判断细胞分化倾向主要依靠细胞质的改变
临床免疫学检验
1、免疫分子及其检测
（1）
抗原抗体
抗原制备：
颗粒性抗原
可溶性抗原：
组织和细胞破碎，抗原粗提，而后是抗
1、抗原抗体反应与制备原提纯（超速离心、选择性沉淀、层析、电泳法）
免疫球蛋白片段与人工抗原制备
抗体制备：
多抗（纯化--SPA与IgG结合亲和层析、鉴定）
单抗制备
基因工程抗体
木瓜蛋白酶可以将IgG裂解成一个Fc和两个Fab片段
胃蛋白酶将IgG裂解成F（ab’）2与小肽片段。
制备单抗隆抗体时常用的细胞融合剂是PEG1000-2000。
基因工程抗体较于杂交瘤单抗隆抗体最重要特点：
非异源性
免疫球蛋白分型依据是CL抗原性不同进行分类
PEG沉淀法或比浊法常用于检测CIC，简单易行，但特异性差；常用PEG最终浓度为3-4%，PEG沉淀试验不能反映小分子循环免疫复合物，2%只能沉淀大分子，》5%选择性沉淀CIC的能力消失。
PEG沉淀法中PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，所用PEG浓度越小，分离血清免疫复合物一般采用PEG6000。
补体参与检测CIC方法包括C1q固相法、抗C3-CIC-ELISA法，由于IgA不能结合补体，所以补体参与检测CIC法不能检测IgA抗体。
离子种类对免疫复合物形成速度的影响：
H2P04->SO42->NO3->CLO4->SCN-
单克隆抗体的特异性取决于克隆细胞的筛选
免疫监视功能---肿瘤发生
免疫自稳功能--自身免疫病
2、抗原抗体反应类型：
凝集与沉淀反应
（1）凝集反应
RF采用散射比浊法检测的主要是IgM
胶乳凝集试验所用载体多为0.8um聚苯乙烯胶乳，
（2）沉淀反应
免疫散射比浊中，颗粒直径远小于入射波长时，则散射光分布比较均匀，称为Ray-leigh散射。
若颗粒直径接近或大于入射波长时，则散射光分布不均匀，称为Mie散射。
介于两者之间，则称为Rayleigh-Mie散射。
速率散射比浊中，加入PEG的目的是加速抗原抗体复合物的形成，缩短反应时间，常用PEG8000。
速率散射比浊免疫分析是抗原抗体结合反应的动态测定。
速率散射比浊法，为避免出现后带现象，常使抗体过量；此外还加入了抗原过量检测系统，反应后再加入适量抗原，若出现第二峰信号，则提示第一峰信号均由待测抗原产生且结果可靠；若未出现第二峰信号提示待测抗原过量。
火箭免疫电泳作为抗原定量只能测定ug/ml
单向扩散试验若应用多克隆抗体测量M蛋白时，测定会偏高？
双向扩散试验试管法先后加入试管的是：
含抗体的琼脂、普通琼脂、含抗原的琼脂。
目前临床检验中不推荐使用对流免疫电泳与火箭免疫电泳，共同原因是电泳载体的电渗作用？
火箭免疫电泳结合放射自显影技术灵敏度可提升1000倍
CIEPcounterimmunnoelectrophoresis
RIErocketimmunoelectrophoresis
IEPimmunoelectrophoresis
IFEimmunofixationelectrophoresis
对流免疫电泳中IgG抗体四个亚型表现不同，IgG1和IgG2由于电渗作用向阴极移动，而IgG3和IgG4向阳极移动。
化学交联法常用炭化二亚胺将胶乳上的羟基与被交联物上的氨基缩合在一起
包被过程中最常用的缓冲液为PH9.6PBS
3、标记免疫技术
（1）荧光免疫技术
FITC激发光490-495nm发射光520-530nm黄绿色荧光
RB200570nm600nm橘红色荧光
TRITC550nm620nm橙红色荧光，适合与FITC配对双标记
PE490nm595nm红色，多与FITC用于流式细胞仪双标
荧光抗体效价常用倍比稀释，非特异性染色最弱的稀释度作为其效价；若采用琼脂双扩散法测定，荧光抗体效价需大于1:
16.
