食用菌的实验.docx

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食用菌的实验

实验一母种培养基的制作

一、本次实验的目的和要求

学会母种培养基的配制方法，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。

二、实验内容或原理

母种培养基配制。

工艺流程：

培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面

三、需用的仪器或试剂等

仪器：

接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。

试剂：

、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。

四、实验步骤

1.培养基配方

以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。

为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。

2.培养基配制

首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。

用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。

再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。

3.分装试管

培养基配制后应趁热分装。

装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。

装管后塞上棉塞。

棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。

然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。

4.灭菌

灭菌前将水加至锅内水位标记高度。

将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5min，关闭放气阀。

当压力表指针指到0.15Kg/cm2时（灭菌所需压强）开始计时，继续维持该压强30min。

灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。

注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。

5、摆斜面

当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。

冷却后即成斜面培养基。

五、教学方式

以分组的形式进行实验、讨论

六、考核要求

掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法。

根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。

七、实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。

实验二菌种的分离与培养

一、本次实验的目的和要求掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌制作母种的基本技能。

二、实验内容或原理

本实验以组织分离为例进行菌种分离与培养，工艺流程：

种菇的选择与消毒组织块的切取菌丝培养

三、需用的仪器或试剂等

仪器：

接种箱或超净工作台、解剖刀、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯等。

试剂：

75%酒精、高锰酸钾、富尔马林等。

四、实验步骤

菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）种菇的选择与消毒选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。

种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。

组织块的切取将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上，关闭紫外灯后20min后，再开始进入接种室内进行接种。

接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。

无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。

用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面三刀半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织，将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。

菌丝培养接种后置于25℃恒温箱中培养，2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝，此时每天要检查杂菌污染情况。

培养7-10天后，菌丝即可长满斜面。

观察记载详细观察比较母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。

菌落的直径（mm）-菌种块直径（mm）试管内菌丝生长的速度=菌落生长的时间（d）观察母种菌丝的表面形态特征。

通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。

五、教学方式

以分组的形式进行实验、讨论

六、考核要求

要求组织分离成功率在50%以上。

根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。

七、实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告。

实验三原种与栽培种制作

一、本次实验的目的和要求

学会原种与栽培种培养基的配制方法，掌握原种与栽培种的接种技术，了解食用菌原种与栽培种制作的工艺流程和制作的基本技能。

二、实验内容或原理

1.原种与栽培种培养基配制

工艺流程：

培养基配料→装瓶（或装袋）→灭菌→冷却→接种

2.掌握原种与栽培种的接种操作技术

接种箱消毒→器械消毒→无菌接种→菌丝培养

三、需用的仪器或试剂等

仪器：

接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等。

试剂：

75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等。

四、实验步骤

1.配方本实验以棉籽壳为主料培养基为例。

配方为：

棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%。

2.拌料先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。

混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。

拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。

3.含水量的测定拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-64%。

4.装瓶将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋中央，边装边压实（但不得过紧），一直装到瓶肩处为宜。

5.擦瓶将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉，以免接种后污染杂菌。

6.封口用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口，再包一层防潮纸（或牛皮纸），用线绳将瓶口扎好，准备灭菌。

7、灭菌灭菌方法同母种的灭菌方法，压强为1.4-1.5Kg/cm2，1.5-2.0h

8、接种挑取母种培养基一小块，置于原种或栽培种培养基中央孔边，随即按原样封口。

9、菌丝培养接种后的原种，置于25℃的培养室培养。

3-5天后菌丝即可恢复生长。

5-7天菌丝开始伸入培养基内。

当菌丝长满瓶后，即可直接分移栽培种，栽培种菌丝长满面瓶后，需要养菌1-2周，以增加菌丝量及增强菌丝活力后，再用于生产。

10.观察记载观察原种菌丝的表面形态特征。

五、教学方式

以分组的形式进行实验、讨论

六、考核要求

掌握原种与栽培种培养基的料水比例与高压、常压蒸汽灭菌方法，要求原种与栽培种成功率在90%以上。

根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。

七、实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告。

实验四食用菌栽培技术

一、本次实验的目的和要求

学会平菇或金针菇栽培袋的的制作方法，掌握其出菇管理技术。

二、实验内容或原理

1.平菇或金针菇栽培袋制作

工艺流程：

栽培原料配制→装袋→灭菌→冷却→搬入接种室→接种室消毒→接种→适温培养菌丝

2、出菇管理：

控温→调温→通风→采收→补水

三、需用的仪器或试剂等

仪器与设备：

接种箱、高压灭菌锅或常压灭菌灶、接种铲、酒精灯。

试剂：

75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉等。

四、实验步骤

1.配方本实验以棉籽壳为主料培养基为例。

配方为：

棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%。

2.拌料先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。

混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。

拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。

3.含水量的测定拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-64%。

4.装袋将拌好的培养料装入塑料袋中央，边装边压实（但不得过紧），一直装到2/3长为宜。

5.套环用双套环或纤维绳扎实袋口，准备灭菌。

6.灭菌灭菌方法同原种栽培种的灭菌方法。

7..接种挑取栽培种培养基一小块，置于栽培袋中，随即按原样封口。

8.菌丝培养接种后的栽培袋，置于培养室培养。

3-5天后菌丝即可恢复生长。

5-7天菌丝开始伸入培养基内。

当菌丝长满袋后，移入菇房。

9.出菇管理控温、调温、通风、采收、补水

五、教学方式

以分组的形式进行实验、讨论

六、考核要求

掌握平菇或金针菇栽培袋的制作技术，要求制袋成功率在95%以上。

根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。

六、实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告。

实验五食用菌栽培与加工现场参观

一、本次实验的目的和要求

通过参观食用菌栽培与加工现场，增强食用菌规模化生产或工厂化生产与食用菌加工的感性认识。

二、实验内容或原理

参观金针菇、平菇、香菇等食用菌大型菇场或加工厂。

三、需要的实验材料

无

四、实验步骤

参观→收集资料→总结、归类→撰写实验报告→课堂讨论

实验六食用菌电化教学

一、目的要求

通过观看食用菌生长发育和栽培新技术的录像片，让学生观看食用菌菌丝体及子实体生长发育的动态过程，了解当前不同地区食用菌栽培的特色，学习食用菌栽培新技术。

二、实验仪器

有关食用菌菌丝及子实体生长发育和栽培技术的光盘或DVD。

三、方法步骤

在放映前，指导教师先对有关食用菌菌丝、子实体生长特点和栽培技术提出几个问题，请学生在观看时注意记录，观看完毕之后，针对问题进行讨论。