荧光抗体染色技术中直接法较其他方法特异性高、非特异性染色少。
FITC在酸性溶液中荧光强度显著降低
荧光素标记抗体的鉴定：
抗体效价（抗体活性）、荧光素和蛋白质结合比（F/P）。
F/P越高，说明抗体上结合的荧光素越多，反之越少。
一般用于固定标本的抗体F/P=1.5左右，用于活细胞染色F/P=2.4为宜。
荧光偏振免疫测定主要用于测定小分子抗原，是临床药物浓度检测的首选方法；缺点是不适用于大分子物质。
（2）放射免疫技术
RIA为标记抗原竞争法测定抗原；IRMA分为直接和双抗体夹心法均为标记抗体测定抗原。
125I衰变产生r射线，3H衰变产生的是β射线
比放射性是指单位质量标记物的放射强度，常用Bq/ug，Ci/g或Ci/mol表示，一般标记抗原的比放射性越高，试验灵敏度高。
放射化学纯度是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，一般要求》95%
放免技术中滴度常采用一株抗血清做系列稀释后再与标记抗原反应。
（3）酶免疫技术
（4）化学发光免疫分析技术
发光免疫分析根据化学反应不同可以分为三类：
1、直接参与发光反应，如吖啶酯类标记物
2、以发光酶标记，如AP；3、以能量传递参与氧化还原反应的非酶标记物，如三联吡啶钌标记物。
（5）胶体金免疫技术
（6）免疫组化
免疫复合物与游离标记物分离的方法：
1、活性炭吸附法主要用于测定小分子抗原或药物。
（2）补体及检测
CRP、甘露糖结合凝集素（MBL）与IgM、IgG1/2/3免疫复合物可以激活补体经典途径，而凝集的Ig、病原微生物（内毒素等）可以激活补体替代途径。
补体结合试验含三个系统：
反应系统、补体系统、指示系统。
有五种成分参与：
已知抗体、待测抗原、绵羊红细胞、溶血素、补体。
若标本中无待测抗原，则已知抗体与溶血素-绵阳红细胞结合，激活补体，产生溶血作用，
若标本中含待测抗原，则抗体与抗原结合，不产生溶血现象。
补体成分测定：
CH50测定经典途径总补体活性，免疫溶血法测定的是单个补体的活性；
补体结合试验是用于检测某种抗原或者抗体，火箭免疫电泳可用于测定单个补体的含量。
血清补体C3含量最高，C2含量最低
抗体与相应抗原结合后，CH2补体结合位点暴露出来才能激活补体。
补体激活后C2b裂解为小片段。
补体参与的溶血试验应使用2个单位的溶血素，CH50法测定的是总补体活性，单位U/ml
经典途径激活补体的IC，可以用C1q结合试验来测定。
（3）细胞因子及其受体检测
IL-4能够促进免疫球蛋白类别转换，IL-2能促进B细胞增生、分泌抗体，同时IL-2可以促进T细胞增殖与活化。
IFN-r是由受抗原刺激后活化的T细胞产生（Th1细胞产生），抑制Th0向Th2分化。
IL-5不仅能刺激嗜酸性粒细胞增殖和分化，而且对嗜酸性粒细胞有趋化作用
IL-1、TNF-ɑ可阻止或减轻革兰阴性菌感染所致休克的发生。
IL-6常用于刺激B细胞杂交瘤细胞增殖。
IL-1、IL-6刺激肝脏分泌急性期蛋白，TNF-ɑ刺激产生IL-1、IL-6。
IL-18具有趋化活性
细胞因子多数是低分子量蛋白质、多以单体形式存在，以非特异性方式发挥作用，不受MHC限制。
（4）粘附因子与白细胞分化抗原检测
2、免疫细胞分离及检测
（一）免疫细胞分离、检测
淋巴细胞分离
1、外周单个核细胞分离
聚蔗糖-泛影葡胺分层液法最为常用
Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离方法，Percoll分离液法是一种连续密度梯度离心分离法。
2、淋巴细胞与单核细胞分离
经分离后的PBMC中主要是单核细胞与淋巴细胞，少量血小板与RBC（RBC可用NH4Cl或低渗法去除，血小板可多次离心去除）
单核细胞去除可以利用单核细胞粘附玻璃、塑料和葡聚糖的特性以及吞噬铁粉的能力去除。
对玻璃和塑料制品的粘附性：
巨噬细胞》树突状细胞》B细胞》T=RBC，常利用单核细胞这个特性将其分离。
另外也可以用Percoll连续密度梯度离心法，四层：
死细胞层（死细胞、血小板）、单核细胞层、淋巴细胞层、红细胞和粒细胞层。
3、淋巴细胞亚群的分离
E花环分离法成熟T细胞都表达CD2，即E受体（绵羊红细胞受体）
尼龙绵柱分离法利用B细胞易粘附于尼龙棉表面
补体细胞毒法剔除表达特定抗原的细胞，借助补体介导的细胞毒作用
亲和板分离利用特定抗原抗体结合
免疫磁珠
流式细胞仪分选
淋巴细胞数量检测：
正常人外周血B细胞占淋巴细胞的8%-15%，T细胞占淋巴细胞的60%-80%，NK细胞占5%-8%。
1、表面CD抗原：
所有T细胞表面均表达CD3、TCR；成熟T细胞均表达CD2；部分表达CD4/CD8。
2、微量细胞毒试验利用抗原抗体反应激活补体依赖的细胞毒作用，以此作为显示系统
3、花环试验
B细胞数量检测：
表面标志物
所有B细胞均表达SmIgM，成熟B表达SmIgM、SmIgD、CD19、CD20，B1细胞CD5+、CD23-；B2则CD5-/CD23+
B细胞表面具有IgGFc受体及补体受体，用相应抗体致敏的红细胞（EA）能与B细胞结合成EA花环，或EA与补体结合后，借助补体受体与B细胞结合成EAC花环。
B细胞表面EB病毒受体--C3d受体。
Raji细胞是由B细胞建株而来，表面有大量C3b、C1q和C3d受体，没有SmIg，利用这些受体与结合补体的循环免疫复合物结合，再加入标记的抗人球蛋白，可检测循环免疫复合物。
CD19主要表达于外周血成熟B细胞，CD5用于区分B1/B2细胞。
外周血中，未成熟B细胞表达mIgM，成熟B表达SmIgM和SmIgD，根据是否表达CD5可以将B细胞分为：
B1和B2细胞。
B1细胞表达CD5，不表达CD23；B2不表达CD5，表达CD23；B1、B2细胞都表达CD19、CD20、CD22。
B1细胞与机体的免疫调节、自身免疫病以及B细胞源性肿瘤有关。
B2细胞是执行体液免疫的主要细胞，是外周血主要的B细胞群。
CD2表达在全部T细胞和部分NK细胞，CD3表达于全部T细胞，是T细胞的共同抗原；CD4、CD8只表达于部分T细胞。
CD80主要表达在活化的B淋巴细胞表面，能与T细胞表面的CD28分子相互作用，刺激T细胞活化。
淋巴细胞功能检测：
1、T细胞增生试验，也称淋巴细胞转化试验
体外刺激T细胞增生的刺激物可分为非特异性（PHA、刀豆素、美洲商陆）和特异性（PPD和白假丝酵母菌、白喉类毒素等），PHA仅能刺激T细胞增殖，LPS仅能刺激B细胞增殖。
刀豆蛋白A、PHA、美洲商陆能刺激T
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